内源性一氧化氮介导脂质胞壁酸预适应对人冠脉内皮细胞再复氧损伤的作用

目的　探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对内皮细胞再复氧(H/R)损伤的作用,以及内源性一氧化氮(NO)参与保护机制的作用。方法　采用培养的人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)在缺氧条件下培养 2h,然后在常氧条件下复氧培养 4h,模拟缺血 /再灌注损伤的模型。HCAECs在缺氧前 24h预先在含LTA(30或 300μg·L-1 )的培养基中培养 4h。用台盼蓝排斥法和培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量来评价内皮细胞损伤程度,比色法检测培养基中一氧化氮(NO)含量。并用RT PCR检测LTA预适应后(2-24)hHCAECseNOSmRNA的表达。结果　LTA预适应能显著减少台盼蓝排斥实验中的细胞死亡百分比,降低复氧末细胞培养液中LDH的含量。LTA预适应亦能显著增加HCAECs复氧末培养液中NO含量。LTA预适应的效应可被非选择性NOS抑制剂L 单甲基精氨酸(L NMMA, 100μmol·L-1 )所取消。在LTA预适应后 2和 4h,HCAECs的eNOSmRNA表达明显增加。结论LTA诱导的延迟预适应能显著减少HCAECs再复氧所致的细胞损伤和功能紊乱,eNOS产生的NO启动并介导了LTA保护内皮细胞的作用。     

丁基苯酞抗大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧损伤及其机制

本研究探讨丁基苯酞抗大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧损伤及其机制。原代培养大鼠大脑皮质神经元，建立氧糖剥夺/复氧模型(OGD/R)，采用MTT法、酶学检查、免疫组化、RT-PCR等观察丁基苯酞(各浓度组)的保护作用及其机制。在氧糖剥夺4 h/复氧8 h时丁基苯酞各浓度组可增加神经元的细胞活力和减少神经元LDH(乳酸脱氢酶)的释放，可显著降低神经元表达iNOS mRNA(诱生型一氧化氮合酶)和NF-κB(核因子κB) p65蛋白(增加)。不同剂量丁基苯酞(100、 10、 1和0.1 μmol·L^-1)在增加细胞活力、减少LDH释放及降低神经元表达iNOS mRNA等方面，高浓度的作用强于低浓度，且丁基苯酞100 μmol·L^-1组与吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC) 100 μmol·L^-1组差异显著。在OGD 4 h/R 8 h时丁基苯酞可能抑制iNOSmRNA的表达及NF-κB的活化，从而有效保护氧糖剥夺/复氧中损伤的大脑皮质神经元。     

阿魏酸钠对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

目的研究阿魏酸钠(SF)预适应对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法采用1～3 d新生SD大鼠,常规方法培养心肌细胞,给予模拟缺氧(缺血)液、模拟复氧(再灌注)液以及药理性预适应药物阿魏酸钠以分析K⁺_ATP通道、NO及PKC的影响。结果与对照组比,单纯缺氧/复氧使LDH,CK,MDA及LD水平显著升高,细胞搏动频率、细胞存活率和SOD,GSH-Px活力显著下降。SF预适应后明显减轻上述变化。Glib,L-NAME和Ploy B均部分取消SF预适应的减轻作用。结论SF预适应对心肌细胞缺氧/复氧损伤有显著的保护作用;此保护心肌过程是多种因素综合作用的结果。     

蒺藜皂苷对阿霉素损伤心肌细胞的保护作用

 观察蒺藜皂苷 (gross saponins of Tribulus terrestris, GSTT) 对阿霉素 (adriamycin, ADR) 诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用, 并初步探讨其作用机制。分离出生1～3 d大鼠心肌细胞, 培养72 h后随机分为正常对照组、ADR (终浓度为2.0 mg·L⁻¹) 模型组和GSTT (100、30及10 mg·L⁻¹) 组, 继续培养24 h后, 应用MTT比色法检测细胞存活率, 测定培养基中肌酸激酶 (CK)、乳酸脱氢酶 (LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 释放量, 超氧化物歧化酶 (SOD) 活性, 丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO) 含量, 并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用Western blotting检测GSTT对凋亡相关蛋白caspase-3的作用。结果表明, 与正常对照组比较, ADR模型组心肌细胞存活数明显减少, 心肌细胞培养液中CK、LDH、AST释放量增加 (P < 0.01, P < 0.001), 同时SOD活力下降 (P < 0.01) 而MDA、NO含量升高 (P < 0.001); 与ADR模型组比较, GSTT (100和30 mg·L⁻¹) 组存活心肌细胞数增多 (P < 0.05, P < 0.001), 心肌细胞培养液中CK、LDH、AST含量明显降低, SOD活力增加、MDA和NO含量降低 (P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001)。流式细胞仪检测GSTT (100和30 mg·L⁻¹) 组心肌细胞凋亡数明显减少 (P < 0.05, P < 0.01), caspase-3含量下降 (P < 0.05, P < 0.001)。GSTT对ADR损伤的心肌细胞具有保护作用, 可减轻心肌细胞损伤, 抑制心肌细胞凋亡, 其机制与抗自由基作用有关。     

丁基苯酞对原代培养胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响

用分光光度法和放射免疫分析法分别检测NO及cGMP水平,同时观察l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对原代培养的胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响。结果表明,d-NBP(0.1～100μmol·L^-1)对低糖低氧条件下或含N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)或含KCl的培养基中皮层神经细胞外液NO及细胞内cGMP水平明显升高,而l-NBP(0.1～100μmol·L^-1)则能明显降低NO和cGMP水平。提示:d-NBP和l-NBP对低糖低氧,NMDA或KCl诱导的NO释放和cGMP生成有相反的作用。     

银杏叶提取物对低氧复氧、H2O2和谷氨酸损伤时谷氨酸引起的大鼠星形胶质细胞［Ca2+］i变化的影响

目的研究银杏叶提取物对低氧复氧、H₂O₂和L-谷氨酸损伤时谷氨酸升高大鼠星形胶质细胞［Ca²⁺］_i的影响。方法钙荧光探针Fluo-3/AM标记胞浆内游离钙离子，激光扫描共聚焦显微镜测定［Ca²⁺］_i的变化。结果 在低氧复氧、H₂O₂以及高浓度的L-谷氨酸损伤后，外源性谷氨酸（27 μmol·L^-1）均不能引起培养乳大鼠星形胶质细胞正常的［Ca²⁺］_i升高，反而使［Ca²⁺］_i分别降低(3.3±1.6)%，(81±11)%和(81±7)%；损伤前预先给予GbE（10 mg·L^-1）不能明显改善星形胶质细胞的谷氨酸反应，但预先给予GbE（100 mg·L^-1）后，27 μmol·L^-1谷氨酸可使损伤的星形胶质细胞［Ca²⁺］_i分别升高(135±98)%，(117±93)%和(89±36)%。结论低氧复氧、H₂O₂以及高浓度的L-谷氨酸均能损伤星形胶质细胞的谷氨酸反应，影响神经细胞与胶质细胞的双向交流。GbE能明显逆转不同损伤后谷氨酸诱导星形胶质细胞［Ca²⁺］_i的异常变化，使星形胶质细胞在不同损伤时能维持正常功能，该作用可能与GbE的脑保护作用有关。     

Urantide对心肌缺血性损伤的保护作用

研究UT受体拮抗剂——urantide对心肌缺血性损伤的保护作用及其机制。小鼠心肌缺血采用皮下注射(sc)异丙肾上腺素(Iso)法，观察心电图ST段的变化，测定小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)的活性以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量， HE染色观察心肌组织病理损伤情况。建立乳鼠原代心肌细胞缺氧再给氧模型，采用ELISA法观察urantide对细胞培养上清液中肌钙蛋白I(cTnI)的影响，比色法测LDH活性；MTT法观察细胞存活率及激光共聚焦检测细胞内钙离子浓度的变化。实验揭示urantide (3～30 μg·kg^-1)可明显抑制小鼠心电图ST段的抬高； urantide (10及30 μg·kg^-1)可显著降低小鼠血清中LDH活性和MDA含量，明显升高NOS活性和NO含量，同时减轻异丙肾上腺素诱导的心肌病理损伤。在乳鼠原代心肌细胞缺氧再给氧模型中， urantide (1×10^-6和1×10^-7 mol·L^-1)能明显增加细胞存活率，降低培养上清液中LDH的活性； urantide (1×10^-6～1×10^-9 mol·L^-1)能显著降低细胞培养上清液中cTnI的增高和细胞内钙离子浓度的上升。上述结果表明， urantide对心肌缺血及缺氧再给氧所致心肌细胞的损伤具有一定的保护作用，其作用机制可能与增加NOS活性、促进NO合成及抑制钙超载有关。     

灯盏花素对谷氨酸诱导大鼠海马神经细胞毒性的保护作用

选用培养的海马神经细胞研究灯盏花素(breviscapine，Bre)对谷氨酸(glutamate，Glu)诱导神经细胞毒性的保护作用及其机制。新生大鼠海马神经细胞体外培养8 d后， 用L-谷氨酸(0.1， 0.5及1.0 mmol·L^-1)处理30 min； 灯盏花素处理组在加入L-谷氨酸的同时给予不同剂量的灯盏花素(10， 20及40 μmol·L^-1)； 继续正常培养24 h后， 用Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死率； RT-PCR分析凋亡蛋白抑制剂XIAP mRNA的表达。结果表明， L-谷氨酸浓度依赖性地诱导神经细胞发生凋亡和坏死， 并使细胞XIAP mRNA表达发生浓度依赖性的双向变化： 0.1 mmol·L^-1 L-谷氨酸使神经细胞XIAP mRNA表达增强， 而较高浓度使XIAP mRNA表达下调。灯盏花素(20和40 μmol·L^-1)可有效抑制谷氨酸诱导的神经细胞死亡， 分别使细胞凋亡率下降30.4%和40.1%， 坏死率下降32.5%和38.8%； 并上调XIAP mRNA表达45.1%和54.9%。激光共聚焦显微技术联合Fluo-3荧光标记检测表明，L-谷氨酸处理过程中海马神经细胞内Ca²⁺水平显著升高， 而灯盏花素可抑制谷氨酸引起的细胞内Ca²⁺超载(P<0.01)。以上结果提示， 灯盏花素可能通过抑制细胞Ca²⁺超载， 调节凋亡抑制因子XIAP的表达而有效保护谷氨酸对神经细胞的兴奋性毒性作用。     

何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的研究何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法在ECV304细胞培养基中加入LPC(2.5 mg·L^-1)或LPC与ST I共孵24 h，收集各组条件培养基，用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量；用原位杂交法、RT-PCR及Realtime RT-PCR法检测LPC对内皮细胞VEGF mRNA的表达及ST I的影响。结果ECV304细胞暴露于LPC后，VEGF蛋白分泌明显增加；加入ST I后VEGF蛋白含量明显降低; LPC可以使ECV304中VEGF mRNA的表达明显升高, 并使VEGF165 mRNA的表达升高；ST I可剂量依赖性地抑制VEGF165 mRNA的高表达。结论LPC能诱导ECV304细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGF mRNA，1×10^-5 mol·L^-1 ST I可抑制LPC的作用，降低VEGF的高表达。     

丁基苯酞对原代培养的大鼠皮层神经细胞外液6-keto-PGF1α和TXB2及其比值的影响

目的旨在观察丁基苯酞(NBP)对神经细胞培养液中6-酮-PGF_1α和TXB₂含量及其比值的影响。用放射免疫方法,结果发现神经细胞在低糖低氧5h或低糖低氧5h/恢复糖氧3h条件下,d-,l-和dl-NBP(0.1～100μmol·L^-1)能够剂量依赖性升高细胞外液中的6-酮-PGF_1α含量,降低TXB₂水平,从而使6-酮-PGF_1α与TXB₂比值升高。而阿司匹林仅在小剂量(0.1,1μmol·L^-1)时能升高6-酮 PGF^1α与TXB^{2比值,大剂量(10,100μmol·L-1)时无影响。提示:NBP对6-酮-PGF_1α/TXB₂比值的升高可能与其增加局部脑血流和改善缺血性脑损伤有关。}     

脂质胞壁酸诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨LTA诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血／再灌注损（I／R）损伤的作用。方法 采用改良Longa法制作大鼠右大脑中动脉（MCA）闭塞2h造成局灶性脑缺血模型，恢复血液灌流24h。大鼠在施行脑缺血前24h腹腔注射脂质胞壁酸（LTA，1mg／kg）诱导延迟预适应，检测脑组织再灌注24h后组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量以及大鼠神经症状，并用透射电镜观测大鼠大脑皮层神经细胞的超微结构改变。结果 LTA预适应能明显减少脑I／R后组织中MDA的含量（P〈0、01），提高SOD的水平（P〈0．01），减轻神经细胞的超微结构损伤和保护细胞膜结构完整性，LTA预适应还能明显改善脑I／R后的神经功能，减少神经缺欠评分值（P〈0．01）。LTA预适应亦能明显降低I／R导致脑组织中NO含量的升高（P〈0．01）。结论 LTA诱导的延迟预适应能显著减少大鼠脑组织再灌注损伤，减少脑组织坏死，其作用机制与减少脑I／R后自由基和NO毒性作用有关。     

丹酚酸B镁盐抑制低氧诱导内皮细胞钙内流和一氧化氮释放

AIM: To investigate the inhibitory effect of magnesium lithospermate B (MLB) on hypoxia-induced elevation of intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) and nitric oxide (NO) release in endothelial cells. METHODS: The cultured human umbilical vein endothelial cells (ECV304) were cultured for 30 min under 95 % N(2) and 5 % CO2. Cell injury was evaluated by dye exclusion test and lactate dehydrogenase (LDH) assay. [Ca2+]i was determined by Fura 2-AM. NO content was examined by the NO assay kit. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA expressions were measured by semi-quantitative RT-PCR. RESULTS: Cell viability was decreased from (93.0 +/- 2.6) % in normoxia to (85.5 +/- 2.1) % in hypoxia (P < 0.01), and LDH release was increased from (41 +/- 28) U/L in normoxia to (141+/-68) U/L in hypoxia (P < 0.01) in ECV304 cultured under calcium conditions. MLB 5 and 10 mg/L improved cell viability and inhibited LDH leakage in ECV304. In addition, hypoxia increased [Ca2+]i, NO release, and eNOS and iNOS mRNA expressions in ECV304 (P < 0.01). These increases could be inhibited by MLB 5 and 10 mg/L (P < 0.01), but they were unaffected by hypoxia under calcium-free conditions. CONCLUSION: MLB attenuates hypoxia-induced cell injury and inhibits hypoxia-induced increases of [Ca2+]i, NO release, and eNOS and iNOS mRNA expressions in ECV304 in Krebs'solution containing calcium. The decreases of NO production and eNOS mRNA expression are possibly associated with inhibition of extracellular calcium influx in MLB-treated ECV304     

一氧化氮供体预处理对乳鼠心肌细胞的延迟保护作用及其机制

目的　探讨一氧化氮模拟预处理延迟保护作用的机制。方法　体外培养新生大鼠心肌细胞 ,实验分为 :①阴性对照组 (Normal组 ) ;②SNAP组 :一氧化氮 (nitricoxide ,NO)供体S 亚硝基 N 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetyl 1 ,1 penicil lamine ,SNAP ,5 0 0 μmol·L-1 )与心肌细胞共育 2 4h ;③Che +SNAP组 :蛋白激酶C拮抗剂白屈菜季铵碱 (chelerythrinechlo ride ,Che ,1 0 μmol·L-1 )处理心肌细胞 30min后 ,加入SNAP与心肌细胞共育 2 4h ;④PDTC +SNAP组 :核因子κB(NF κB)特异性阻断剂PDTC(1 0 0 μmol·L-1 )处理心肌细胞 30min后 ,加入SNAP与心肌细胞共育 2 4h ;⑤缺氧复氧损伤组 (H/R组 ) :心肌细胞缺氧 6h ,复氧 3h。②～④组部分取细胞爬片以免疫组织化学法观察SNAP对热休克蛋白 70 (HSP70 )表达的影响 ;其余细胞经历H/R损伤后 ,检测心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果　在正常心肌细胞免疫组织化学法未检测到HSP70的表达 ,心肌细胞经过H/R损伤后 ,可检测到少量HSP70阳性细胞 ,其阳性染色A值为 94 6± 9 1 ,心肌细胞培养上清LDH活性为 (2 1 90 5± 1 5 1 7)U·L-1 ,细胞存活率为 5 1 7%± 4 6 % ,细胞损伤较正常组加重 (P <0 0 1 ) ;SNAP处理细胞后 2 4h ,HSP70阳性细胞数增多 ,     

一氧化氮在缺血性脑损伤中作用的实验研究进展

一氧化氮 (NO)在缺血性脑损伤中具有双重作用 ,既表现为神经保护作用 ,又有神经毒性作用。在脑缺血过程中 ,源于内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)产生的NO有神经保护作用 ,源于神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)过度表达所形成的NO有神经毒性作用。利用NO的双重作用 ,找到防治脑缺血的药物及给药时间和剂量等一直是研究的热点。     

一氧化氮参与预处理心肌细胞早期保护作用

目的　明确一氧化氮 (NO)是否诱导预处理心肌细胞早期保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞 ,分为如下各组 :①阴性对照组 (Normal组 ) ;②SNAP(5 0 0 μmol·L-1)预处理组 (NO组 ) ;③缺氧预处理组 (HP组 ) ;④NO合成抑制剂L NAME作用细胞后再行缺氧预处理组 (L NAME +HP组 ) ;⑤L 精氨酸 (L Arg)预处理心肌细胞组(L Arg组 ) ;⑥L NAME与L Arg共同作用于心肌细胞组(L NAME +L Arg组 ) ;⑦缺氧复氧损伤组 (H/R组 )。②～⑥组细胞在给予干预因素后使细胞经历 6h缺氧及 3h复氧 ,阳性对照组不予任何处理直接使其缺氧 6h复氧 3h。分别检测心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,以判定心肌细胞损伤程度。结果　NO预处理心肌细胞后使其缺氧复氧损伤减轻 ,表现为与单纯缺氧复氧组细胞比较其培养上清LDH活性降低 ,细胞存活率提高 (P <0 0 1) ;缺氧预处理和L Arg预处理细胞均可减轻心肌细胞缺氧复氧损伤 (P<0 0 1) ,但此作用可被NOS抑制剂L NAME所拮抗。结论　内源性及外源性NO均可诱导心肌细胞预处理早期保护作用     

Delayed circulatory failure due to the induction of nitric oxide synthase by lipoteichoic acid from Staphylococcus aureus in anaesthetized rats.

1. This study investigates the effect of lipoteichoic acid (LTA) from the cell wall of Staphylococcus aureus, a micro-organism without endotoxin, on haemodynamics and induction of nitric oxide synthase (iNOS) in the anaesthetized rat. 2. Intravenous injection of LTA (10 mg kg-1) resulted in a decrease in blood pressure from 123 +/- 1 mmHg to 83 +/- 7 mmHg after 270 min (P < 0.001) and a reduction of the pressor response to noradrenaline (1 microgram kg-1) from 33 +/- 1 mmHg.min to 23 +/- 3 mmHg.min after 270 min (P < 0.05). 3. The delayed circulatory failure (hypotension and vascular hyporeactivity) caused by LTA was prevented by pretreatment of rats with dexamethasone (10 mg kg-1, 60 min prior to LTA) or the nitric oxide synthase inhibitor NG-monomethyl-L-arginine (L-NMMA, 10 mg kg-1 h-1, i.v. infusion starting 30 min prior to LTA). 4. In contrast, treatment of rats with polymyxin B (0.05 mg kg-1), an agent which binds endotoxin (lipopolysaccharides, LPS), did not affect the delayed circulatory failure caused by LTA. Polymyxin B, however, attenuated the hypotension and vascular hyporeactivity to noradrenaline afforded by endotoxaemia (2 mg kg-1 LPS, i.v.) for 270 min. 5. The delayed circulatory failure caused by LTA was associated with a time-dependent increase in (i) the expression of iNOS protein in the lung (Western blot analysis), and (ii) iNOS activity. This increase in iNOS protein and activity was prevented by pretreatment of LTA-rats with dexamethasone (10 mg kg-1).(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

Adverse balance of nitric oxide/peroxynitrite in the dysfunctional endothelium can be reversed by statins

Vascular endothelial dysfunction is a complex phenomenon that might be caused by a deficiency of nitric oxide (NO) and an overproduction of peroxynitrite (ONOO-). This study used a nanotechnological approach to monitor the in vitro effect of statins on the [NO]/[ONOO-] balance in normal and dysfunctional endothelial cells. NO and (ONOO-) were measured by electrochemical nanosensors in a single human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) treated with atorvastatin or simvastatin for 24 hours in the presence or absence of 50 microg/mL oxidized-LDL. An imbalance between [NO]/[ONOO-] concentrations was used as an indicator of endothelial dysfunction and correlated with endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expression. Ox-LDL induced dysfunction of the endothelium by uncoupling eNOS. NO concentration decreased from 300 +/- 12 to 146 +/- 8 nmol/L and (ONOO-) increased from 200 +/- 9 to 360 +/- 13 nmol/L. The [NO]/[ONOO-] balance decreased from 1.50 +/- 0.04 (control) to 0.40 +/- 0.03 for cells co-incubated with ox-LDL. Treatment with statins reversed eNOS uncoupling, induced by oxidized-LDL and significantly increased the [NO]/[ONOO-] balance to 1.2 +/- 0.1. These results demonstrate that statins can restore endothelial function by increasing eNOS expression, decreasing eNOS uncoupling, reducing the (ONOO-) level (nitroxidative stress), and shifting the [NO]/[ONOO-] balance towards NO.     

Oleanolic acid induces relaxation and calcium-independent release of endothelium-derived nitric oxide

Background and purpose:

The present study investigated the mechanisms by which oleanolic acid, a component of olive oil, increases release of nitric oxide (NO).

Experimental approach:

Measurements of isometric tension, NO concentration, or endothelial cell calcium were made in rat isolated mesenteric arteries. Immunoblotting for endothelial NOS (eNOS) and Akt kinase were performed in primary cultures of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs).

Key results:

Oleanolic acid (3–30 μM) evoked endothelium-dependent relaxations in noradrenaline-contracted rat superior and small mesenteric arteries. In rat superior mesenteric arteries, oleanolic acid induced simultaneous increases in NO concentration and relaxation, and these responses were inhibited by an inhibitor of NOS, asymmetric dimethyl-L-arginine (300 μM) and by the NO scavenger, oxyhaemoglobin (10 μM). Oleanolic acid-evoked NO increases were not reduced in Ca²⁺-free solution and in the presence of an inhibitor of endoplasmic reticulum calcium-ATPase, thapsigargin (1 μM). Oleanolic acid evoked relaxation without changes in endothelial cell calcium, but decreased smooth muscle calcium in arterial segments. Oleanolic acid failed to increase calcium in HUVECs, but increased time-dependently phosphorylation of Akt kinase at Serine⁴⁷³ (Akt-Ser⁴⁷³) and eNOS at Serine¹¹⁷⁷ (eNOS-Ser¹¹⁷⁷), which was attenuated by inhibitors of phosphoinositide-3-kinase.

Conclusions and implications:

This study provides direct evidence that a component of olive oil, oleanolic acid, activated endothelium-dependent release of NO and decreased smooth muscle cell calcium followed by relaxation. The oleanolic acid-evoked endothelium-derived NO release was independent of endothelial cell calcium and involved phosphoinositide-3-kinase-dependent phosphorylation of Akt-Ser⁴⁷³ followed by phosphorylation of eNOS-Ser¹¹⁷⁷.