用DNA序列分析鉴定一种吸虫囊蚴的分类地位

目的 从浙江华溪蟹(Sinopotamon chekiangense)体内检出一种大型囊蚴，对其ITS2基因进行序列测定与分析比较。为鉴定虫种提供依据。方法 根据基因保守区域序列，合成上下游引物。用PCR技术从囊蚴基因组DNA中扩增ITS2基因。用双脱氧末端终止法进行双向测序。测序结果用GENEDOC进行同源性分析。应用软件TREECCN以最大似然法构建种系发生树。结果 PCR扩增得到大型囊蚴ITS2基因片段。该基因全长432bp,无内含子，编码138个氨基酸。通过用GENEDOC软件检索GenBank基因库中已有的ITS2基因并进行同源性比较，表明该大型囊蚴的ITS2基因序列与棘口吸虫(Echinastoma paraensei)、斜睾科吸虫(Plagiorchis elegans;Plagiorchis maculosus;Skrjabinoeces similes)共四种吸虫有较近的亲缘关系。结论 根据ITS2基因序列数据经TREECCN软件分析得到的系统发生关系树显示该囊蚴明显不属并殖科，而与棘口科，斜睾科吸虫的分子进化关系密切。该囊蚴对人体的致病性值得进一步研究。     

PCR直接测序法在脓肿分枝杆菌鉴定中的应用

目的探讨聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）与DNA测序技术鉴定脓肿分枝杆菌的效果。方法利用细菌16S r RNA基因通用引物PCR扩增疑似分枝杆菌的16S r RNA基因的DNA片段并进行DNA测序分析。DNA测序获得序列经生物信息学比对分析获得相关分枝杆菌的信息;针对相关分枝杆菌分别设计非同源区域特异性引物对1 500 bp的克隆DNA片段扩增验证。结果细菌16S r RNA基因通用引物扩增获得约1 500 bp的DNA片段,但DNA测序仅获得其中部分DNA序列约296 bp;部分DNA序列经生物信息学比对分析后获得四种同源性高达98%的分枝杆菌信息,并且四种分枝杆菌的特异性引物对1 500 bp的克隆产物进行扩增后仅在脓肿分枝杆菌中获得特异性PCR产物。结论疑似结核患者体内的抗酸染色阳性菌为非结核分枝杆菌中的脓肿结核分枝杆菌,并且PCR直接测序法可快速鉴定细菌的种属。     

中国农大小型猪胰淀素基因部分未知序列扩增与分析

目的扩增中国农大小型猪IAPP基因序列,分析其序列结构特点。方法提取中国农大小型猪血液基因组DNA,设计3对特异性引物进行PCR扩增,产物鉴定、测序和同源性比对分析。结果成功扩增出中国农大小型猪IAPP基因的1028bp的序列。结论经同源性比对分析显示,中国农大小型猪与人的IAPP基因的同源性为77%。     

广地龙特异性引物序列的设计及其混伪品的鉴别

目的?通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法?提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定。对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察。结果?COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750?bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r。在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574?bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带。结论?设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法。      

Bcl-2shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的:应用分子克隆技术,针对人bcl-2目的基因设计3个siRNA靶点和一个阴性对照序列,构建4对shRNA重组慢病毒表达载体,并进行测序验证鉴定。方法:以设计的有效靶序列进行引物合成,将单链引物退火成双链oligo序列,连接入经Age I和EcoR I双酶切线性化的慢病毒RNA干扰载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性转化子,采用PCR扩增和DNA测序分别鉴定阳性克隆。结果:PCR扩增产物经凝胶电泳后阳性克隆得到335bp条带,阴性克隆得到298 bp条带,DNA测序结果证实其含有设计合成序列。结论:成功构建4对bcl-2shRNA重组慢病毒表达载体,为研究靶向bcl-2 siRNA对肿瘤细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及基因治疗研究奠定了实验基础。     

人珠蛋白MAR序列的克隆与表达载体pCAT-MAR的构建

目的克隆人β-珠蛋白核基质结合区(matrix attachment regions,MAR),构建包含MAR及报告基因CAT的哺乳动物载体pCAT-MAR。方法酚/氯仿抽提、乙醇沉淀提取人基因组DNA,根据GenBank报道的序列设计引物PCR扩增人β-MAR,琼脂糖凝胶电泳鉴定,测序,软件分析其序列特征。限制酶酶切,连接至pCAT3-control载体上构建pCAT-MAR载体。结果琼脂糖凝胶电泳PCR扩增出770bp条带,序列和报道的序列相似性为99.9%,克隆的DNA片段具备典型的MAR特征。酶切及琼脂糖凝胶电泳证明所构建的pCAT-MAR载体正确。结论PCR克隆了人-β珠蛋白MAR序列,成功构建了包含MAR的表达载体pCAT-MAR。     

Channel catfish重组激活基因克隆与鉴定

目的尝试用简并引物扩增序列未知的channel catfish基因组DNA中ragl基因的片段并测序,为ragl基因的早期进化模式和遗传学变异情况的研究提供直接的证据.方法基于ragl基因的高度保守设计简并引物,PCR扩增channel catfish基因组DNA中ragl基因的片段,TA克隆并双向测序.将所得序列资料拼接,用多种生物信息学方法分析其ORF、内含子、与其它物种ragI基因及Ragl蛋白的相似性,并做多序列比较和系统进化树分析.结果扩增出3条chan-nel catfish ragl基因的DNA片段.从拼接后的序列中找到一2 235bp的ORF和一293bp的内含子,所得序列与其它物种ragl基因的相似程度高(多大于70%),去除内含子后的channel catfish ragl基因序列与zebrafish、rainbow trout、bull shark的ragl基因cDNA全序列碱基一致的位点占43.9%,自第1 352位碱基至2 925位碱基为53.1%,而自第1位碱基至1 351位碱基为33.2%,有非常显著的差异(P＜0.01).结论用简并引物成功扩增出channel catfish ragl基因的DNA片段.序列在GenBank中的登记号是:AY423858(去除内含子序列),AY423859.ragl基因进化缓慢,高度保守,不同物种ragI基因的变异相对集中在氨基末端的区域.系统进化树分析显示了13种硬骨鱼在进化上关系的亲疏.     

斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段的克隆和序列分析

目的：克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段，获得其序列，并进行序列分析。方法：利用简并引物，进行RT-PCR，扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm-T载体，进行鉴定、测序；利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列，并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。结果：RT-PCR扩增出了-500bp左右的cDNA片段，对阳性克隆测序后获得其核酸序列，长498bp。推导出的氨基酸序列长166；氨基酸序列的同源性分析显示，该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性，组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。结论：本实验克隆获得了斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱近酸蛋白酶cDNA片段。     

弓形虫529 bp重复序列基因的PCR阳性质控质粒的构建

目的：构建含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒,为基于该基因的弓形虫病分子生物学诊断建立标准阳性对照品。方法：以弓形虫RH株基因组DNA为模板,对529 bp的基因片段进行扩增,将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转入大肠埃希菌DH-5α中,提取重组质粒PCR及测序鉴定。以弓形虫529 bp基因为靶基因设计的检测引物,扩增弓形虫基因组DNA及质粒DNA。结果：PCR产物序列与GENBANK中弓形虫529 bp基因序列完全一致。以弓形虫基因组DNA和质粒DNA为模板,成功扩增出预期的249bp基因片段。结论：成功构建可作为标准阳性对照品的含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒pMD-18-Tox,为经济实用的弓形虫诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

应用DARMS排除肾上腺脑白质营养不良分子诊断中假基因的干扰

目的：应用扩增阻滞突变系统（ARMS）排除ABCD1假基因的干扰．对肾上腺脑白质营养不良（ALD）家系进行基因突变分析。方法：按ARMS引物设计原则设计上游引物（正常引物、突变引物）和下游公共引物，对家系成员的基因组DNA分别进行PCR扩增。结果：R617C突变患者及其母亲的突变引物均扩增出特异性条带（107bp），患者父亲和对照则未见条带．在基因组DNA水平证实了R617C突变的存在。结论：“DARMS”方法可以快速、有效地排除假基因干扰。     

血液透析用水——水处理系统的监测

当前大多数医院对血液透析用纯净水的水处理设备的日常运行状况及产出水的质量缺少必要的实时监控.本文从理论和实践给出需要实时监控的具体指标参数限值,对可操作性很有指导意义.     

广州市水源水基本情况分析

目的 通过调查广州市市政自来水的水源水中的基本污染物质和霍乱弧菌存在的情况,为监督管理等提供科学依据.方法 对广州市2007-2009年市政自来水水厂的水源水的检测结果进行整理分析,按GB3838-2002<地表水环境质量标准>Ⅲ类进行分析评价.结果 广州市市政水厂水源水监测项目中,霍乱弧菌、pH值和阴离子表面活性剂的合格率为100%,耗氧量、氨氮、溶解氧和耐热大肠菌群合格率分别为92.11%、27.83%、8.57%和7.83%.枯水期水源水氨氮的合格率明显低于丰水期,SD水道水源水监测项目中的溶解氧、氨氮和耐热大肠菌群合格率明显高于其余河道水源水.结论 广州市市政自来水的SD水道水源水、LX河水源水、ZJ航道水源水和DJ北干流水源水霍乱弧菌方面目前还具有安全的保证,水源水可能受到有机物、粪便等的污染,应重点加强水源防护.     

PET回旋加速器水冷却系统水电导率的控制

文章讨论了PET回旋加速器水冷却系统中有效控制水电导率的方法.     

水处理系统的结构、原理及对血透用水质量的影响

本文阐述了血液透析用水处理系统各环节的结构及原理,以及对血液透析质量的影响.设计合理的水处理系统,并定期做好冲洗消毒及填料更换.是保证透析用水水质合格的关键所在,也是保证血液透析质量的一个必要因素.