丹参酮Ⅱ A抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌肥大的机制

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞的基础上,观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐(STS)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响,以探讨STS在钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路心肌肥大中的作用. 方法以培养的原代心肌细胞为模型,用AngⅡ刺激细胞外Ca2+内流,丹参酮ⅡA及钙离子拮抗剂维拉帕米(Ver)进行干预,检测心肌细胞[Ca2+]i及钙调神经磷酸酶(CaN)、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)和蛋白激酶C(PKC)活性;[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标.结果AngⅡ刺激组[Ca2+]i水平及蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01),而STS能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca2+]i增高(P＜0.01 vs AngⅡ组),明显抑制AngⅡ诱导的蛋白质合成速率的增加(P＜0.01 vs AngⅡ组).AngⅡ刺激组CaN、PKC活性与对照组相比差异有显著性(P＜0.05、P＜0.01).STS及Ver抑制AngⅡ介导的心肌细胞CaN、PKC活性的增高.结论CaN通路在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用;STS具有Ca2+阻滞剂的特点,能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca2+]i增高,导致CaN活性降低阻滞心肌肥大的发生和发展.     

钙敏感受体对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌细胞肥大的作用

目的 观察钙敏感受体(CaSR)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导心肌细胞肥大中的作用和可能机制.方法 用Ang Ⅱ处理原代新生大鼠心室肌细胞复制心肌肥大细胞模型;用CaSR激动剂氯化钆(GdCl3),GdCl3+蛋白激酶C(PKC)通路阻断剂(Ro318220)处理AngⅡ诱导的肥大心肌细胞分别作为GdCl3、Ro318220组.通过苏木素-伊红染色(HE)法测定细胞直径,考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定蛋白含量来评价细胞肥大的情况;利用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i;Western blot法检测CaSR和PKC通路的蛋白表达.结果 ①与对照组(0.1263±0.0443)比较,Ang Ⅱ组(0.1963±0.0375)和GdCl3组(0.2778±0.0564)CaSR蛋白表达明显增加(P均＜ 0.05),且GdCl3组明显高于AngⅡ组(P＜0.05).②与对照组(222.70±22.09)比较,Ang Ⅱ组(392.16±36.85)和GdCl3组(502.60±44.21)心肌细胞内[Ca2+]i显著增加(P均＜0.05);与Ang Ⅱ组比较,GdCl3组[Ca2+]i显著增加(P＜0.05).③与对照组比较,Ang Ⅱ可诱导心肌细胞肥大,GdCl3可促进Ang Ⅱ的诱导作用,而Ro318220可抑制GdCl3的作用;④与对照组(0.27±0.07、0.69±0.06、0.87±0.04)比较,Ang Ⅱ组PKCα、PKCε和PKCδ蛋白表达明显增加(0.60±0.16、1.02±0.13、1.20±0.18,P均＜0.05),GdCl3组PKCα、PKCε蛋白表达明显增加(0.82±0.16、1.34±0.12,P均＜0.05);与Ang Ⅱ组比较,GdCl3组PKCα、PKCε蛋白表达明显增加(P均＜ 0.05);与GdCl3组比较,Ro318220组PKCα、PKCε蛋白表达(0.41±0.10、0.85±0.14)明显减少(P均＜ 0.05).结论 PKC通路参与CaSR激活促进心肌细胞肥大的信号转导.     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肥大心肌细胞糖蛋白130表达的影响

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上观察缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞糖蛋白130(glucoprotein130,gp130)表达的影响。方法 AngⅡ刺激新生大鼠的原代培养心肌细胞,建立体外心肌肥大模型,并用不同浓度的缬沙坦作用于肥大心肌细胞,分为对照组,AngⅡ组,缬沙坦1组,缬沙坦2组,缬沙坦3组。采用相差显微镜测量细胞大小,3 H-亮氨酸的掺入作为测定心肌细胞肥大的指标;采用RT-PCR及Western blot检测肥大心肌细胞gp130mRNA及蛋白水平的变化。结果与对照组比较,AngⅡ组、缬沙坦1组、缬沙坦2组心肌细胞直径明显增大,3 H-亮氨酸掺入明显增加,gp130mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05);与AngⅡ组比较,缬沙坦1组、缬沙坦2组、缬沙坦3组心肌细胞直径明显减小,3 H-亮氨酸掺入明显减少,肥大心肌细胞gp130mRNA及蛋白的表达被抑制,且呈一定浓度依赖性(P<0.05)。结论缬沙坦浓度依赖性地抑制AngⅡ诱导的肥大心肌细胞gp130的表达,延缓了AngⅡ诱导的心肌肥大的发生、发展,从而对心肌细胞发挥保护作用。     

钌红、丁卡因对肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i释放功能的影响

目的:分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞雷诺定(Ryanodine)受体[Ca2+]i释放功能的改变及钌红(Rutheniumred)、丁卡因对肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i释放功能的影响.方法:清洁级Wister大白鼠25只,腹腔注射野百合碱,建立大鼠肺动脉高压模型,死亡2只,最终23只;原代培养肺动脉平滑肌细胞;Fura-2/AM(钙离于荧光指示剂)负载培养细胞;荧光测钙技术比较雷诺定诱导的野百合碱组(n=15)及对照组(n=8)[Ca2+]i数值,观测钌红、丁卡因对雷诺定受体激动剂雷诺定诱导的[Ca2+]i变化的影响.结果:10 nmol/L雷诺定使对照组[Ca2+]i平均增加(93.31±12.41)nmoL/L,使野百合碱组[Ca2+]i平均增加(141.71±13,59) nmol/L;两组样本[Ca2+]i增加的数值比较差异有统计学意义(P＜0.01).钌红浓度为o.5～ 10 μmol/L、丁卡因浓度为2～40 μnoL/L时,可使雷诺定受体激动剂雷诺定诱导的[Ca2+]i值最大下降(115.32±7.47) nmol/L和(107.97±7.11) nmol/L.结论:肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞对雷诺定受体激动剂雷诺定的敏感性增强;钌红、丁卡因对雷诺定诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i上升有明显的抑制作用.     

丝裂素活化蛋白激酶参与钙激动剂介导的心肌肥大

目的 :探讨不同来源的细胞内钙 （[Ca2 +] i）对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶 （MAPK）介导的心肌细胞肥大反应的作用。方法 :以培养的大鼠心肌细胞为模型 ,用血管紧张素 （Ang ）刺激心肌细胞外 Ca2 +跨膜内流、三磷酸肌醇 （IP3 ）刺激胞内 Ca2 +释放 ,γ-3 2 P-ATP掺入法和免疫印迹 （western blot）测 MAPK活性及蛋白含量 ,氚 -亮氨酸（3 H-L eu）、氚 -胸腺嘧啶 （3 H-Td R）掺入量作为心肌细胞肥大的指标。结果 :Ang ,IP3 刺激 15 min均能显著增加心肌细胞 MAPK活性及蛋白含量 ,并提高 3 H-L eu,3 H-Td R掺入量 ,与对照组心肌细胞相比差异显著 （P<0 .0 1）。结论 :钙激动剂诱导的 MAPK活性及含量的增加参与了心肌细胞肥大 ,心肌细胞的肥大与 [Ca2 +] i 的来源无关     

TGF-β_1及Ang Ⅱ对大鼠心肌细胞肥大的信号转导通路作用研究

目的:探讨在TGF-β1及AngⅡ分别诱导的大鼠心肌细胞肥大中Smad信号途径中Smad2蛋白的表达。方法:分别建立TGF-β1及AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,分为正常对照组、TGF-β1组以及AngⅡ组。以碘化丙啶(PI)染色标记法检测心肌细胞中RNA的表达量以间接反映心肌细胞肥大。以实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关肌球蛋白重链β亚型(β-MHC)的表达。以Western blot检测心肌细胞中磷酸化Smad2信号蛋白的表达。结果:TGF-β1及AngⅡ诱导的培养心肌细胞中肥大相关蛋白β-MHC的表达均明显高于对照组(P0.01)。PI染色检测表明,TGF-β1组及AngⅡ组PI的含量明显增高(P0.01)。与对照组相比,TGF-β1及AngⅡ均可明显上调磷酸化Smadz(p-Smad2)的表达(P0.01)。TGF-β1组与AngⅡ组p-Smad2表达峰值相比无明显差异,但达峰的时间有所不同。结论:TGF-β1及AngⅡ单独均可诱导心肌细胞肥大,在此过程中p-Smad2蛋白的表达明显增加,TGF-β1与AngⅡ促进p-Smad2蛋白表达作用无明显差异。     

U50488对大鼠离体心心律及心肌细胞内游离钙的影响

观察选择性Kappa(κ)阿片受体激动剂U50488对大鼠离体心心律及心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的作用.结果显示:U50488可诱发心律失常并增加静息心肌细胞[Ca2+]i,U50488诱发心律失常及增加心肌细胞[Ca2+]i的作用可被选择性κ阿片受体拮抗剂Nor-binaltorphimine(Nor-BNI)及选择性磷酯酶C抑制剂U73122、新霉素及链霉素所阻断.表明心脏κ阿片受体激活所致的心律失常是由于磷酸肌醇信号传导通路激活引起心肌细胞[Ca2+]i增多所致.     

腺苷A1受体与к阿片肽受体激活对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的交互作用

目的观察腺苷A1受体与κ阿片肽受体(κ-OR)激活对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的交互作用及机制。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,以Iso 10μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenylIsopropyl)adenosine(R-PIA)1μmol/L和κ-OR激动剂U50,488H1μmol/L对其作用,进一步探讨腺苷A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)0.1μmol/L存在时κ-OR的激活对细胞肥大的影响和κ-OR拮抗剂nor-binaltorphimine(NOR-BNI)1μmol/L存在时腺苷A1受体的激活对心肌细胞肥大的影响。通过Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;以Fluo-3/AM为荧光探针,共聚焦显微镜下测量心肌细胞内[Ca2+]i变化;RT-PCR法检测心肌细胞心房钠尿肽(ANP)的mRNA表达。结果 10μmol/LIso可以诱导心肌细胞肥大,1μmol/L的R-PIA(腺苷A1受体激动剂)可以明显抑制Iso诱导的心肌细胞蛋白合成增加、体积增大、ANPmRNA表达增加、心肌细胞内[Ca2+]i荧光强度增大,该抑制作用可以被1μmol/Lκ-OR拮抗剂NOR-BNI部分阻断;κ-OR激动剂U50,488H1μmol/L可以明显抑制Iso诱导的心肌细胞蛋白合成增加、体积增大、ANPmRNA表达增加、心肌细胞内[Ca2+]i荧光强度增大,该抑制作用可以被腺苷A1受体拮抗剂CPDPX部分阻断。结论腺苷可通过激动A1受体、阿片肽可通过激动κ受体抑制Iso诱导的心肌肥大,二者可以通过影响心肌细胞内[Ca2+]i浓度的增大而交互抑制Iso诱导的心肌肥大。     

AngⅡ对人心房细胞内游离钙浓度的影响及大蒜素的拮抗作用

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人心房细胞[Ca2+]i的影响以及AngⅡ受体拮抗剂大蒜素的拮抗作用。方法急性分离单个人心房肌细胞,实验分4组:对照组、AngⅡ组(加入终浓度为0.1μmol/L的AngⅡ)、大蒜素组(加入终浓度为50μmol/L的大蒜素)和AngⅡ+大蒜素组(大蒜素50μmol/L和AngⅡ0.1μmol同时加入)。以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入干预药物后即刻与15min检测[Ca2+]i变化。结果对照组和大蒜素组人心房肌细胞内荧光强度和光密度值较低。AngⅡ加入后即刻光密度值开始增加,15min后荧光强度和光密度值显著增高,差异有显著性意义(P<0.05)。而AngⅡ+大蒜素组光密度值低于AngⅡ组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论AngⅡ可引起人心房肌细胞内钙超载,大蒜素能显著减轻AngⅡ诱导的人心房肌细胞内Ca2+超载。     

当归挥发油含药血清对肥大心肌细胞钙离子浓度的影响

目的:研究当归挥发油含药血清对肥大心肌细胞钙离子浓度的影响。方法:超临界萃取当归挥发油,制备含药血清。原代培养大鼠心肌细胞,血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导制备心肌细胞肥大模型,5%当归挥发油含药血清进行干预。以图像分析软件测量心肌细胞表面积,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量,Fluo-3测定肥大心肌细胞内Ca2+荧光强度变化。结果:AngⅡ组(10-7 mmol/L)心肌细胞表面积、蛋白含量均明显增加,与空白组相比(P0.05),心肌细胞肥大模型成功建立。5%当归挥发油含药血清处理组细胞内钙离子浓度明显下降,与AngⅡ组相比(P0.05),当归挥发油可减少AngⅡ(10-7 mmol/L)诱导的肥大心肌细胞内Ca2+的浓度。结论:当归挥发油含药血清可能对AngⅡ诱导的肥大心肌细胞具有钙通道阻滞的作用。     

血管紧张素Ⅱ与分泌型卷曲相关蛋白5在心肌细胞肥大中相关性研究

目的:探讨分泌型卷曲相关蛋白5(s FRP5)在心肌细胞肥大中的表达情况及其发挥的作用。方法:体外培养SD乳鼠心肌细胞,应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大。替米沙坦、PD123319分别阻滞血管紧张素1型受体(AT1R)、血管紧张素2型受体(AT2R)的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测sFRP5、脑利钠肽(BNP)及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的表达。结果:s FRP5能够在心肌细胞中表达。sFRP5 mRNA及蛋白水平、BNP蛋白水平的表达随AngⅡ干预时间的延长而增加,48 h达到最高值(P0.05)。与AngⅡ(10~(-6) mol/L)组相比,AngⅡ+替米沙坦(10μmol/L)组sFRP5 mRNA和蛋白水平显著降低(P0.05),AngⅡ+PD123319(10μmol/L)组sFRP5 mRNA和蛋白水平差异无统计学意义(P0.05);与AngⅡ(10~(-6) mo1/L)+sFRP5(0 ng/ml)组比较,AngⅡ(10~(-6) mo1/L)+sFRP5(10 ng/ml)组及AngⅡ(10~(-6) mo1/L)+sFRP5(100 ng/ml)组BNP蛋白及TNF-a的蛋白表达水平明显下降(P0.05)。结论:在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大过程中,主要通过血管紧张素Ⅱ型受体上调sFRP5的表达,且sFRP5在抑制心肌细胞肥大中发挥作用。     

血管紧张素Ⅱ对心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43表达的时相性调控

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化规律和机制。方法分离培养大鼠心肌细胞后分为正常对照组、AngⅡ组和缬沙坦组,用Westernblot和免疫荧光法观察不同时间(12、24、48、72h)和不同浓度(1.0×10-9～1.0×10-5mol/L)下心肌细胞Cx43表达的变化,采用免疫荧光法检测3组心肌细胞24和72hCx43的表达。结果AngⅡ组心肌细胞较正常对照组明显肥大,蛋白含量增加。AngⅡ组心肌细胞在24～48hCx43表达上调,72h则明显下调,较正常对照组减少30%,而且在AngⅡ作用下呈浓度依赖性下调,24hAngⅡ组荧光阳性细胞数较正常对照组和缬沙坦组明显上调,72h则较其他组明显下调。缬沙坦可拮抗AngⅡ对Cx43表达的作用。结论AngⅡ诱导心肌细胞肥大过程中Cx43的表达出现一定时相性变化,并和AngⅡ呈明显的量效关系,提示AngⅡ可能通过AT1受体调控Cx43的表达而参与心肌细胞缝隙连接重构。     

TNF-α对培养乳鼠心肌细胞的作用

目的:探讨不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对培养的乳鼠心肌细胞活力、蛋白合成、分泌AngⅡ及AT1受体表达的影响。方法: 体外培养的SD乳鼠心肌细胞随机分为对照组和不同浓度TNF-α（20、40、60、80、100 μg/L）干预组,用BCA法测定心肌细胞蛋白合成总量,MTT比色法和LDH检测反映心肌细胞的活力,ELISA法检测心肌细胞培养液中AngⅡ的含量,免疫细胞化学染色法检测心肌细胞膜AT1受体表达的变化。结果: TNF-α浓度依赖性地增强乳鼠心肌细胞活力、增加蛋白合成,20、40、60、80 μg/L TNF-α组细胞活力较对照组分别增加1.21（P<0.05)、1.42、1.51和1.73倍（均P<0.01),蛋白合成分别增加27.8%（P<0.05）、38.9%、46%和66.7%（均P<0.01）,而LDH含量差异无显著性。100 μg/L TNF-α组与对照组比较,心肌细胞活力降低18.5%（P<0.01）、蛋白合成降低18.3%（P<0.01）及心肌LDH生成增加1.48倍（P<0.01)。TNF-α浓度依赖性地增加乳鼠心肌细胞AngⅡ分泌,与对照组比较分别增加0.5、1.1、1.6、3和3.6倍（均P<0.01）。TNF-α还具有诱导AT1受体的表达的作用。结论: TNF-α可促进心肌细胞内源性AngⅡ产生,引起心肌细胞活力、蛋白合成改变,AT1受体表达上调,可能介导了心肌肥大、心肌受损等心肌改建的病理生理过程。     

缬沙坦抑制血管紧张素Ⅱ刺激下心肌细胞缝隙连接蛋白43表达的上调

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞肥大后,缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的变化及缬沙坦的干预作用。方法分离培养大鼠心肌细胞,分为对照组,AngⅡ组(AngⅡ1.0×10~6mol/L)和缬沙坦组(AngⅡ1.0×10~6mol/L+缬沙坦1.0×10~6mol/L)。另外将缬沙坦以1.0×10~5、1.0×10~6和1.0×10~7mol/L刺激分为A组、B组和C组。先用AngⅡ诱导心肌肥大24 h后,采用免疫荧光法和免疫印迹蛋白法观察心肌细胞Cx43蛋白表达以及缬沙坦的干预作用。结果与对照组比较,AngⅡ组心肌细胞明显肥大,蛋白质含量明显增加,Cx43蛋白表达明显上调;与AngⅡ组比较,缬沙坦组拮抗AngⅡ刺激下Cx43蛋白的上调,并呈明显浓度依赖性下降。与A组比较,B、C组Cx43蛋白表达下降(P<0.05)。结论 AngⅡ刺激心肌细胞24 h后,通过AngⅡ1型受体信号通路,导致Cx43蛋白表达浓度依赖性上调,缬沙坦明显抑制其上调,Cx43上调可能与心肌肥大过程有关。     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞细胞外信号调节激酶表达的影响

目的从细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)激活角度研究姜黄素(curcumin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌肥大反应的作用。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为AngⅡ组(10-6mol/L AngⅡ)、姜黄素组(10-6mol/L AngⅡ+2.5×10-8g/L姜黄素)及对照组(正常培养的心肌细胞)。3组分别培养24h,收集心肌细胞,[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,免疫印迹法测定ERK1/2表达。应用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果①3组间心肌细胞蛋白合成速率比较有统计学意义(F=20.68,P0.01),AngⅡ(10-6mol/L)处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率明显增加,姜黄素能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率的增加;②AngⅡ(10-6mol/L)处理心肌细胞10min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)表达明显增加,预先以姜黄素2.5×10-8g/L处理心肌细胞30min,发现姜黄素可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达。结论姜黄素可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞ERK1/2的表达,这可能是姜黄素治疗心肌肥厚的重要机制之一。     

腺苷A1受体激动抑制心肌细胞肥大

目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷A1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropy1) adenosine(R-PIA)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制特别是与CaMK Ⅱ表达的关系及对心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化的影响.方法 新生大鼠心肌细胞分组给药,以10 μmol/L的异丙肾上腺素(β肾上腺素激动剂,β-AR)诱导心肌肥大,观察1 μmol/L的R-PIA的作用以及钙调素激酶Ⅱ特异性抑制剂KN93(0 2 μmol/L)防止腺苷A1受体的激活对心肌肥厚的作用.[3H]亮氨酸leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成;Western blot法测细胞核内CaMKⅡδB的表达水平;Till图像测定系统,以Fura-2做荧光标志,观察心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化.结果 1 μmol/L的R-PIA可以明显抑制Iso诱导的蛋白合成增加[(974 8±58 6)vs(1220 8±240 5)计数/(min·孔),P<0 01],抑制[Ca2 ]i瞬变增加[(189 9±10 7) vs (312 5±8 8)nmol/L,P<0 05]和心肌细胞核内CaMK Ⅱδ B的表达含量增加的作用,该抑制作用可以被A1受体抗拮剂8-cyclopentyl-1, 3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.并且当R-PIA与KN93合用时二者有协同抑制作用,其作用较单用KN93组明显[分别为蛋白合成:(R-PIA KN93合用:758 1±80 7)vs(KN93单用:981 3±184 4),P<0 05;[Ca2 ]i瞬变浓度:(R-PIA KN93合用:169 96±10 02)vs(KN93单用:202 39±16 58),P<0 05].结论 在低血清环境下,Iso明显诱导心肌细胞肥大.腺苷通过激动A1受体明显抑制Iso诱导的心肌肥大,其机制可能通过降低心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达.     

槲皮素对家兔主动脉血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的: 探讨槲皮素(Que)对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响.方法:采用新一代钙荧光探剂Fluo-3/AM检测Que对培养的兔主动脉血管平滑肌细胞(ASMC) [Ca2+]i 在高K+、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激作用下的改变,并与Verapamil进行对照研究.结果:Que(10-6、 10-5、10-4mol/l)呈剂量依赖性抑制高K+去极化引起的[Ca2+]i 升高,与Verapamil作用相似,但弱于Verapa mil;Que (10-6～10- 4mol/L)对NE,AngⅡ通过受体介导引起的[Ca2+]i 增高也具有明显的抑制作用.但Que对静息状态的ASM C[Ca2+]i 无明显影响.结论:Que通过对血管平滑肌细胞电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道双重抑制作用,降低细胞内游离钙水平,这可能是其舒血管降压机制之一.     

AngⅡ对乳鼠心肌细胞血小板衍生生长因子受体的调控作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞血小板衍生生长因子-β(PDGF-β)受体含量的影响.方法分离纯化培养的乳鼠心肌细胞,以10-6molAngⅡ刺激作为实验,AngⅡ刺激前应用10-5mol洛沙坦(AngⅡ的1型受体特异性拮抗剂)预处理作为拮抗组,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组,免疫印迹法测定培养lh、6h、12h时心肌细胞PDGF-β受体的含量.结果AngⅡ刺激培养1h、6h的乳鼠心肌细胞PDGF-β受体显著上调(P<0.05,<0.01)洛沙坦完全了取消AngⅡ对PDGF-β受体的上调作用.结论AngⅡ通过AT1受体诱导心肌细胞PDGF受体上调,此可能是AngⅡ致心肌细胞肥大的重要机制之一.     

一氧化氮对缺氧豚鼠心肌细胞游离钙浓度的影响

目的:探讨左旋精氨酸(L-arginine,L-arg)及NG-亚硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitric-L-arginine-methyl ester,LNAME)对缺氧豚鼠心肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化影响.方法:采用离体豚鼠心Langendorff法灌注,胶原酶I型分离细胞,再用荧光指示剂方法(Fure-2/AM)标记心肌[Ca2+]i变化.分为3组:对照组、L-arg组和L-NAME组.观察缺氧后心肌[Ca2+]i的变化.结果:①正常氧状态下,心肌[Ca2+]i均值为120.0±14.3 nmol/L(n＝10).②缺氧状态下心肌[Ca2+]i增加与缺氧时间(程度)成正相关,相关系数r为0.99左右.③一氧化氮(NO)在缺氧条件下对心肌[Ca2+]i有影响.结论:在短期轻度缺氧条件下,NO不足使心肌[Ca2+]i增加,若能设法增加细胞内的NO含量,可以提高心肌细胞的自我保护作用.在长时间重度缺氧条件下,NO可能对心肌细胞有损伤作用.     

丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌肥大的机制

目的 在原代培养的新生大鼠心肌细胞的基础上，观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐（STS）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响，以探讨STS在钙调神经磷酸酶（CaN）依赖的信号通路心肌肥大中的作用。方法 以培养的原代心肌细胞为模型，用AngⅡ刺激细胞外Ca^2＋内流，丹参酮ⅡA及钙离子拮抗剂维拉帕米（Ver）进行干预。检测心肌细胞[Ca^2＋]i及钙调神经磷酸酶（CaN）、丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）和蛋白激酶C（PKC）活性江。[^3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标。结果 AngⅡ刺激组[Ca^2＋]i水平及蛋白核酸合成速率明显增高，与对照组相比差异显著（P〈0．01），而STS能有效地降低南AngⅡ刺激引起的[Ca^2＋]i增高（P〈0．01VSAng1组）。明显抑制AngⅡ诱导的蛋白质合成速率的增加（P〈0．01 VS AngⅡ组）。AngⅡ刺激组CaN、PKC活性与对照组相比差异有显著性（P〈0．05、P〈0．01）。STS及Ver抑制AngⅡ介导的心肌细胞CaN、PKC活性的增高。结论 CaN通路在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用；STS具有Ca^2＋阻滞剂的特点，能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca^2＋]i增高，导致CaN活性降低阻滞心肌肥大的发生和发展。