2-脱氧葡萄糖通过激活AMPK通路抑制类风湿关节炎血管新生

通过观察2-脱氧葡萄糖（2-DG）对佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜组织血管翳形成的抑制及对人脐静脉内皮细胞 （HUVEC）增殖、迁移和体外成管的作用,探讨2-DG抑制类风湿关节炎血管新生的机制。方法采用滑膜病理组织HE染色观察 滑膜组织血管翳形成;CCK-8法检测HUVEC的细胞增殖活性;Transwell小室法检测HUVEC的迁移;体外基质胶成管实验检 测HUVEC 的成管数;Western blot 检测p-AMPK 以及抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达;使用AMPK 阻断剂Compound C 阻断 HUVEC细胞的AMPK信号通路。结果2-DG（200 mg/kg）明显减轻AA大鼠滑膜组织血管翳生成（P<0.01）;体外实验结果显 示,2-DG（0.5 mmol/L和/或5 mmol/L）可明显抑制HUVEC的增殖、迁移和体外成管（P<0.01或P<0.001）,加入AMPK受体阻断 剂Compound C（5 μmol/L）,2-DG对HUVEC的活化的抑制作用被明显阻断（P<0.01）;Western blot结果显示2-DG（5 mmol/L） 可以增加P-AMPK的蛋白表达,减少Bcl-2的蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05）。结论2-DG可能通过激活AMPK通路减 少Bcl-2的表达抑制内皮细胞增殖、迁移和体外成管,从而抑制类风湿关节炎血管新生。     

尼古丁对人RPE细胞及HUVEC的影响

目的探讨尼古丁对人视网膜色素上皮(RPE)细胞和血管内皮细胞(HUVECs)中血管内皮生长因子(VEGF)表达及形成新生血管能力的影响。方法 MTT法检测尼古丁对两种细胞增殖的影响;划痕及成管实验检测其对HUVECs迁移、成管的影响;RT-PCR和Western blotting法检测两种细胞经尼古丁处理后VEGF、PEDF mRNA及蛋白的表达。结果尼古丁促进HUVECs增殖、迁移、成管(P<0.05),但对ARPE-19细胞增殖无影响(P>0.05),且高浓度(100μmol/L)时抑制细胞增殖(P<0.01)。尼古丁以剂量和时间依赖方式促进两种细胞VEGF mRNA及蛋白的表达,抑制PEDF mRNA及蛋白的表达,上调VEGF/PEDF基因表达的比率(P<0.05)。结论尼古丁可上调ARPE-19细胞和HUVECs中VEGF/PEDF基因表达的比率,促进HUVECs增殖、迁移、成管。     

miR-122-3p靶向VEGFA基因对胰腺癌细胞恶性生物学行为影响的分子机制

目的 探讨miR-122-3p通过靶向血管内皮生长因子(VEGFA)基因对胰腺癌细胞增殖、克隆、迁移及侵袭能力影响的分子机制。方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞株(BxPC-3、Capan-1、PANC-1、HPAC、AsPC-1)与正常胰腺导管上皮细胞株HPDE中miR-122-3p mRNA及VEGFA mRNA的表达。将AsPC-1细胞株分为NC组、miR-con组、miR-122-3p mimic组、miR-122-3p+pcDNA组和miR-122-3p+pcDNA-VEGFA组。通过噻唑蓝(MTT)细胞增殖实验、平板克隆实验检测各组细胞增殖及克隆能力,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,通过蛋白质印迹实验检测MMP-2、VEGFA、ERK1、MAPK蛋白表达,通过双荧光素酶报告基因法和蛋白质印迹法验证miR-122-3p与VEGFA的靶向关系。结果 各胰腺癌细胞株中miR-122-3p mRNA表达量均低于HPDE细胞株,VEGFA mRNA表达量均高于HPDE细胞株(P<0.05)。miR-122-3...     

miR-30-5p在食管癌中的表达及对食管癌细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨miR-30-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法：选取开封市中心医院心胸血管外科和河南省人民医院胸外科2014年6月到2019年6月收集的食管癌和癌旁组织样本各120例,采用荧光定量PCR测定miR-30-5p mRNA表达水平。采用慢病毒建立食管癌细胞系EC109中建立miR-30-5p过表达稳定细胞系（miR-30-5p组）和对照细胞系（miR-control组）。采用EdU染色分析2组细胞的增殖情况;采用Transwell分析2组细胞的迁移情况;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-30-5p的靶基因;在miR-30-5p组和miR-control组过表达靶基因对细胞增殖和迁移的影响。结果：与癌旁组织比较,食管癌组织中miR-30-5p mRNA表达水平明显上调,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-control组比较,miR-30-5p组细胞增殖能力和细胞迁移能力明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示BCL-9是miR-30-5p的靶基因。在miR-control组细胞中过表达BCL-9,可显著提高细胞的增殖和迁移,差异有统计学意义（P<0.05）。而miR-30-5p组细胞过表达BCL-9,细胞增殖和迁移差异无统计学意义（P<0.05）。结论：miR-30-5p在食管癌中呈低表达,可导致靶基因BCL-9表达上调,进而促进食管癌细胞的增殖和迁移。     

miR-495-3p调控BUB1表达对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探究miR-495-3p调控BUB1表达水平对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法：qRT-PCR法测定人肝内正常胆管上皮细胞（HIBEpiC）、胆管癌细胞RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1中miR-495-3p和BUB1mRNA表达水平;将SNU-869细胞分为空白对照组、阴性对照组、miR-495-3pmimics组、miR-495-3p mimics+pcDNA组、miR-495-3p+pc-BUB1组,比较各组SNU-869细胞增殖、迁移和侵袭能力情况、miR-495-3p及BUB1 mRNA表达水平以及BUB1、ki-67、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况。结果：与HIBEpiC细胞相比,RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1细胞中miR-495-3p表达水平降低（P<0.05）,BUB1表达水平升高（P<0.05）。与空白对照组相比,miR-495-3p mimics组SNU-869细胞中miR-495-3p表达升高（P<0.05）,增殖能力、侵袭细胞数、迁移细胞数、ki-67、MMP-2、BUB1表达降低（P&l...     

miR-155反义寡核苷酸转染对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和MMP-13表达的影响

目的: 探讨miR-155表达对人甲状腺癌细胞增殖及侵袭力的影响。方法：构建针对miR-155的反义寡核苷酸（antisense miR-155,AS-miR-155),同时设立空白对照组和无义寡核苷酸(oligodeoxyribonucleotides,ODN)组。人甲状腺癌BCPAP细胞经转染处理后,采用荧光实时定量PCR检测3组细胞中miR-155 mRNA表达水平,划痕试验检测癌细胞迁移能力,Transwell方法检测细胞的侵袭能力。采用ELISA方法检测各组癌细胞上清液基质金属蛋白质酶（matrix metalloproteinase 13,MMP-13）含量。结果： 与对照组和无义ODN组比较,转染AS-miR-155组BCPAP细胞miR-155表达水平降低,细胞迁移速度变慢,穿膜细胞数较少,细胞中MMP-13蛋白水平亦明显减低（P<0.05）。结论： 采用寡核苷酸下调miR-155高表达可抑制甲状腺癌细胞增殖及侵袭力,下调MMP-13表达是其重要机制。［关键词］     

microRNA-9-5p靶向MEF2C对腺泡状横纹肌肉瘤细胞生物学行为的影响

目的：探讨microRNA-9-5p （miR-9-5p）靶向肌细胞增强因子2C （MEF2C）对腺泡状横纹肌肉瘤（ARMS）细胞生物学行为的影响,为ARMS的分子诊断和靶向治疗提供依据。方法：qRT-PCR法检测ARMS组织和细胞中miR-9-5p和MEF2CmRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因检测293T细胞中荧光素酶活性,Western blotting法检测细胞中MEF2C蛋白表达水平。结果：ARMS组织和细胞中miR-9-5p表达水平高于正常骨骼肌组织和HSKMC细胞（P<0.05）。与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中miR-9-5p表达水平降低（P<0.01）,细胞增殖率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞侵袭和迁移数降低（P<0.05）。加入miR-9-5p后,共转染MEF2C-3'-UTR-WT的293T细胞中荧光素酶活性降低（P<0.01）;与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中MEF2C mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。ARMS组织中MEF2C mRNA表达水平低于正常骨骼肌组织（P<0.01）,且与ARMS组织中miR-9-5p表达呈负相关关系（r=-0.542,P<0.05）;RH30细胞和PLA802细胞中MEF2CmRNA表达水平低于HSKMC细胞（P<0.01）。与转染对照质粒（EV）比较,转染MEF2C过表达质粒后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平升高（P<0.01）,细胞增殖率降低（P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,细胞迁移数降低（P<0.01）。与转染si-NC比较,转染MEF2CsiRNA后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,细胞侵袭数升高（P<0.01）,细胞迁移数升高（P<0.01）。结论：miR-9-5p通过直接靶向MEF2C mRNA的3'-UTR诱导mRNA降解而抑制MEF2C表达,从而促进RH30细胞的增殖、侵袭、迁移以及抗凋亡能力。     

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的：探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法：采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果：与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<...     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

MiR-491-5p过表达对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨微小RNA-491-5p (miR-491-5p)过表达对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响,为研究鼻咽癌的发病机制和靶向治疗提供依据。方法：将人鼻咽癌HONE-1细胞分为对照组（转染对照质粒）和miR-491-5p组（转染miR-491-5p质粒）。采用荧光显微镜观察2组鼻咽癌HONE-1细胞转染效率,CCK-8法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性,Transwell小室实验检测2组鼻咽癌HONE-1细胞的迁移细胞数,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素mRNA表达水平,Western blotting法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素蛋白表达水平。结果：与对照组比较,作用24、48和72 h时miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性（t=2.832,P=0.047 3;t=4.522,P=0.001 4;t=9.308,P<0.01）和迁移细胞数（t=9.639, P<0.01）明显降低;与对照组比较,miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白mRNA...     

miR-4804-3p在乳腺癌中的表达及意义

目的：探讨miR-4804-3p在乳腺癌组织中的表达水平及意义，同时观察其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响并初步探讨其机制。方法：利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析miR-4804-3p在40例乳腺癌组织和不同乳腺癌细胞株中的表达水平，并分析miR-4804-3p水平与临床病理指标的关系；利用细胞计数试剂盒（CCK-8）和划痕愈合实验观察miR-4804-3p对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。结果：miR-4804-3p在乳腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.01），其水平与患者TNM分期、淋巴结转移和补体C3水平有关（P<0.05），与热休克蛋白90α和抑制性T淋巴细胞水平呈负相关关系（P<0.05），与B淋巴细胞数量呈正相关关系（P<0.05）。miR-4804-3p在乳腺癌细胞株中的表达水平也显著低于正常乳腺上皮细胞（P<0.05），过表达miR-4804-3p可抑制三阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移。结论：miR-4804-3p在乳腺癌组织和细胞中的表达水平显著下调，有望参与调控乳腺癌的发生发展过程，miR-4804-3...     

尿源性干细胞外泌体对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用

 目的 探究尿源性干细胞外泌体（urine-derived stem cell exosomes,USC-Exo）对高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）损伤模型的保护作用。方法 采用酶灌注法、超速离心法获取HUVEC和USC-Exo。以高糖诱导的HUVEC损伤模型为研究对象,设立空白对照组、造模组和给药实验组。采用CCK-8测定各组细胞增殖活力,挑选最适合给药浓度;观察药物影响下各组细胞在划痕迁移、成管实验以及低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）摄取中的表现差异;采用qRT-PCR方法检测B细胞淋巴瘤因子-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,BAX）、超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase-2,SOD2）等基因的表达。结果 本实验获取了高质量的HUVEC以及USC-Exo;在高糖影响下内皮细胞的增殖活力、迁移成管能力、摄取LDL的功能相比对照组均有所下降（P<0.05）,而USC-Exo则可以实现逆转,优化内皮细胞功能,逆转凋亡基因的表达,增强抗氧化能力（P<0.05）。结论 USC-Exo可在一定程度上保护内皮细胞,缓解高糖造成的细胞损伤。     

益气活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞血管新生功能的影响

目的：观察益气活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞（ CMECs）增殖、迁移、成管功能的干预作用,及其对细胞增殖相关蛋白激酶（ERK）和细胞死亡相关分子（p53）mRNA 表达的影响。方法制备芪参益气滴丸高剂量（QG 组）、中剂量（QZ 组）、低剂量（QD 组）大鼠含药血清,分别与大鼠缺血 CMECs 共孵育,同时制备空白血清,分别与心肌缺血模型大鼠（ MX 组）、正常大鼠（ ZC组）来源的原代 CMECs 共孵育;噻唑蓝比色法检测细胞增殖情况,细胞划痕法检测细胞迁移能力,倒置相差显微镜观察管腔结构的形成情况;实时定量聚合酶链反应（ Real - time PCR）检测 ERK 和 p53 mRNA 的表达情况。结果增殖窗口期 QZ 组、QD 组均为第2天,而 QG 组、ZC 组均为第3天,MX 组为第6天;QG 组、QZ 组、QD 组增殖率、迁移率及成管率均显著高于 MX 组,而 QD 组增高最明显（P ﹤0.01）;与 MX 组比较,QG 组、QZ 组、QD 组 ERK mRNA 表达增加,p53 mRNA 表达降低（P ﹤0.05）。结论益气活血中药可促进大鼠缺血 CMECs 的血管新生功能,但其作用与药物剂量并非成正相关,可能与不同药物浓度干预导致 ERK 及 p53的差异表达有关。     

炭疽毒素受体2表达受miR-145-5p调控在胰腺癌的作用机制研究

目的：探讨炭疽毒素受体2(anthrax toxin receptor 2,ANTXR2)在胰腺癌组织和细胞中的表达、临床意义和细胞功能，验证miR-145-5p在胰腺癌细胞中调控ANTXR2的作用机制。方法：分析GEO和TCGA数据库中胰腺癌的转录数据和临床数据。通过CCK-8实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验进行细胞功能验证。采用miRNA靶点预测数据库反向预测可能通过ceRNA机制抑制ANTXR2表达的miRNA，并使用双荧光素酶报告实验进行验证。结果：ANTXR2在胰腺癌组织和细胞中的表达均上调（均P<0.05）,ANTXR2上调预示着原发肿瘤等级（P<0.05）、肿瘤细胞分化等级（P<0.05）和总体生存期（P<0.05,HR=1.72）均较差。ANTXR2可以促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）。ANTXR2是miR-145-5p下游的靶标（P<0.01）,miR-145-5p可以通过抑制ANTXR2的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论：ANTXR2在胰腺癌组织和细胞中过表达，促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵...     

microRNA-1290通过 NDRG1/NF-κB/IL-6信号通路促进结肠癌细胞迁移和侵袭

目的: 探讨微小RNA-1290（microRNA-1290,miR-1290）通过N myc下游调节基因 1（N-Myc downstream-regulated gene 1,NDRG1）调控NF κB/IL 6活化分子机制及其对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法: 选择48例结肠癌患者肿瘤及癌旁组织,用免疫组织化学染色检测IL 6表达;qRT-PCR法检测20例肿瘤组织,结肠癌细胞与正常结肠上皮HCoEpiC细胞中IL-6 mRNA及miR-1290表达;结合miR-1290类似物及抑制剂处理,蛋白质印迹和ELISA法分别检测结肠癌细胞中p-NF-κB、NF-κB、NDRG1、上皮钙黏素、波形蛋白表达以及IL-6外泌量;小干扰RNA及中和性抗体靶向下调IL-6表达,miR-1290类似物处理,划痕实验以及Transwell实验检测结肠癌细胞迁移、侵袭能力。结果： 结肠癌中IL-6免疫组织化学染色评分明显高于癌旁组织（P<0.01）;结肠癌瘤体内miR-1290与IL-6 mRNA表达呈正相关（r=0.845 4,P<0.01）;与HCoEpiC细胞相比,结肠癌细胞中miR-1290表达明显增高（P均<0.01）;上调miR-1290表达可抑制NDRG1表达从而促进NF-κB信号通路及上皮间充质转化活化（P<0.01）,而下调miR-1290表达可促进NDRG1、上皮钙黏素表达并抑制p-NF-κB和波形蛋白形成（P<0.01）;划痕实验显示上调miR-1290表达可增强结肠癌细胞迁移能力,而敲低IL-6后细胞愈合率则明显抑制（P<0.01）;miR-1290类似物处理促进结肠癌细胞侵袭,而抗体中和IL-6可显著降低侵袭细胞数（P<0.01）。结论： 结肠癌细胞中miR-1290可通过抑制NDRG1形成促进NF-κB/IL-6调控轴诱导的细胞迁移和侵袭发生。     

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的：探讨微小RNA-216a-5p（miR-216a-5p）靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白（WASL）对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法：收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物（miR-216a-5p）、模拟物阴性对照（miR-con）、沉默对照（si-con）、沉默WASL的小干扰RNA（si-WASL）、抑制物阴性对照（anti-miR-con）、miR-216a-5p抑制物（anti-miR-216a-5p）、miR-216a-5p及空载质粒（pcDNA）和miR-216a-5p及WASL过表达质粒（pcDNA-WASL）分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR（Real-time RT-qPCR）和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果：与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低（P<0.05）,WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,两者呈负相关关系（r=-0.317,P<0.01）。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平（P<0.01）和细胞增殖活性均明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

黄连素调控GRP78表达对内皮细胞新生血管的抑制作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在内皮细胞新生血管中的表达及黄连素的干预作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,利用4-苯基丁酸（4-PBA）5mmol/L,毒胡萝卜素（TG）300nmol/L,TG300nmol/L联合低、中、高剂量（50、75、100滋mol/L）黄连素分别作用24h,对照组为正常培养的HUVEC。采用噻唑蓝（MTT）法、划痕法、MatrigelMatrix胶法分别检测细胞增殖、迁移、成血管能力,qRT-PCR法、Westernblot法分别检测HUVEC中血管内皮生长因子（VEGF）、GRP78、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）mRNA和蛋白表达,免疫荧光法观察GRP78在细胞内的定位。结果≤100滋mol/L的黄连素对HUVEC增殖无明显影响（P＜0.05）。与对照组比较,4-PBA组细胞迁移、成血管能力均明显减弱（均P＜0.05）;TG组细胞迁移、成血管能力均明显增强（均P＜0.05）,HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显升高（均P＜0.05）。与TG组比较,黄连素低、中、高剂量干预组细胞迁移、成血管能力均明显减弱（均P＜0.05）,HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显降低（均P＜0.05）。在荧光显微镜下观察,GRP78分布于内皮细胞的细胞膜上。结论GRP78在HUVEC新生血管过程中发挥重要作用,黄连素可能通过抑制GRP78表达从而抑制内皮细胞血管新生。     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响

  目的  探究miR-382-5p过表达对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响。  方法  将miR-382-5p mimic转染入U251细胞,逆转录-聚合酶链反应检测miR-382-5p、磷酸酶-张力蛋白同源物（PTEN） mRNA水平;生物信息学预测miR-382-5p与PTEN存在碱基结合位点,构建PTEN pcDNA载体过表达,荧光素酶报告实验检测miR-382-5p与PTEN靶向关系,将细胞随机分为4组:Control组、mimics组、pc-PTEN组和mimics+pc-PTEN组进行后续实验,逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞PTEN水平;克隆形成法检测细胞增殖;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、 Survivin、 c-Myc mRNA水平;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。  结果  miR-382-5p和PTEN存在直接靶向作用关系,与Control组相比较,mimics组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平降低（P<0.05）,PTEN mRNA水平升高（P<0.05）,细胞克隆形成率升高（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平升高（P<0.05）,c-Myc mRNA水平降低（P<0.05）,细胞侵袭数升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平升高（P<0.05）;与pc-PTEN组相比较,mimics+pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。  结论  miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调可抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、生长和上皮细胞-间充质转化。     

血管内皮细胞来源外泌体miR-214对H2O2诱导血管内皮细胞损伤的影响

探讨血管内皮细胞来源外泌体miR-214对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞损伤的影响。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,并转染miR-214抑制物（in-miR-214）及其阴性对照（in-miR-NC）,分离并鉴定外泌体,同时检测miR-214表达。再次培养HUVEC,分为正常对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、空白外泌体+氧化损伤组（exo NC+H2O2组）、in-miR-NC外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-NC+H2O2组）和in-miR-214外泌体+氧化损伤组（exo in-miR-214+H2O2组）。qRT-PCR检测细胞中miR-214表达水平;MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白水平。结果 成功从HUVEC 细胞中分离出外泌体,且转染in-miR-214可抑制外泌体中miR-214表达（P＜0.05）。H2O2诱导后,HUVEC细胞增殖活力和划痕愈合率降低,凋亡率增高;同时,细胞中miR-214表达水平增高,Cyclin D1、PCNA、Bcl2、MMP2和MMP9蛋白水平降低,Bax蛋白水平增高（P＜0.05）。添加HUVEC外泌体和外泌体来源的in-miR-214可部分削弱H2O2 对HUVEC细胞的损伤,且后者的效果要明显优于前者（P＜0.05）。结论 HUVEC来源外泌体通过低表达miR-214保护HUVEC免受H2O2诱导的细胞损伤