ROS对内皮细胞胞浆游离钙水平的影响

目的探讨活性氧（ROS）在TNFα刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）胞浆游离钙水平变化中的作用。方法用氧化-还原敏感的荧光探针2,7-Dichlorofluorescein（DCF）检测细胞内氧化-还原水平。用激光共聚焦显微镜检测胞浆游离钙浓度。结果TNFα（200U/ml）处理24h后,HUVEC胞内ROS水平和游离钙浓度均明显升高;NAC（20mmol/L）预处理可明显抑制胞浆内游离钙浓度（P〈0.01）。结论ROS部分介导了TNFα对胞浆内游离钙水平的诱导作用。     

蝙蝠葛碱拮抗缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的作用

目的 胞内钙离子浓度升高是Alzheimer病(AD)显著的病理生理学变化之一，本研究讨论蝙蝠葛碱对缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的影响。方法 采用钙荧光探针Fura-2／AM定量测试了蝙蝠葛碱(Dau)对缓激肽诱导的人成神经细胞瘤细胞(SH-SY5Y)胞内钙升高作用的影响。结果 Dau可显著抑制缓激肽所致胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)升高，并存在剂量-效应关系。结论 Dau有抑制AD样[Ca^2 ]i升高的作用，为AD的发病机制和防治提供了新的线索。     

褪黑素在叠氮钠所致的海马锥体细胞钙超载中的神经保护作用

目的 观察叠氮钠对急性分离的大鼠海马锥体神经元胞内游离钙的作用以及不同浓度的褪黑素（Melwatonin, MT)的影响。方法 海马锥体细胞的急性分离，新型游离钙荧光探针Fluo-4AM负载海马锥体细胞，激光共聚焦动态检测胞内游离钙的变化及叠氮钠，褪黑和荷包牡丹碱的作用。结果 在孵育液中加入叠氮钠（0.8mg/ml）能使急性分离的海马锥体细胞胞内游离钙在200s内急剧升高并维持在高水平，处于钙超载状态。褪黑素能使NaN3所致的海马锥体细胞内处于超载状态的游离钙显著下降，并有量效关系。结论 叠氮钠导致海马神经细胞损伤的早期原因可能是钙超载，MT促进钙离子向细胞外的转运而抑制叠氮钠所致的钙超载。     

Corilagin抗PAF诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究Corilagin抗血小板活化因子（PAF）损伤人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制．方法用PAF损伤HUVEC,采用MTT法测定Corilagin对HUVEC活性的影响;以Fura-2／AM荧光探针负载细胞,用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度;用ELISA法测定培养的细胞上清液中t-PA、PAI-1含量的变化．结果1μmol／L的PAF刺激内皮细胞2h后,可明显降低HUVEC的吸光度值,细胞内钙离子浓度升高,PAI-1含量明显升高,t-PA含量无明显变化;50～200μmol／L的Corilagin可升高PAF引起HUVEC吸光度值的降低,呈浓度依赖性显著降低HUVEC内游离钙浓度;Corilagin明显抑制PAF诱导的PAI-1分泌增高,对t-PA水平无明显影响．结论Corilagin对PAF诱导的HUVEC损伤具有保护作用,其机理可能与降低细胞内钙离子浓度、抑制PAI-1产生、调节t-PA／PAI-1平衡密切相关．     

P物质对大鼠垂体前叶细胞内Ca2+浓度的影响

目的研究P物质（SP）对大鼠垂体前叶（AP）培养细胞内Ca^2＋的影响,进而阐述SP的作用机制。方法原代培养成年雌性S-D大鼠的AP细胞48h后,加入不同浓度的SP孵育30min,采用Fura-2/AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的AP细胞,结合阳离子测定系统检测AP细胞[Ca^2＋]i。结果孵育时间为30min时,SP使AP细胞内Ca^2＋的水平增加,且呈剂量依赖性。结论Fura-2/AM结合阳离子测定系统可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度,SP通过SPR产生的生物学效应可通过第二信使Ca^2＋来完成,在SP对生殖轴（下丘脑-垂体前叶-卵巢/睾丸）调控的理论中进一步证明了第二信使转导途径的作用。     

虎杖甙对内毒素刺激的单个巨噬细胞内游离钙动态变化的影响

用荧光染料Indo-1标记小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙,在粘附式细胞仪检测下观察细胞内游离钙的动态变化，在大肠杆菌O55：B5内毒素刺激下细胞内游离钙迅速升高，于第400s达峰值．经虎杖甙处理的巨噬细胞加入内毒素后，胞质游离钙无明显增高．因细胞浴于无钙环境，故胞内游离钙升高不是由于细胞外的Ca2+进入细胞，而是由于内毒素影响胞内钙库调节功能．虎杖甙可能保护胞内钙库中胞质钙的某种调节机制，从而避免胞质游离钙升高．     

白花蛇舌草对宫颈癌细胞钙信号的影响

为探讨白花蛇舌草对宫颈癌细胞胞内游离钙浓度的影响及其抗癌作用机理。利用荧光染料Fura-2在细胞内能与游离钙结合，在一定波长光的激发下可发出荧光的特性，根据荧光的强度来检测游离钙的变化。结果显示：白花蛇舌草通过促进细胞内储藏钙的释放和胞外钙离子的内流，显著提高宫颈癌细胞内游离钙的浓度。     

几种胃肠肽对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制

目的　研究表皮生长因子 (EGF)、神经降压素 (NT)、降钙素基因相关肽 (CGRP)对四氯化碳 (CCl4)急性损伤的在体大鼠肝脏和离体培养肝细胞的保护作用 ,并探讨其机制。　方法　第一步建立大鼠 CCl4损伤模型 ,设立对照组、损伤组及各胃肠肽保护组 ,于注射 CCl4前 30 min、前 10 min,后 10 min注射各胃肠肽 ,2 4h后测定血清酶学水平、肝匀浆 SOD活性及 MDA含量 ,观察肝脏形态学变化 ;第二步建立大鼠离体培养肝细胞损伤模型 ,设对照组、损伤组及不同浓度胃肠肽预处理组 (胃肠肽提前 1h加入 ) ,2 4h后测上清液酶学水平、肝细胞内 SOD活性和 MDA含量 ,以台盼蓝染色试验计算肝细胞存活率 ,观察形态学变化 ;第三步以 Fura- 2 / AM和 DPH荧光探针测定肝细胞内游离钙和膜流动性 ,观察对肝细胞有直接保护作用的胃肠肽对这两个指标的影响。　结果　 (1) EGF、NT、CGRP明显降低 CCl4损伤后大鼠血清酶学水平、肝匀浆 MDA含量 ,使 SOD活性回升 (P<0 .0 1) ,改善肝脏病理学变化。(2 ) EGF、NT明显降低原代培养肝细胞 CCl4损伤后上清液酶学水平、MDA含量 ,提高 SOD活性和细胞存活率 (P<0 .0 1) ,改善形态学变化。CGRP对上述指标和形态学改变无明显影响。(3) EGF、NT明显对抗肝细胞 CCl4损伤后胞内 [Ca2 + ]i的增高和膜流动     

细菌脂多糖对NIH3T3细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响

目的 :探讨细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,L PS)对 NIH 3T3细胞增生、胞内游离钙及 c AMP浓度的影响。　方法 :以中性红比色法检测细胞生长 ,酚试剂法检测细胞蛋白质合成 ,并动态检测 L PS对胞内游离钙和 c AMP浓度的影响。　结果 :1微量 L PS可促进细胞生长及蛋白质合成 ;2 L PS作用后 3～ 5 min可使胞内游离钙浓度升高 ,作用 1 m in后使 c AMP浓度升高 ,并保持较高水平。　结论 :胞内游离钙 ([Ca2 ]i)及 c AMP是 L PS对 NIH3T3细胞作用过程中重要的信使分子     

严重烧伤大鼠心肌[Ca2+]i浓度变化及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系

目的：了解大鼠严重烧伤后心肌细胞胞内游离钙离子浓度[Ca^2 ]i动态变化特征及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系。方法：复制Wistar大鼠30％体表面积（TBSA）Ⅲ度烧伤模型，随机分为烧伤组，补液组，维拉帕米治疗组和对照组。烧伤后不同时相点处死动物。Fura-2/AM测定大鼠心肌细胞胞内游离钙离子浓度，原位杂交技术检测心肌c-fos、c-myc mRNA的表达。结果：心肌细胞胞内游离钙离子逍度单烧组和补液组明显升高（IP＜0．01），维拉帕米治疗组轻度升高（P＞0．05），在0．5h,72h两个时相点，三个实验组心肌细胞[Ca^2 ]i明显低于对照组（P＜0．01）。除了维拉帕米治疗组c-fos、c-myc表达与钙离子浓度无相关性（r＝0．74，P＞0．05），其它各实验组c-fos、c-myc的表达与心肌细胞钙离子浓度成正相关性。结论：烧伤导致心肌细胞钙超载，补液不能阻止[Ca^2 ]i升高，而烧伤后大鼠心肌细胞原癌c-fos、c-myc的表达与胞内游离钙离子浓主有密切关，钙离子可能参与烧伤后心肌细胞原癌基因表达的调节。     

用荧光钙离子指示剂fura—2AM检测心肌细胞内游离钙

本实验采用游离钙离子荧光指示剂fura－2AM检测大鼠离体心室肌细胞内游离钙的浓度。其结果如下；（1）KC1可以使心肌细胞内游离钙浓度升高，去掉细胞外液中钙离子，KC1的升钙作用则消失。（2）甲氧胺和咖啡因可使心肌细胞内游离钙浓度升高。二者的作用分别被哌唑嗪和普鲁卡因所对抗。提示该法切实可行。     

Rh123、FDA荧光法测定超声作用对大肠杆菌细胞膜的影响

目的研究大肠杆细胞经超声处理后细胞膜通透性和细胞膜电位的变化。方法应用二乙酸荧光素(FDA)、罗丹明123(Rh123)染色,通过荧光分光光度计检测FDA、Rh123荧光强度的变化,观察大肠杆菌细胞经25 kHz、300 W超声处理后细胞膜通透性和细胞膜电位的变化。结果大肠杆菌细胞经25 kHz 300W超声处理,随处理时间延长,FDA、Rh123都降低。在90 s内,超声处理对细胞存活率影响不明显,膜电位降低26.7%,膜通透性增加33.3%。结论大肠杆菌经一定超声处理后膜通透性增加,膜电位降低。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响

目的研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)和细胞膜电位的影响。方法Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2 ]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响。结果甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2 ]i,降低细胞膜电位。升高[Ca2 ]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高。甜菜碱50、25mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P<0.01),甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较差异显著(P<0.05)。给药48h时间段内细胞内的[Ca2 ]i升高的幅度较大,72h升高幅度相对较小。而降低膜电位上,在48h时间段内,甜菜碱50、25、12.5mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P<0.05),但在72h时间段内甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2 ]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡。     

不同浓度中药柴胡提取物对人肝癌细胞内Ca2+和p53表达的影响

目的：测定不同浓度中药柴胡（Bupleurun Chinese DC，BCDC）提取物对BEL-7402细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）和p53表达的影响，以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法：用Fura-2／AM作为细胞内钙离子的荧光指示剂，用双波长荧光分光光度计测定不同浓度柴胡提取物作用下BEL-7402细胞内[Ca^2＋]i及其剂量-效应关系；用免疫组化法检测不同条件下BEL-7402细胞的p53表达。结果：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降（P〈0．001），但不具有剂量-效应关系；BEL-7402细胞呈p53天然突变。结论：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降，为一种钙离子通道阻滞剂（calcium channel blocker，CCB），提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一；BEL-7402细胞呈p53天然突变也可直接或间接影响肿瘤多药耐药性的表达。     

青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及[Ca2+]i的影响

目的考察青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性及[Ca2 ]i的影响。方法青龙衣多糖对S180小鼠ip给药7 d,比色法结合试剂盒测定S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,采用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM荧光探针测定红细胞内[Ca2 ]i。结果青龙衣多糖能提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性(P<0.05);降低S180小鼠红细胞[Ca2 ]i(P<0.05),并且青龙衣多糖的作用呈剂量依赖性,以高剂量组的作用最佳(P<0.01)。结论青龙衣多糖通过提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,排除离子跨膜转运障碍,稳定其能量代谢和物质代谢,有利于维持细胞内Ca2 的正常浓度。     

鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用。方法MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cytc的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cytc蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P0.01)。流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Bax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cytc释放有关。     

肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响

目的:较系统地研究肌浆网(SR)内钙容量的减少对心肌细胞钙释放的影响.方法:采用肌浆网膜的钙泵抑制剂thapsigargin(TG)耗减SR内钙容量,以喷咖啡因的方法估测SR内钙容量,以局部场刺激的方法诱发全细胞的钙释放.胞内钙信号的变化均采用激光共聚焦显微镜的方法记录.结果:SR钙泵抑制剂TG以剂量依赖和非线性的时间依赖方式引致心肌细胞SR内钙容量的耗减,而钙容量的耗减可相应地引起全细胞水平的钙释放减少.但二者的变化不完全平行,SR内钙容量的少量减少即可引起胞内钙释放的显著减少,而当SR内钙耗减到一定程度后(虽然此时SR内Ca2 仍远高于胞质内钙),场刺激已很难或无法引致钙释放.结论:心肌细胞SR内钙容量对胞内钙释放具有重要的非线性调节作用.     

钙通道Na~+—Ca~(2+)交换与心肌缺血再灌注中的钙超负荷

在离体大鼠心脏灌流模型上,缺血25分钟后再灌注5分钟,实验各组在再灌注5分钟时冠脉流出液中的蛋白含量与缺血前相比无显著性变化,表明细胞膜无缺损。但是,和正常组相比,(1)K-H液再灌注导致心脏钙、钠含量显著增加,钾含量显著下降;(2)再灌液中加入异搏定使心脏各离子含量恢复正常;(3)再灌液中同时加入异搏定和Mn~(2+),又出现钙含量显著增加;(4)再灌液中加入异搏定的同时增加Na~+含量,出现钙含量显著下降。结果表明,在细胞膜缺损前,钙通道是钙超负荷发生的主要途径。Na~+-Ca~(2+)交换的作用,有助于减弱钙的超负荷。     

羟嘌呤醇对衰竭心肌蛋白氧化和心肌收缩力的长期效果

目的研究黄嘌呤氧化酶（XO）抑制剂——羟嘌呤醇（Oxy）增强缺血后心力衰竭心肌收缩力的长期效果,并初步探讨其作用机制。方技将120只SV120小鼠随机分为心肌梗死（MI）对照组、假手术组和Oxy治疗组。通过结扎冠状动脉左前降支（LAD）建立小鼠缺血后心力衰竭模型。Oxy治疗组口服1mmol／L Oxy。9～11个月后,对三组小鼠进行心脏超声检查;取右心室束状肌分析其心肌兴奋-收缩耦联的变化。应用激光光栅衍射测定肌节长度;应用离子渗透微注射法向样本心肌细胞内注入Fura-2荧光染料,测量心肌细胞质内游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]．）;通过应用ryanodine和增加刺激频率的方法使心肌达到强直收缩,即心肌纤维与Ca^2＋的相互作用处于稳定状态,分析在稳定状态下心肌收缩力一细胞内钙关系;应用Western blotting测定肌丝蛋白的氧化情况。结果长期口服Oxy能明显改善心力衰竭小鼠的心脏收缩功能,减小室壁厚度;明显改善心肌细胞的兴奋-收缩耦联过程,有效地增强心肌收缩力,显著提高稳态时心肌细胞钙激活的最大收缩力（Fmax）。Western blotting检测显示,与MI对照组心肌肌丝蛋白相比,Oxy治疗组中的肌动蛋白氧化修饰受到明显抑制。结论长期服用Oxy能够有效改善衰竭心肌的工作状态,改善／促进兴奋-收缩耦联过程,增强心肌收缩力。这种长期作用的机制是抑制心肌肌丝中肌动蛋白的氧化修饰,从而增强肌丝对钙的敏感性,增加收缩力。Oxy由于对[Ca^2＋]．的增加较小,能够减轻细胞内Ca^2＋负担及其所带来的负作用,具有更好的临床应用前景。     

DMSO致小鼠肝癌腹水瘤细胞Hca-F25/CL-A_2分化后钙恒稳的变化

本文测定了小鼠肝癌腹水瘤细胞Hca-F25/CL-A_2经二甲亚砜(DMSO)诱导分化前后钙恒稳的有关指标。结果表明,细胞经DMSO诱导向正常形态转化,细胞内总钙水平、胞液Ca~(2+)浓度和微粒体Ca~(2+)-ATP酶活性均明显下降,线粒体内钙含量显著提高。结果提示,细胞内钙恒稳状态与肿瘤细胞的分化和增殖密切相关。