mAKAPp在Angll促新生大鼠心肌细胞 肥大中的作用及其机制

目的研究mAKAPβ蛋白在AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大中的作用及其机制。方法观察AngⅡ刺激下大鼠心室肌细胞形态学变化及细胞内mAKAPβ蛋白表达水平的变化。使用RNA干扰技术抑制mAKAPβ蛋白表达,观察在此条件下AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大作用的变化,同时观察ERK2蛋白磷酸化水平的变化。结果在AngⅡ刺激下,大鼠心肌细胞面积明显增大,ANP表达水平明显升高,P-ERK水平明显升高,但mAKAPβ蛋白表达水平无明显改变。使用RNA干扰技术抑制mAKAPβ蛋白表达后,AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大的表现明显减弱甚至消失。结论AngⅡ有明显的促新生大鼠心肌细胞肥大作用,mAKPβ蛋白在此过程中发挥着重要作用。     

小鼠子宫内膜胚泡着床点及旁组织白血病抑制因子基因表达研究

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)基因在小鼠胚泡着床窗口期了宫内膜表达的特定部位.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),对20只孕期第4天的小鼠子宫内膜着床点和旁组织的LIF mRNA进行检测.结果:20只孕期第4天的小鼠着床点LIF mRNA表达平均水平为0.5316,旁组织LIF mRNA表达平均水平为0.3711.统计处理t检验差异具有显著性(P＜0.05).结论:在胚泡着床窗口期,小鼠子宫内膜胚泡着床点和旁组织LIF基因表达存在差异.     

促甲状腺素受体在亚临床甲状腺功能减退小鼠心室肌的表达及意义

【摘要】 目的 探讨促甲状腺素受体（TSHR）在亚临床甲状腺功能减退（SCH）小鼠心室肌的表达及意义。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组及实验组,每组15只。实验组小鼠构造亚临床甲状腺功能减退动物模型,对照组小鼠饮用正常水,腹腔注射等量生理盐水。比较两组小鼠超声心动图检测结果,血清TT3、TT4、TSH水平。免疫组织化学染色法检测各组小鼠心室肌组织中TSHR的表达情况。结果 两组超声心动图检测结果显示,实验组E/E’值高于对照组（P＜001）。两组TT3水平比较差异无统计学意义(P＞005);实验组血清TT4水平明显低于对照组,血清TSH水平明显高于对照组（P＜001）。免疫组织化学染色结果显示,实验组心室肌组织中TSHR表达明显高于对照组。结论〓当发生亚临床甲状腺功能减退时,心室肌组织TSHR表达上调,与高浓度的TSH结合后可能通过某种机制影响心脏舒缩功能。     

多用途成年大鼠心室肌细胞分离方法

目的 建立稳定的可同时用于细胞培养和膜片钳实验的成年大鼠心室肌细胞的分离方法 .方法 应用Langendorff灌流.生物酶消化法分离耐钙心肌细胞.分别用左右心室肌做细胞培养和全细胞膜片钳研究.结果 左室心肌细胞数(3.7±0.6)× 10~6,杆状细胞得率(84.85±2.7)%.右室心肌细胞横纹清晰,折光率好,膜片钳实验时容易封接破膜,记录到典型的I_(Ca).L、I_(K1)、I_(to)、I_(Na)电流.结论 该方法 简单、节约、重复性好,改善了杆状细胞得率、细胞质量,左右心室肌细胞分别能很好地用于细胞培养和膜片钳实验.     

慢性间歇性低压低氧对大鼠心肌细胞内向整流钾通道的影响

目的 探讨慢性间歇性低压低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIHH)对大鼠心室肌细胞内向整流钾通道电流(Ik1)的影响.方法 通过低压氧舱制备CIHH大鼠模型;全细胞膜片钳方法记录大鼠心室肌细胞Ik1.结果 基础条件下,CIHH与对照大鼠心肌细胞Ik1差异无统计学意义(P>0.05);模拟缺血导致大鼠心肌细胞Ik1明显降低(P＜0.05),CIHH处理28d大鼠心室肌细胞Ik1降低达(20±25)%(n=10),CIHH处理42d大鼠心室肌细胞Ik1降低达(17±22)%(n=10),明显小于control大鼠心室肌细胞Ik1降低的(46±11)%(n=10,P＜0.05).结论 CIHH可有效对抗模拟缺血对大鼠心肌细胞Ik1的抑制,可能是CIHH抗心律失常作用的离子机制之一.     

β1肾上腺素能受体抗体对小鼠心室肌细胞钾离子通道的作用

目的 采用β1,肾上腺素能受体抗体(anti-ADRβ1)模拟自身抗体,研究其对小鼠心室肌细胞钾离子通道的作用.方法 酶解法分离小鼠心室肌细胞,以不同稀释比例anti-ADRβ1.灌流心肌细胞,膜片钳电生理技术记录钾离子通道电流的变化.结果 不同稀释比例anti-ADRβ1 1/500、1/100、1/50的细胞外液灌...     

人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的探讨传统中药人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）所诱发心肌肥大的影响。方法采用酶消化法分离新生大鼠心室肌细胞,培养心肌细胞随机分为3组：正常对照组、Ang Ⅱ组、AngⅡ＋Rg1组。在接受药物处理24h后,检测心肌细胞总蛋白含量,β-MHC、TNF-α和IL-1β的mRNA表达量。结果 Ang Ⅱ处理导致培养心肌细胞的总蛋白含量以及β-MHC mRNA表达量显著增加,提示心肌肥大的发生;人参皂苷Rg1显著抑制了Ang Ⅱ的促心肌细胞肥大作用。同时,AngⅡ增加心肌细胞对TNF-α和IL -1βmRNA表达的效应也被人参皂苷Rg1所抑制。结论人参皂苷Rg1抑制了 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大以及心肌细胞对炎性介质TNF-α、IL-1β的释放,这可能是人参皂苷Rg1对心脏疾病具有保护作用的细胞学基础。     

丹参多酚酸盐抑制主动脉弓缩窄所致的小鼠心肌肥厚的作用与机制

目的 研究丹参多酚酸盐抑制压力负荷型小鼠心肌肥厚的作用与机制.方法 60只C57BL/6J小鼠随机分为:假手术组、单纯给药组、主动脉弓缩窄组及主动脉弓缩窄给药组,每组15只.行主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction,TAC)构建小鼠心肌肥厚模型.术后6周,超声评价心脏功能;计算小鼠心肺体重比及心脏胫骨长度比;苏木素-伊红(HE)和马森(Masson)染色分别观察心肌细胞形态及心肌间质纤维化程度;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和钙调神经磷酸酶(Calcineurin)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测ANP、β-MHC的mRNA表达情况.ELISA试剂盒检测血液中Calcineurin水平.结果 与假手术组相比,TAC组小鼠的LVPWD值增加,LVEF、LVFS和E/A值显著降低,HM/BW、LW/BW和HW/TL值升高;心肌细胞横截面积增大;心肌组织胶原严重堆积;心肌肥厚标志物ANP和β-MHC的蛋白和mRNA表达水平显著升高,心肌组织中Calcineurin表达上调(均P＜0.05).给予丹参多酚酸盐处理后,TAC+丹参多酚酸盐组小鼠的心脏功能、心脏肥大程度、心肌间质纤维化水平均明显改善,并且心肌组织中Calcineurin表达显著下调(均P＜0.05).结论 丹参多酚酸盐能够改善主动脉弓缩窄术后小鼠心脏功能和心肌纤维化程度,其作用机制可能与Calcineurin信号途径相关.     

昆明小鼠胎鼠心室肌细胞的原代培养

目的 探讨胚胎小鼠心室肌细胞分离培养的方法及细胞的存活状况.方法 采用胰蛋白酶消化心室肌细胞,差速贴壁2 h纯化心肌细胞培养,台盼蓝染色判定心肌细胞存活率.结果 心室组织4～6次基本消化完全,48 h观察细胞存活率大于90%,生物倒置显微镜下观察,24 h时有少部分细胞搏动,48 h时细胞交织成网,搏动呈同步性,搏动频率30～150次/min.结论 用胰蛋白酶消化法可以成功地分离小鼠胎鼠心室肌细胞,可获得形态、活力良好的心室肌细胞.     

玄参水提物对心室重构大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨玄参对心室重构大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法腹主动脉缩窄法制备大鼠心室重构模型。8周药物干预后,测定大鼠左室及全心肥厚指数(LVWI、HWI);紫外分光光度法测心肌羟脯氨酸的量(hydroxproline,Hyp);病理切片HE染色观察心肌细胞横断面面积;RT-PCR测定心肌组织转化生成因子β1基因(TGF-β1mRNA)表达水平。结果玄参水提液能降低心肌肥厚指数、羟脯氨酸量,减小左心室心肌细胞的横断面面积;显著降低TGF-β1mRNA表达水平。结论玄参水提液对心肌细胞和间质胶原重构两方面都有显著的抑制作用,抗心室重构的作用机制与抑制TGF-β1mRNA表达有关。     

心肌尔康对异丙肾上腺素致小鼠心室重构的保护作用及其机制

目的:研究心肌尔康对异丙肾上腺素致小鼠心室重构的保护作用并探讨其机制.方法:采用连续7d皮下注射小剂量异丙肾上腺素的方法诱导小鼠心室重构模型.小鼠随机分为空白对照组,模型组,心肌尔康低、中、高剂量组,心肌尔康萃取水层组,心肌尔康萃取正丁醇组和美托洛尔组,灌胃给药.实验结束时计算小鼠心脏质量指数,观察心肌病理形态学改变,比色法测定心肌组织中羟脯氨酸含量及血清中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量.结果:与空白对照组相比,模型组小鼠心脏质量指数明显升高(P＜0.01),血清超氧化物歧化酶活性下降,血清丙二醛含量升高(P＜0.01).与异丙肾上腺素组相比,心肌尔康能明显降低心脏质量指数(P＜0.01),改善心肌病理学改变,抑制心肌组织中羟脯氨酸含量的增加(P＜0.05),提高血清超氧化物歧化酶活性,降低血清丙二醛含量(P＜0.01).水层成分能明显抑制心肌细胞肥大(P＜0.01),而正丁醇成分对心肌细胞肥大和心肌纤维化均有明显的抑制作用(P＜0.01).结论:心肌尔康对异丙肾上腺素诱导的小鼠心室重构具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基,提高机体的抗氧化能力有关,而水层组和正丁醇组的药理学效应可能是通过非抗氧化应激途径产生.     

miR-155下调心肌细胞ATR1α表达改善心肌细胞肥大

目的 研究微小RNA(miR)-155对心肌细胞肥大的影响,以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体1α亚型(angiotensinⅡreceptor subtype 1α,ATR1α)在其中的作用.方法 AngⅡ诱导体外培养大鼠心肌细胞H9C2 (2-1)肥大,将miR-155模拟物(mimics)和miR-155抑制物(inhibitors)转染入心肌细胞.测量心肌细胞表面积.实验分为对照组、AngⅡ组、模拟物组、miR-155抑制物组、AngⅡ加模拟物组、AngⅡ加抑制物组.实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达.逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、p肌球蛋白重链(β-MHC)、ATR1α mRNA表达水平.Western blot法检测ATR1α蛋白表达水平.结果 与AngⅡ组比较,AngⅡ加模拟物组处理可降低心肌细胞ANP、β-MHC mRNA及ATR1a mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),心肌细胞表面积降低(P＜0.05);AngⅡ加抑制物组处理ATR1α mRNA和蛋白表达水平增加(P＜0.05),但ANP、β-MHC mRNA表达水平及心肌细胞表面积改变差异无统计学意义(P＞0.05),仅miR-155 mimics或miR-155 inhibitors处理各项指标均改变差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-155过表达抑制心肌细胞肥大;ATR1α可能为其负性调控作用靶点.     

决奈达隆对新生大鼠心室肌细胞HCN通道mRNA和蛋白表达的影响

目的 通过检测新生大鼠心室肌细胞在给予药物决奈达隆前后超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN通道)mRNA和蛋白水平的变化,探讨决奈达隆对HCN通道表达的影响.方法 分离新生SD大鼠心室肌,Ⅱ型胶原酶消化,通过差速贴壁分离法收集获得单一的心室肌细胞.并根据浓度(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0μmol/L的决奈达隆对细胞进行处理48h)和时间(浓度为10 μmol/L的决奈达隆对细胞进行1、6、12、24、48 h的处理)梯度分组.采用实时荧光定量PCR法和Western blot检测HCN2、HCN4通道mRNA水平和蛋白水平.结果 浓度梯度组和时间梯度组的HCN2 mRNA和HCN4 mRNA表达水平均低于对照组(P＜0.05);与对照组比较,10 μmol/L决奈达隆处理后12 h组的蛋白水平明显下调(P＜0.01).结论 决奈达隆可抑制HCN2、HCN4通道mRNA和蛋白的表达,且作用呈浓度依赖性,在给药后12 h达到最大作用.     

THE EXPRESSION OF HCN4 GENE AND ACTION POTENTIAL IN ATRIAL FIBRILLATION PATIENTS WITH MITRAL STENOSIS OF RHEUMATIC HEART DISEASE

目的:通过分析风湿性心脏病二尖瓣狭窄(风心二狭)患者心房肌组织HCN4基因表达及动作电位与心房颤动发生的关系,为风心二狭房颤发生机制的研究提供理论依据.方法:取手术患者心耳组织100 mg,提取RNA后应用半定量逆转录—PCR方法检测mRNA含量,并对PCR产物测序分析;以HCN4基因mRNA和内参β-actin含量的比值作为评价HCN4基因mRNA表达水平指标;采用急性分离心肌细胞的方法将其分为MS房颤(atrial fibrillation,AF)组和窦律(Sinus rhythm,SR)组,记录两组的动作电位(AP),观察两组心肌细胞动作电位时程( APD)的改变.结果:风心二狭房颤组及对照组HCN4基因mRNA与β-actin含量的相对表达值比值分别为0.696±0.257和0.125±0.010,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).房颤病人心房肌APD、APD复极至50％的时程(APD50)及APD复极至90％的时程(APD90)较窦性心律组明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:房颤心肌细胞HCN4基因的过度转录表达及APD缩短可能共同参与了调控风心二狭房颤的发生过程,揭示了风心二狭房颤发生的分子机制及电流学机制.     

丹参多酚酸盐减轻异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚

目的:研究丹参多酚酸盐对盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌肥厚的预防保护作用。方法:通过腹腔注射ISO构建小鼠心肌肥厚模型,在有或没有丹参多酚酸盐的预处理下,利用超声评估心功能;计算小鼠心肺体重比;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌细胞横截面积;马松染色测心肌组织纤维化;qRT-PCR法检测心肌肥厚相关标志物ANP和BNP的mRNA的表达水平;Western Blot检测钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达和磷酸化水平。结果:丹参多酚酸盐能有效地改善ISO所致的心功能损害、心肌细胞肥大和心室间质纤维化;并能减少心室肌中CaMKⅡ蛋白的表达和磷酸化。结论:丹参多酚酸盐预处理能够改善异丙肾上腺素诱导的小鼠心脏功能降低和心室结构变化。因此,丹参多酚酸盐可以作为干预心肌肥厚发生发展的一种潜在药物。     

TGF-β与CTGF在大鼠低压缺氧时右心室心肌纤维化中的作用

目的 探讨转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在低压缺氧条件下发生右心室心肌纤维化与肥大中的作用.方法 将50只8周龄雄性SD大鼠[体质量(188.6±19.3)g]随机分为常氧喂养对照组与低压缺氧喂养3、7、14和28 d实验组(n=10),低压缺氧大鼠置于模拟海拔6000m的低压舱内饲养.分离右心室,称量法计算右心室肥厚指数.采用荧光定量PCR与免疫印迹法分别检测右心室心肌组织中Ⅰ型胶原、TGF-β和CTGF的mRNA与蛋白表达水平,并分析低压缺氧相同天数TGF-β和CTGF与Ⅰ型胶原表达水平、右心室肥厚指数的相关性.结果 与常氧组相比,右心室心肌组织中低压缺氧各组右心室肥厚指数均升高,其中低压缺氧7、14、28 d组右心室肥厚指数显著升高(P＜0.05).与常氧组相比,右心室心肌组织中低压缺氧各组Ⅰ型胶原水平均升高,其中低压缺氧7、14、28 d组水平显著升高(P＜0.05).与常氧组相比,低压缺氧3d组右心室心肌组织中TGF-β(3.68±0.17)、CTGF(8.73±0.96)蛋白表达量均显著升高(P＜0.05),低压缺氧28 d组右心室心肌组织中TGF-β(0.93±0.15)、CTGF(12.62±0.14)蛋白水平均显著升高(P＜0.05),而低压缺氧7、14 d组两细胞因子表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).随低压缺氧时间增加,右心室心肌组织中两生长因子mRNA表达水平与右心室肥厚指数呈显著正相关(P＜0.05),与Ⅰ型胶原的mRNA水平也呈显著正相关(P＜0.05,低压缺氧28 d组除外);随低压缺氧时间增加,TGF-β的mRNA水平与CTGF的mRNA水平呈显著正相关(P＜0.05).结论 随低压缺氧时间增加,右心室心肌组织中TGF-β、CTGF先增加后降低再增加的表达变化,参与了低压缺氧时右心室心肌纤维化、心肌肥大的过程.     

兔心肌梗死后心室肌细胞钙电流变化及比索洛尔的影响

目的本研究观察心肌梗死(myocardial infarction,MI)后3周,兔心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的改变及比索洛尔的影响.方法采用Langendoff灌流法获得单个心室肌细胞,利用膜片钳技术全细胞记录模式,记录心室肌细胞L型钙电流(ICa-L).结果本实验记录了3组心室肌细胞的ICa-L的电流的变化.MI组ICa-L电流峰值显著高于伪手术组(Sham组)(2.19±0.84)nA vs(1.57±0.56)nA,(P＜0.05),比索洛尔组(β-B组)(1.78±0.53)nA与Sham组间无显著差异.但经膜电容标化后,ICa-L电流密度3组间无显著差异[MI组(12.60±3.74)pA/pF、β-B组(12.57±2.69)pMpF、Sham组(12.49±4.21)pA/pF],Ⅰ～Ⅴ曲线呈典型"铃型"曲线.结论比索洛尔可减轻MI非梗塞区心室肌细胞ICa-L的变化.     

β-连环蛋白保护肝缺血再灌注损伤的机制研究

目的 应用特异性基因敲除小鼠模型研究β-连环蛋白(β-catenin)对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护机制.方法 建立β-catenin基因敲除小鼠(实验组,6只)和野生型小鼠(对照组,6只)肝缺血再灌注模型,采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测两组小鼠肝组织细胞凋亡;应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术测定两组小鼠再灌注后0、6h时的肝细胞白细胞介素-6(IL-6) mRNA及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达水平.结果 肝脏缺血再灌注0h时,实验组肝细胞凋亡数、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA与对照组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).缺血再灌注6h时,实验组凋亡细胞数为(56±15)个/高倍视野,显著多于对照组的(27±8)个/高倍视野(P＜0.05);实验组TNF-α mRNA、IL-6 mRNA分别为2.5±0.3、7.8±2.6,均显著高于对照组的1.1±0.1、4.8±1.3,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 β-catenin可通过抗凋亡和抗炎作用对肝脏缺血再灌注引起的细胞损伤起保护作用.     

压力超负荷性肥大心肌细胞AT1和AT2 mRNA表达的动态变化

目的:观察压力超负荷性肥大心肌细胞表面AT1和AT2受体mRNA表达的动态变化. 方法:构建压力超负荷性心肌肥大模型,于不同时间点急性分离心肌细胞. 采用RT-PCR法观察肥大心肌细胞中AT1和AT2 mRNA表达的动态变化. 结果:随着大鼠心肌肥厚程度的逐渐加重,于术后4 wk起,AT1与AT2 mRNA的表达水平较之假手术组均逐渐升高,8 wk时继续升高. 主动脉缩窄12 wk组AT1的表达水平与8wk组无显著性差异,但AT2的表达水平从0.438±0.088进一步升高至0.580±0.066,且差异有显著性(P＜0.05). 各时段假手术对照组间心肌细胞中AT1与AT2的表达水平均无明显变化. 结论:在压力超负荷性心肌肥大过程中,心肌细胞AT1与AT2 mRNA的表达呈现动态的变化过程. 表达增多的AT2受体可能会在随后心力衰竭的发生中发挥一定作用.     

TGF-β2对心肌细胞H9C2转录因子表达的影响及其组蛋白H3乙酰化调控机制

目的 探讨转化生长因子-β2(transforming growth factor beta2,TGF-β2)对心肌细胞H9C2转录因子Mef2c和GATA4的影响及其与组蛋白H3乙酰化的关系.方法 比较TGF-β2对细胞生长的影响.利用Real-time PCR检测心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量,筛选合适的TGF-β2干预浓度.采用Western blot检测心肌细胞乙酰化组蛋白H3(acetylated histone H3,acH3)的表达差异.染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP) Real-time PCR检测Mef2c和GATA4启动子区与acH3结合DNA的相对表达水平.比色分析法检测TGF-β2对心肌细胞的总体组蛋白乙酰化酶(HATs)活性的影响.结果 ①TGF-β2干预组相对于对照组心肌细胞的增殖能力增强(P＜0.05).②心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量随着TGF-β2浓度的升高呈现先升高后降低的趋势,在5 μg/L的浓度时均达到最高,Mef2c mRNA相对表达量是对照组的1.8倍,GATA4mRNA是对照组的2.3倍(P＜0.05).③TGF-β2干预72 h后acH3蛋白表达量是对照组的4倍(P＜0.05),HATs活性是对照组的1.34倍(P＜0.05).④TGF-β2干预组Mef2c和GATA4启动子区组蛋白H3的乙酰化水平分别是对照组的2.56和2.16倍(P＜0.05).结论 5μg/L TGF-β2可以促进心肌细胞H9C2的分裂与增殖,并上调心脏相关转录因子Mef2c和GATA4的表达,组蛋白H3乙酰化水平的升高可能是Mef2c和GATA4表达上调的机制之一.