索拉菲尼与BrMC合用对SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡的影响

目的 :研究索拉菲尼(SO)、8-溴-7-甲氧基白杨素(Br MC)及两者合用对SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡的影响。方法 :不同浓度Br MC、SO及两者合用处理体外培养的SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot分析NF-κB(p65)蛋白表达。结果 :SO(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)与Br MC联合处理SMMC-7721细胞系球形成细胞24h,相比于SO单独用药和Br MC单独用药对照组,凋亡率显著增加,同时,NF-κB(p65)蛋白的表达明显下调。结论 :Br MC增强SO诱导SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡作用,其机制涉及下调NF-κB(p65)蛋白表达。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素抑制肝癌细胞NF-κB表达的研究

目的：研究5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素（ADFMChR）抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡作用及机制。方法：体外培养SMMC-7721细胞,MTT比色法测定ADFMChR对SMMC-7721细胞增殖活性的影响;Western Blotting法分析ADFMChR对SMMC-7721细胞NF-kB蛋白表达活性的影响。结果：MTT比色法结果显示ADFMChR有效抑制SMMC-7721细胞增殖活性,呈剂量依赖性,其IC50值为3.56μM;Western Blot分析证实ADFMChR下调NF-κB蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。结论：ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,其机制与NF-κB蛋白表达有关。     

吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 探讨吲哚-3-甲醇(13C)对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的I3C(100、150、200、250、300、350 μmol/L)处理细胞48 h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白.结果 I3C能够抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250 μmol/L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol/L时,大量细胞凋亡.I3C浓度高于200 μmol/L时CytC、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,且随着I3C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加.结论 I3C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖并诱导其发生凋亡.     

他克莫司对5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制的初步探讨

目的:观察他克莫司(FK506)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721;应用流式细胞仪检测5-FU及联合FK506对细胞凋亡和细胞周期的影响;TransAM NF-κB核转录因子活性检测试剂盒检测NF-κB p65活性;细胞免疫组织化学检测NF-κB p65激活后入核情况;免疫印迹分析Cyclin D1蛋白表达差异.结果:5-FU可诱导肝癌细胞凋亡,其作用随浓度的增加而增强(P<0.05);随着5-FU用药浓度的增加,S期细胞比例和细胞增殖指数(PI)也增加; 5-FU可激活NF-κB而入核,Cyclin D1蛋白的表达逐渐增强.FK506预处理增强了5-FU诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,同时S期细胞比例和PI也减少; FK506预处理可抑制NF-κB入核,并可下调Cyclin D1基因的表达.结论:FK506能够协同5-FU诱导肝癌细胞株凋亡,增强肝癌细胞株对5-FU的敏感性,这种作用可能是通过抑制NF-κB活性进而下调Cyclin D1基因的表达,导致G0/G1期停滞而实现.     

白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞侵袭与转移的影响

目的 探讨白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞株侵袭和转移的影响。 方法 以人肝癌细胞株SMMC-7721细胞为研究对象,分为白头翁皂苷D组(浓度为11.9 μg /L)、索拉非尼组(浓度为2.15 μmol/L)、联合组(白头翁皂苷D 11.9 μg/L+索拉非尼2.15 μmol/L)以及对照组(普通培养液)。通过MTT法、Transwell小室实验观察白头翁皂苷D、索拉非尼单药和联合对SMMC-7721细胞的侵袭和转移的抑制作用,并用免疫组织化学方法检测CD_44V6、血管内皮生长因子C(VEGF-C)、基质金属蛋白酶MMP-9基因蛋白表达的影响。 结果 MTT结果显示,白头翁皂苷D、索拉非尼单药和联合对SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,且24 h的抑制率都<15%;Transwell小室实验结果显示,联合组的黏附抑制率与单药组相比,具有协同抑制作用,但未呈现时间依赖关系;联合组的侵袭抑制率和迁移抑制率均显著高于单药组(P<0.01);免疫组织化学结果表明,联合组在下调CD_44V6、VEGF-C、MMP-9方面均高于单药组(P<0.05)。 结论 白头翁皂苷D和索拉非尼联合可协同抑制SMMC-7721细胞侵袭和转移,联合效果整体优于单药。     

甘草黄酮诱导肝癌ＳＭＭＣ-７７２１细胞凋亡及其对相关蛋白ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达的影响

目的:探讨甘草黄酮(GF9)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GF9对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,Hoechst染色法和电镜观察GF9诱导细胞凋亡的形态变化,流式细胞仪检测GF9诱导的细胞凋亡率,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白survivin和pro-caspase-3表达水平的变化.结果:GF9可抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈时间剂量效应;400 μmol/L GF9可诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;随着GF9作用时间的延长,survivin和pro-caspase-3表达下调.结论:GF9能诱导SMMC-7721细胞凋亡,这可能与GF9能够引起抑制凋亡蛋白survivin的下调有关.     

地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株的去甲基化机制研究

目的 探讨地西他滨（Decitabine,DAC）联合三氧化二砷 (Arsenic Trioxide ,AS2O3)对肝癌SMMC-7721细胞株的增殖抑制作用,了解其可能的去甲基化机制。方法 采用MTT法观察药物对肝癌SMMC-7721细胞株的增殖抑制作用。采用RT-PCR方法检测P15INK4B、甲基转移酶,DNMT1、DNMT3A、DNMT3B（DNA methyltransferases,DNMT）的mRNA的表达。结果 地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株的生长抑制具有协同性,并具有时间和剂量依赖性。地西他滨和As2O3作用细胞72小时后P15INK4B抑癌基因表达增强,甲基化转移酶表达下降,联合组同单药组比较具有统计学意义（P&amp;amp;amp;amp;amp;lt;0.05)。结论 地西他滨联合三氧化二砷可以抑制肝癌SMMC-7721细胞株的增殖,其机制可能与抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B,增强p15抑癌基因表达有关。     

miR-1-3p抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移并诱导其凋亡

目的 探讨在肝癌细胞SMMC-7721中微小RNA(miR)-1-3 p的表达变化对其增殖、迁移和凋亡的影响及miR-1-3p的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1-3p和CAAP1的相对表达量;SMMC-7721细胞按miR-1-3p过表达载体(miR-1-3p组)、pcDNA3组、miR-1-3p inhib-itor组和NC inhibitor组(对照组)分别转染,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8实验检测细胞增殖能力,克隆形成实验观察并比较组间克隆形成率,流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡及CAAP1蛋白表达,划痕和Transwell实验观察SMMC-7721迁移和侵袭.利用miRDB、TargetScan、miRanda数据库预测miR-1-3 p靶基因,双荧光素酶报告验证miR-1-3和CAAP1靶向性.结果 miR-1-3p在SMMC-7721细胞中的表达明显低于正常肝细胞LO2,差异有统计学意义(P<0.05);miR-1-3p上调,SMMC-7721增殖、迁移和侵袭能力显著下降,凋亡显著增强,而下调miR-1-3p的表达则作用相反;miR-1-3p和CAAP1具有靶向性;miR-1-3p过表达明显抑制CAAP1表达.结论 miR-1-3p上调可能通过与CAAP1的3'-UTR结合抑制SMMC-7721细胞增殖、侵袭、迁移.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人肝癌细胞株SMMC7721增殖及DAPK mRNA表达的影响

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖以及对死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase,DAPK)基因mRNA表达水平的影响。方法:用不同浓度(0.5,5.0,50.0μmol/L)的5-Aza-CdR对SMMC7721细胞处理后,采用MTT法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR法检测各组细胞DAPK mRNA的表达水平。结果:5-Aza-CdR对肝癌细胞株SMMC7721生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系(F=242.40,P<0.01);半定量RT-PCR结果显示,MMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平很弱,采用不同浓度5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞72h后,SMMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(F=360.41,P<0.01)。结论:5-Aza-CdR可诱导MMC7721细胞DAPK mRNA表达,并抑制SMMC7721细胞增殖。     

地西他滨联合三氧化二砷对肝癌SMMC-7721细胞株P15~(INK4B)及甲基化转移酶表达的影响

目的探讨地西他滨(DAC)和三氧化二砷(As_2O_3)对肝癌SMMC-7721细胞株P15~(INK4B)抑癌基因及甲基化转移酶表达的影响。方法 MTT方法检测地西他滨和三氧化二砷对SMMC-7721细胞株的抑制率。RT-PCR方法检测P15~(INK4B)、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达。结果 2.0mmol/LDAC和2.0μmol/L As_2O_3联用,肝癌SMMC-7721细胞株细胞增殖抑制率均较4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组增强[(72h:(69.9±1.2)%比(33.8±0.7)%、(47.9±2.5)%,P0.05)]。地西他滨和As_2O_3作用细胞72h后P15~(INK4B)抑癌基因表达增强,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组比较,差异有统计学意义[(0.74±0.14)比(0.57±0.15)、(0.56±0.11),P0.05];甲基化转移酶表达水平下调,联合组同4.0mmol/LDAC、4.0μmol/L As_2O_3单药组比较,差异有统计学意义[DNMT3A:(0.28±0.11)比(0.36±0.13)、(0.41±0.13),P0.05;DNMT3B:(0.32±0.13)比(0.39±0.12)、(0.45±0.16),P0.05;DNMT1:(0.31±0.15)比(0.44±0.19)、(0.44±0.12),P0.05]。结论地西他滨和三氧化二砷可能通过抑制肝癌SMMC-7721细胞株甲基化转移酶,增加P15~(INK4B)基因表达来抑制肝癌细胞增殖。     

5-Aza-CdR对人肝癌细胞株SMMC7721生长及XAF1基因启动子异常甲基化的影响

目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响以及对具有促凋亡作用的X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子1(XAF1)的基因表达和甲基化的影响.方法 用不同浓度的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞后,RT-PCR法检测XAF1 mRNA的变化,MSP检测XAF1基因甲基化的变化,用MTT法检测5-Aza-CdR对SMMC7721细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测其对SMMC7721细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率的影响.结果 经过5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理后,RT-PCR检测显示,SMMC7721中XAF1mRNA表达比对照组增加,差异有统计学意义(分别是P=0.034,P=0.002).MSP检测结果XAF1的甲基化得到了逆转.用1、5、10μmol/L的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞24、48、72 h后,MTT检测到细胞的生长受到抑制,且呈时间和剂量依赖性.流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率均明显增加,5、10μmol/L组细胞凋亡率分别为(7.23±0.92)%、(12.62±1.30)%,与对照组(3.53±0.40)%相比差异有统计学意义(分别是P=0.013,P=0.001).其细胞周期阻滞于S期.结论 5-Aza-CdR抑制SMMC7721细胞的生长,使XAF1基因异常甲基化状态得到逆转,XAF1基因转录水平上调,为其应用于肝癌治疗提供了实验依据.     

5-Aza-CdR对人肝癌细胞RASSF1 A甲基化的影响

目的：探讨5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞RASSF1A基因启动子甲基化以及mRNA表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分别用0.5、5.0、30.0、50.0μmol/L的5-Aza-CdR与之孵育72 h,甲基化PCR检测处理前后启动子甲基化水平,RT-PCR检测RASSF1A mRNA表达。结果随着药物浓度的增加,甲基化RASSF1A含量逐渐降低,而未甲基化产物逐渐增高;5-Aza-CdR处理后,RASSF1A mRNA的含量随之增高。结论5-Aza-CdR可逆转SMMC-7721细胞株细胞中基因甲基化修饰状态。     

EFFECT OF 5-AZA-CDR ON CELL PROLIFERATION AND MRNA EXPRESSION OF DAPK IN HUMAN HEPATOMA CELL LINE SMMC7721 CELLS

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖以及对死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase,DAPK)基因mRNA表达水平的影响.方法:用不同浓度(0.5,5.0,50.0 μmol/L)的5- Aza-CdR对SMMC7721细胞处理后,采用MTT法检测细胞的增殖情况;半定量RT- PCR法检测各组细胞DAPK mRNA的表达水平.结果:5-Aza-CdR对肝癌细胞株SMMC7721生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系(F =242.40,P＜0.01);半定量RT- PCR结果显示,MMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平很弱,采用不同浓度5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞72 h后,SMMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(F=360.41,P＜0.01).结论:5-Aza-CdR可诱导MMC7721细胞DAPK mRNA表达,并抑制SMMC7721细胞增殖.     

三氧化二砷联合氟尿嘧啶对人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷联合氟尿嘧啶（5-FU）对肝癌细胞凋亡相关因子Bcl—2和Bax表达的影响。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞株,将细胞分为四组,即AS2O3组、5-FU组、As2O3＋5-Fu组及对照组,采用免疫细胞化学法检测各组SMMC-7721细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果As2O3组、5-Fu组、As2O3＋5-FU组细胞Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0．01）;联合用药组细胞Bcl-2蛋白表达较单用药组明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0．01）。结论As2O3联合5-FU可下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,从而诱导肝癌细胞凋亡。     

DNA去甲基化药物对肝癌SMMC-7721细胞株IGF2印迹状态及表达的影响

目的:研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌SMMC-7721细胞株IGF2印迹状态及表达的影响。方法:用终浓度为10μmol/L的5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理培养的SMMC-7721细胞,不含5-Aza-CdR培养液培养的细胞作为对照组;IGF2基因的印迹状态使用PCR-RFLP方法检测;IGF2基因的表达使用半定量RT-PCR确定。结果:SMMC-7721细胞中IGF2基因处于母源印迹状态,为杂合子;5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理后IGF2基因的mRNA表达量降低,电泳条带的半定量分析显示处理和对照之间的差异具有统计学意义(P<0.01),RFLP结果未见印迹丢失。结论:胞嘧啶去甲基化药物能够改变SMMC-7721细胞中IGF2的甲基化状态,降低IGF2mRNA的表达量,但并不引起IGF2基因完全失表达。     

miR-143调控DNMT3B表达对肝细胞癌耐阿霉素敏感性的影响

目的:构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,探讨miR-143在调控肝细胞癌耐阿霉素中的作用机制。方法:采用逐步递增阿霉素浓度法构建耐阿霉素细胞株SMMC-7721/ADM,评估其IC₅₀值;采用荧光定量PCR技术检测miR-143、DNA甲基转移酶3B （DNMT3B）、多耐药基因1（MDR1）变化、Bax和Bcl-2 mRNA表达水平;Western blotting检测DNMT3B蛋白表达;通过转染miR-143 mimics上调耐药细胞株SMMC-7721/ADM中miR-143表达水平后,检测耐药细胞IC₅₀、侵袭能力、细胞凋亡、DNMT3B、MDR1变化。应用脂质体-2000瞬时转染miR-143 mimics于耐药细胞株,观察上述指标变化。结果:成功构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM,IC₅₀值升高78.97倍（P<0.01）,miR-143表达量降低,DNMT3B、MDR1、Bax、Bcl-2表达量升高（P<0.05~P<0.01）。转染miR-143 mimics后耐药细胞株IC₅₀值降低57%,侵袭能力下降,细胞凋亡增加,DNMT3B表达减少,MDR1 mRNA表达减少（P<0.01）。结论:miR-143可能通过降低DNMT3B表达提高肝细胞癌对阿霉素的敏感性。     

奥曲肽联合特异性COX-2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用

目的:研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398和生长抑素类似物奥曲肽联合使用对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖、凋亡的影响。方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力改变,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率。结果:(1)MTT法显示NS-398和奥曲肽均在一定范围内呈浓度和时间依赖性地抑制SMMC-7721细胞的增殖;联合用药组抑制率显著高于单用NS-398或奥曲肽组(P<0.01),金正均方法显示q>1.15,提示两药联合应用有协同抑制肝癌细胞增殖效应,并随着作用时间延长而增强。(2)流式细胞仪测定显示,NS-398、奥曲肽和两药联合作用于SMMC-7721细胞24 h后,联合用药组细胞凋亡率显著高于单一用药组(P<0.01)。结论:NS-398和奥曲肽呈剂量、时间依赖性地抑制SMMC-7721细胞增殖,促进SMMC-7721细胞凋亡,两者联合应用具有协同作用。     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人胃癌细胞株BGC803生长及死亡相关蛋白激酶基因表达的影响

目的：探讨去甲基化药物5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人胃癌细胞BGC803增殖、凋亡及对死亡相关蛋白激酶（DAPK）mRNA表达水平的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理BGC803细胞,设立不含5-Aza-CdR的对照组及3个实验组：5-Aza-CdR 1μmol/L组、5-Aza-CdR 5μmol/L组、5-Aza-CdR 10μmol/L组。CCK-8检测细胞的增殖情况,AnnexinⅤ/PI双染及流式细胞术检测药物处理后细胞凋亡的情况,RT-PCR检测用药前后DAPK mRNA的表达水平变化。结果实验组BGC803细胞增殖速度显著低于对照组,细胞凋亡率显著升高（P〈0.05）。RT-PCR结果显示,BGC803细胞中DAPK基本无表达,5-Aza-CdR处理后,细胞中DAPK mRNA表达量显著高于对照组（P〈0.05）。结论5-Aza-CdR抑制BGC803细胞增殖,并促进细胞凋亡,可能与其诱导DAPK基因表达有关。     

紫草素通过抑制PKM2/PHD3/HIF-1α通路诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法 体外培养人肝癌细胞（SMMC-7721）和正常肝细胞（L-02）,实验分为对照组和紫草素给药组（4、8、16 μmol/L）。 采用3（-4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐 3（-4,5-二甲基噻唑-2-yl）-2,5-二苯基四氮唑溴盐,MTT法检测细胞活力,试剂盒检测三磷酸腺苷（ATP）和乳酸水平,免疫共沉淀和免疫荧光双染实验明确M2型丙酮酸激酶（PKM2）、脯氨酰酸羟化酶3（PHD3）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）三者之间的作用关系及蛋白表达情况;Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot观察PKM2、PHD3、HIF-1α 及凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达水平;采用小干扰核糖核酸（siRNA）干扰法建立 PKM2低表达的人肝癌SMMC-7721细胞,Western blot检测 PKM2低表达对人肝癌SMMC-7721细胞中的 PHD3、HIF-1α 蛋白表达水平的影响。结果 紫草素对SMMC-7721和L-02细胞的半抑制浓度（IC50）分别是8.041 μmol/L与31.75 μmol/L,与对照组相比紫草素能抑制肝癌SMMC-7721 细胞中 PKM2、HIF-1α和PHD3蛋白表达及PKM2、HIF-1α入核（P<0.05）。免疫共沉淀和免疫荧光双染实验证实,紫草素可以抑制PKM2/PHD3/HIF-1α复合体形成（P<0.05）,并且抑制有氧糖酵解产物乳酸和ATP含量（P<0.05）。与对照组相比,PKM2敲低后PHD3和HIF-1α表达明显降低（P<0.05）;与未处理组相比,紫草素处理后凋亡率明显升高且凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达升高,Bcl-2表达下降（P<0.05）。结论 紫草素靶向PKM2调控PHD3/HIF-1α复合物,从而抑制肝癌细胞的有氧糖酵解,破坏其供能途径,导致肝癌细胞凋亡。     

西奥骨化醇抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化

目的 研究西奥骨化醇(seocalcitol,EB1089)对TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用.方法 用不同浓度维生素D类似物EB1089(1、10、100、1 000 nmol/L)作用于肝癌细胞SMMC-7721 6、12、24、48 h,筛选出具有统计学意义的作用浓度和时间.将肝癌细胞SMMC-7721分为4组(EB1089组、TGF-β1组、EB1089+TGF-β1组和空白对照组),分别干预48 h.用相差倒置显微镜观察细胞形态变化;通过实时RT-PCR和Western blot分别检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达情况;迁移实验和侵袭实验检测EB1089对肝癌细胞SMMC-7721侵袭和迁移能力的影响.结果 TGF-β1作用后肝癌细胞SMMC-7721呈现长梭形,并伸出较多触角,EB1089能明显改善这种形态变化;EB1089可有效升高TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白低表达(P＜0.05),同时降低N-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达(P＜0.05);EB1089对TGF-β1诱导的细胞侵袭、迁移具有抑制作用(P＜0.05).结论 维生素D类似物EB1089能有效抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化现象和侵袭、迁移能力.