疟疾疫苗研制的复杂性

由于受各种因素如疟原虫有多个时期,每个时期的多种抗原,而每个抗原具有多个表位,还有些抗原有多个等位基因,相同抗原又有多种结构形式,免疫系统有多种作用因子,而不同宿主的免疫反应不同的影响,以致疟疾疫苗的研制进展缓慢。本文着重介绍了疟疾疫苗在研制中面临的困难。     

C5a/C5aR通路对约氏疟原虫增殖和小鼠生存的影响

目的观察C5a/C5aR通路对约氏疟原虫17XL（P.y17XL）的增殖及其对BALB/c小鼠致死率的影响。结论将实验小鼠分为正常BALB/c组和C5aR-/-BALB/c组,每组5只,相同剂量的P.y17XL（2×105）分别感染正常BALB/c组小鼠和C5aR-/-BALB/c组小鼠,于感染后0、2、4和6d观察两组小鼠原虫血症和存活率的变化,并且采用ELISA检测感染P.y17XLBALB/c小鼠血清中C5a的水平。结果与正常组小鼠相比,C5aR-/-组小鼠生存期缩短,P.y17XL在C5aR-/-组小鼠的原虫血症较野生株小鼠高（P〈0.05）,而P.y17XL感染小鼠的血清中C5a含量低于未感染的小鼠。结论 C5a/C5aR能够抑制P.y17XL的增殖,并能延长感染小鼠的生存期。     

蚊期和红内期持续表达绿色荧光蛋白的重组约氏疟原虫

目的 构建蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白（GFP）的约氏疟原虫BY265株。 方法 用SacⅡ酶酶切含有伯氏疟原虫ssu-rrna基因和GFP基因的重组质粒pl0017使之线性化,用电转化的方法将该重组质粒转化入红内期约氏疟原虫BY265株,获BY265-EGFP重组疟原虫,尾静脉注射感染昆明小鼠,24～30 h后用乙胺嘧啶饲喂小鼠5～6 d,鼠尾静脉采血涂片观察原虫感染率。以疟原虫基因组DNA为模板,PCR鉴定转染重组质粒pl0017的约氏疟原虫。斯氏按蚊叮咬感染BY265-EGFP重组疟原虫的小鼠,按蚊血餐后第7天和第16天解剖蚊胃和唾液腺,观察疟原虫能否在蚊体内正常发育。 结果 荧光显微镜观察到呈绿色荧光的红内期各期形态正常的约氏疟原虫。PCR检测结果表明,GFP和ssu-rrna基因已成功整合到约氏疟原虫基因组中。按蚊感染实验证实重组BY265株能在蚊体内正常发育。 结论 构建了蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白的约氏疟原虫。     

肿瘤细胞表面TLR在促肿瘤发展中的作用和机制

自Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)发现以来,大量的研究主要集中于TLRs在天然免疫反应和调节适应性免疫中发挥的作用和机制。然而,近年来发现,除了表达于免疫系统的各种细胞外,TLRs还表达于肿瘤细胞表面,于是人们对肿瘤细胞TLRs在促进肿瘤发展中的作用和机制进行了探讨,发现TLRs能通过免疫逃避,以及促进肿瘤细胞存活、增殖和迁移等机制促进肿瘤发生和发展。因此,本文就肿瘤细胞上TLR在促进肿瘤中所发挥的作用及其机制进行综述。     

不同种鼠对实验脑型疟发生的影响研究

目的比较昆明小鼠和C57BL/6小鼠作为种鼠对实验脑型疟模型的影响。方法分别以伯氏疟原虫ANKA株感染C57BL/6小鼠和昆明小鼠作为传代用种鼠,当种鼠原虫率为5%～15%时接种子代C57BL/6小鼠,观察两组小鼠原虫率、脑型疟发生率以及死亡率。同时,通过脑组织切片和脑部淋巴细胞的流式检测,观察两组发生脑型疟小鼠的脑部微血管中感染疟原虫红细胞和CD8＋T细胞的粘附情况,另外,通过感染CD8＋TKO小鼠,证实CD8＋T细胞在两组小鼠发生脑型疟中的作用。结果用昆明小鼠作为种鼠的实验组的原虫率和脑型疟发生率均明显高于用C57BL/6小鼠作为种鼠的实验组,发生脑型疟小鼠的脑部组织切片发现,脑部微血管可见明显的感染疟原虫红细胞的粘附和CD8＋T淋巴细胞浸润;而用昆明小鼠作为种鼠感染CD8＋T细胞缺失的C57BL/6小鼠并不能诱导实验脑型疟的发生。结论与C57BL/6小鼠相比,昆明小鼠作为种鼠的实验组的脑型疟发病率更高,而且感染疟原虫红细胞和CD8＋T细胞在脑部微血管内的粘附也是该脑型疟发生的主要因素,因此,更适合用于实验脑型疟模型的建立及其机制的探讨。     

疟原虫细胞质rRNA基因及其在疟疾诊断和监测中的应用

本文对疟原虫细胞质rRNA基因的特点、rRNA基因期特异性表达机制及其在疟疾诊断和监测中的应用作一概述。     

C5a/C5aR信号在约氏疟原虫肝期发育及遗传减毒子孢子诱导小鼠保护性免疫中的作用

目的探讨C5a/C5a R信号在约氏疟原虫肝期自然感染和遗传减毒子孢子诱导小鼠保护性免疫中的作用。方法遗传减毒子孢子免疫Balb/c小鼠2、4、6 d后,ELISA检测补体C5a的活化情况;然后利用C5a R-/-Balb/c小鼠,通过定量PCR检测和吉姆萨染色比较子孢子攻击免疫或未免疫2种小鼠的肝脏虫荷和原虫血症。结果子孢子攻击免疫或未免疫的野生与C5a R-/-小鼠的肝脏虫荷和原虫血症之间无统计学差异(P>0.05)。结论遗传减毒子孢子免疫能够成功诱导小鼠产生完全保护性免疫,但补体C5a R缺失对减毒子孢子的免疫保护效果和肝期自然感染均无明显影响,说明C5a/C5a R信号通路并不参与调节约氏疟原虫肝期发育和遗传减毒子孢子诱导小鼠产生的保护性免疫。     

约氏疟原虫环子孢子蛋白对TNF-α刺激人肝癌细胞株核转录因子活化的抑制作用

目的 观察约氏疟原虫环子孢子蛋白（CSP）对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激人肝癌细胞株HepG2核转录因子-κB （NF-κB）活化的影响。 方法 以约氏疟原虫BY265株子孢子总RNA为模板,用RT-PCR扩增CSP基因的编码区序列并克隆至pFLAG-CMV8载体,构建重组质粒pFLAG-CMV8-CSP。以兔抗CSP多克隆抗体间接免疫荧光法观察pFLAG-CMV8-CSP能否在HepG2细胞中正确表达,及其在细胞中的分布。实验分为3组,A组（阴性对照组）为转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,B组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,C组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8-CSP的HepG2细胞。采用双荧光素酶试验和凝胶迁移试验（EMSA）检测NF-κB 的核转位及其活化,观察pFLAG-CMV8?鄄CSP对于TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB是否具有抑制作用。 结果 　质粒pFLAG-CMV8-CSP主要在HepG2细胞胞浆中表达。 检测HepG2细胞浆中NF-κB活性,C组萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性比值为0.228±0.029,明显低于B组（0.571±0.030）和A组（0.438±0.085）（P＜0.05）。EMSA结果显示,C组的条带明显弱于B组。　结论 位于细胞浆中的疟原虫CSP蛋白通过抑制NF-κB核转位, 从而抑制TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB。     

核糖体蛋白S7在大劣按蚊抗疟原虫感染免疫研究中的内标作用

目的　探讨核糖体蛋白S7(ribosomalprotein,rpS7)在大劣按蚊抗约氏疟原虫感染免疫中的作用。　方法　根据rpS7的保守mRNA序列设计简并引物,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板,进行RTPCR扩增,克隆、并测定序列;RTPCR结合凝胶图像扫描比较、分析血餐后d1、d2、d3、d4、d7和d11,未吸鼠血组(N)、吸正常鼠血组(B)和吸感染约氏疟原虫鼠血组(I)大劣按蚊血细胞中rpS7的转录差异。　结果　成功克隆大劣按蚊rpS7部分cDNA序列(465bp),吸血和约氏疟原虫感染均未明显地影响大劣按蚊血细胞中rpS7的转录(P>0.05)。　结论　大劣按蚊血细胞rpS7可作为研究大劣按蚊抗约氏疟原虫感染免疫相关因子的内参照。