蛋白胶联剂京尼平与戊二醛的生物学特性比较

目的:从交联度、细胞毒性、溶胀率与降解率方面比较京尼平和戊二醛交联明胶的生物学特性。方法:实验于2005-06/2006-01在哈尔滨医科大学附属第二医院实验中心完成。①材料分为两组,京尼平组用10g/L京尼平交联明胶72h,戊二醛组用10g/L戊二醛交联明胶24h。②检测交联度:每组材料取8个样本,其中5个加入碳酸氢钠和三硝基苯磺酸,再加盐酸,在346nm测吸光度值(A三硝基苯磺酸)。另取3个样本先加盐酸,然后再加三硝基苯磺酸,其余步骤相同,测得吸光度取平均值作为对照(A对),交联后吸光度值为:A交联后=A三硝基苯磺酸-A对。再取11mg明胶加19μL水,不加京尼平,同样步骤测吸光度,得到交联前吸光度(A交联前)。交联度=(A交联前-A交联后)/A交联前×100%。③细胞毒性试验:按照1cm2/mL比例用培养液浸提5组材料制备浸提液,将中国仓鼠V-79细胞种植于96孔板,分为3组:阴性组(单纯培养液)、京尼平组(加京尼平明胶浸提液)、戊二醛组(加戊二醛明胶浸提液),48h后做四甲基氮唑蓝检测。细胞相对增殖率=浸提液组平均A值/阴性对照组平均A值×100%。各组的细胞相对增殖率转换成6级(0～5级)细胞毒性以评定材料的毒性程度。④溶胀度与降解率:材料交联完成后立即称重(W0)。然后在离心管中加2mL无菌磷酸盐缓冲液,24h后两组各取8个材料,用无菌滤纸擦干水分后称重(W1)。溶胀率=(W1-W0)/Wo×100%。其他材料3d换液1次,于1,2,3,4,8,12周分别取出两组材料各8个,用无菌滤纸擦干水分后称重(W2)。降解率=(W1-W2)/W1×100%。结果:①京尼平和戊二醛交联明胶材料的交联度分别为79.1%和52.3%。②京尼平材料的溶胀度高于戊二醛材料犤(166±38)%,(133±31)%,P<0.05犦。③京尼平和戊二醛材料在磷酸盐缓冲液中浸泡12周,降解率差异无显著性(14.1%,12.6%)。④戊二醛交联明胶的浸提液培养的细胞出现坏死现象,而京尼平材料浸提液培养的细胞生长良好。京尼平和戊二醛材料的细胞增殖度分别为96.6和23.1。结论:京尼平交联明胶材料与戊二醛交联明胶材料比较,交联度降低,溶胀度增加,但二者制成的材料在磷酸盐缓冲液中浸泡12周都仅有少量降解,差异无显著性。京尼平的细胞毒性明显低于戊二醛。     

竹荪托盖液对辐射损伤大鼠免疫功能的修复作用

目的：竹荪是含有锌、铜、铁、硒等具有免疫增强作用的微量元素的菌体，探讨竹荪托盖液对辐射损伤大鼠免疫功能的修复作用，并观察剂效关系。方法：实验于2003—09／11在泸州医学院附属医院传染与免疫实验室完成。选择雄性健康SD大鼠60只，随机分为5组，竹荪托盖液大剂量组12只、竹荪托盖液中剂量组12只、竹荪托盖液小剂量组12只、贞芪口服液组12只、空白对照组12只，以 ^60Co-γ射线300 cGy（55cGy／min 3668）一次性全身照射造成大鼠辐射损伤。照射后第2天开始对辐射损伤大鼠进行灌喂试验（竹荪托盖液大剂量组8g,1 mL／d，竹荪托盖液中剂量组4g,0．5mL／d，竹荪托盖液小剂量组2g,0．25mL／d，贞芪口服液组15g，1mL／d），30d后断颈处死实验大鼠，采血作免疫指标检测。解剖取胸腺、脾脏作指数测定。结果：5组60只动物均进入结果分析。①胸腺指数、脾脏指数计量分析结果：竹荪托盖液各组胸腺、脾脏明显增大（竹荪托盖液大剂量组、竹荪托盖液中剂量组、竹荪托盖液小剂量组胸腺指数分别为0．009&;#177;0．065，0．008&;#177;0．079，0．008&;#177;0．053；脾脏指数分别为0．027&;#177;0．032，0．024&;#177;0．051，0．024&;#177;0．042）呈现剂量效应关系，胸腺指数、脾脏指数竹荪托盖液大剂量组与空白对照组（0．008&;#177;0．027，0．023&;#177;0．039）比较差异显著（X^2=9．95&;#215;10^-4，P〈0．01），竹荪托盖液大剂量组与贞芪口服液组（0.008&;#177;0．061，0．024&;#177;0．042）比较差异显著（X^2=8．60&;#215;10^-4，P〈0．01）。②各组免疫指标分析结果：竹荪托盖液大剂量组免疫球蛋白IgG，IgA，IgM分别为（2．18&;#177;0．19），（0.33&;#177;0．13），（0．77&;#177;0．18）g／L，竹荪托盖液大剂量组与贞芪口服液组[（2．48&;#177;0．17），（0．26&;#177;0．04），（0．47&;#177;0．16）g／L]比较差异显著（P〈0．05，P〈0．01），竹荪托盖液大剂量组与空白对照组[（2．56&;#177;0．33），（0．25&;#177;0．02），（0．40&;#177;0．10）g／L]比较差异显著（P〈0．05，P〈0．01）。竹荪托盖液大剂量组CD4^＋，CD8^＋分别为（43．48&;#177;1．33）％，（27．2&;#177;0．42）％，竹荪托盖液大剂量组与贞芪口服液组[（40．27&;#177;2．85）％，（31．33&;#177;1．01）％]比较差异显著（P〈0．05），竹荪托盖液大剂量组与空白对照组[（39．97&;#177;2．95）％，（29．08&;#177;1．80）％]比较差异显著（P〈0．05）。各组间比较P〈0．05，白细胞介素2竹荪托盖液大剂量组为（33．14&;#177;2．23）ng／L，竹荪托盖液大剂量组与贞芪口服液组[（30．14&;#177;2．21）ng／L]比较差异显著（P〈0．05），竹荪托盖液大剂量组与空白对照组[（29．73&;#177;1．45）ng／L]比较差异显著（P〈0．01）。自然杀伤细胞明显表现竹荪托盖液大剂量组CD16，CD57最高，分别为（23.00&;#177;2．04）％，（21．42&;#177;3．60）％，竹荪托盖液大剂量组与贞芪口服液组[（17．33&;#177;9．02）％，（17．33&;#177;9．77）％]比差异显著（P〈0．01，P〈0．05），竹荪托盖液大剂量组与空白对照组[（13．67&;#177;4．14）％，（14．00&;#177;1．41）%]比差异显著（P〈0．01）。结论：①竹荪托盖液能增加辐射损伤大鼠胸腺指数、脾脏指数，且呈剂量效应关系。②改善血清体液免疫及细胞免疫指标，提高T细胞生长因子的指数，其胸腺、脾脏指数增加与免疫功能增强有关。③竹荪托盖液大剂量组各项指标表现出的作用均为最佳，优于贞芪口服液组和空白对照组。     

脱细胞血管基质与血管平滑肌细胞的体外相容性

目的：酶-化学除垢剂制备脱细胞血管基质，检测其与平滑肌细胞的相容性，探讨其作为组织工程支架材料的可行性。 方法：实验于2003-12／2005-12在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。①脱细胞血管基质制备：在37℃水浴振荡条件下，犬总动脉先后用1g/L胰蛋白酶＋0．2g/L乙二胺四乙酸钠和1．0％Triton X-100进行脱细胞处理24h和176h，充分漂洗，冷冻干燥后备用。②平滑肌细胞的提取：应用组织块贴壁法体外培养扩增犬隐静脉的平滑肌细胞。③四甲基偶氮唑盐法测定脱细胞血管基质浸提液对平滑肌细胞的毒性：设浸提原液、75％、50％和25％浸提液组，阴性对照组（DMEM＋体积分数为0．1的胎牛血清培养液）。以阴性对照组的吸光度作为100％细胞增殖率，增殖百分率（P％）=[实验组A值／阴性对照组A值]&;#215;100％，按ISO和医学生物材料标准评定材料毒性。④急性毒性试验：取成年大鼠8只，将备用脱细胞血管基质研磨成粉末，生理盐水配成2g/L的混悬液，无菌条件下向大鼠腹腔内注入1mL脱细胞血管基质混悬液，观察72h，记录动物有无死亡及不良反应。⑤亚急性毒性试验：取成年大鼠12只，随机分成2组。实验组用脱细胞血管基质混悬液灌胃，剂量为500mg／kg质量，隔日1次，共10次；对照组给等量生理盐水灌胃。实验期间观察记录体质量变化及动物活动情况。21d取血检查血常规。⑥溶血试验：取抗凝兔血8mL，加入生理盐水10mL，稀释备用。取脱细胞血管基质粉末，加生理盐水中，再加入稀释兔血离心后取上清测定545nm处的吸光度。阴性对照为生理盐水10mL加入稀释兔血；阳性对照为蒸馏水加入稀释兔血。溶血率=[（试验材料的吸光度-阴性对照的吸光度）／（阳性对照的吸光度-阴性对照的吸光度）1&;#215;100％。⑦凝血试验：血库健康献血员新鲜血浆，用自动血液凝固测定仪进行凝血酶原凝固试验、测定部分凝血活酶凝固时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原。取血浆2mL加入脱细胞血管基质粉100mg，混合后再测定上述指标。 结果：①酶-化学除垢剂能使犬总动脉细胞几乎完全脱落，使基质纤维的三维结构变得疏松。苏木精-伊红、胶原染色和弹力纤维染色显示脱细胞血管基质无细胞残留，主要成分为胶原和弹力纤维。②动物实验表明材料无急性、亚急性毒性。体外实验脱细胞血管基质的溶血率为1．6％，符合医用生物材料生物性能测试所提出的溶血率〈5％标准。材料混合前后，血浆中凝血酶原凝固试验、部分凝血活酶时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原4项指标检测结果无明显变化，说明材料不引起凝血功能的改变。③四甲基偶氮唑盐显示75％脱细胞血管基质浸提液培养平滑肌细胞1，3和5d后，细胞增殖率均大于95％，材料毒性为0或1级。 结论：Triton X-100和胰蛋白酶制备的脱细胞基质具有良好的生物相容性，能与异体犬平滑肌细胞结合到一起，并在体外生成血管移植物。     

姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制

目的：观察中药提取物姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞株A549生长抑制率和对细胞凋亡相关因子表达的影响，探索姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制。方法：实验于2003—10／2004-10在上海东方医院中心实验室完成。用购于中科院上海细胞所肺腺癌细胞株A549，将培养的A549细胞暴露于姜黄素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及两者联合中，分4组，每组6孔，姜黄素组（40μmol／L姜黄素）、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组（25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）、联合组（40μmol／L姜黄素与25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合）、对照组（RPMI1640细胞培养液）。①用四氮唑蓝法测定姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组以及联合组的吸光值，根据吸光度值计算肺癌细胞株A549细胞生长抑制率。②应用ApoAlert半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶系列比色法凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达。③反转录聚合酶链反应测定凋亡调控蛋白bel-2／bax的表达。结果：①抑制率：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺腺癌A549细胞的抑制明显低于姜黄素，25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用24h细胞抑制率仅有（2．65&;#177;1．416）％；两药联合对肺腺癌A549细胞的抑制作用明显增加[高达（30．97&;#177;1．318）％，P〈0.011。②凋亡相关因子：联合组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达明显高于姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组、对照组[联合组：（50．77&;#177;0．812），（73．31&;#177;0.730）μmol／L；姜黄素组：（23．61&;#177;0.398），（26．84&;#177;1．511）μmol／L；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组：（9．63&;#177;1．024），（14．21&;#177;0．138）μmol／L；对照组：（3．69&;#177;0．486），（2．87&;#177;0．633）μmol／L，P〈0.011；联合组、姜黄素组的bel-2／bax明显高于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组（2．55&;#177;0．138，2．24&;#177;0．197，0．58&;#177;0．046，P〈0．01）。结论：肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞耐受，姜黄素可能通过调整bcl-2／bax的表达，进而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族，增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性。     

牙周细胞在离子化胶原表面的黏附与生长

目的:评价离子化胶原对不同交联剂的作用及交联后对牙周细胞的黏附与生长的影响。方法:实验于2006-10/2007-01在四川大学生物材料工程研究中心实验室完成。①通过胶原蛋白与甲醇在低温反应得到化学修饰离子化胶原,将胶原海绵和离子化胶原海绵分别与戊二醛、碳化二亚胺,京尼平在室温条件下发生交联反应,控制交联剂的终质量分数为0.006,交联时间均为24h。②通过测溶液中羟脯氨酸含量测交联产物的交联度;用胶原酶测交联产物体外降解时间;通过牙周细胞在交联产物上的生长情况(A570)确定交联产物对细胞的作用。nm结果:①吸液率和交联度:离子化胶原与各交联剂交联后吸液率都低于胶原交联后,交联度相应提高,胶原和离子化胶原与戊二醛交联其交联度最高,分别为81%,85%。②降解率:离子化胶原的降解率总的趋势低于胶原样品,离子化胶原、胶原被炭化二亚胺交联后,其降解率分别为0.5%,45.0%。③牙周细胞生长情况:离子化胶原交联产物上牙周细胞A570值高于胶原交联nm产物。结论:离子化胶原在交联过程中显示了较好的抗生物降解性能,离子化胶原交联产物在牙周细胞培养过程中显示出了低的细胞毒性,提示其对牙周细胞黏附与生长具有促进作用,可以代替胶原应用于牙周组织治疗。     

海马神经干细胞与胶原蛋白海绵及明胶海绵的生物相容性

背景：在应用组织工程修复周围神经的研究中，载体的选择至关重要。理想的载体应与细胞外基质类似，与活体细胞有良好的生物相容性。目的：评价豚鼠海马神经干细胞与胶原蛋白海绵和明胶海绵的生物相容性，探讨它们作为周围神经组织工程载体材料的可行性。设计：随机对照实验。单位：郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科，郑州大学基础医学院解剖教研室。材料：实验于2005-07／2005—12在郑州大学基础医学院解剖教研室神经生物学研究室完成。健康新生（〈24h）杂色豚鼠12只，清洁级，雌雄不限，体质量50-70g，由郑州大学医学院实验动物中心提供。方法：新生（〈24h）豚鼠，10g／L水合氯醛腹腔麻醉，体积分数为0．75乙醇消毒，无菌操作分离出海马组织。体外无血清培养海马神经干细胞，传至第2代，将浓度调整为1&;#215;10^10L^-1后分别与胶原蛋白海绵、明胶海绵联合体外培养，一周后取材，进行细胞计数，倒置相差显微镜及扫描电镜观察，并测定两种材料与细胞的吸附率。主要观察指标：①观察神经干细胞在胶原蛋白海绵和明胶海绵上的生长、黏附情况，并测定其细胞总数与载体材料的吸附率。②免疫细胞化学染色分化细胞形态观察。结果：①神经干细胞可以在胶原蛋白海绵和明胶海绵上生长，逐渐黏附，胶原蛋白海绵细胞吸附率高于明胶海绵（37．17％和14．87％，r=4．819，P〈0．05）。②对照组、胶原蛋白海绵组、明胶海绵组细胞总数差异无显著性[（53．17&;#177;3．5）&;#215;10^4，（53．25&;#177;2．6）&;#215;10^4，（52．04&;#177;4．05）&;#215;10^4，F=0．233．P〉0．05]。结论：胶原蛋白及明胶两种材料，尤其是胶原蛋白，具有良好的神经干细胞相容性，可以作为周围神经组织工程的支架材料应用于临床。     

丹参酮ⅡA对大鼠血管平滑肌细胞的增殖作用

目的：观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用，分析该作用与丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系。方法：实验于2004—01／2005—06在东南大学医学院发育与疾病相关基因实验室完成。①取大鼠胸主动脉，用组织贴壁法原代培养大鼠血管平滑肌细胞并传代，实验使用第4～8代细胞。②按实验分组干预细胞，正常对照组，培养液含5mmol／L葡萄糖；高糖组，培养液含30mmol／L葡萄糖；高糖对照组，培养液含30mmol／L葡萄糖&;#177;10g／L二甲亚砜；丹参酮ⅡA组，培养液含30mmol／L葡萄糖&;#177;0．5mg／L丹参酮ⅡA；U0126组，培养液含30mmol／L葡萄糖&;#177;25μmol／LU0126。③用二步法测定0．125，0．25，0，5，1．0，2．0，5．0，10．0mg／L丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞的毒性。④BrdU掺入DNA的EUSA法测定细胞内DNA合成水平。⑤同位素示踪法测定丝裂原活化蛋白激酶活性。结果：①高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞呈现快速增殖状态。②当丹参酮ⅡA剂量大于1，0mg／L时，有一定的细胞毒性。四甲基噻唑蓝法测定结果表明1．0，2．0，5．0，10．0mg／L丹参酮ⅡA组血管平滑肌细胞线粒体脱氢酶活性明显低于正常对照组（分别为0．654&;#177;0．023，0．580&;#177;0．032，0、465&;#177;0．041，0．376&;#177;0．053，0．840&;#177;0．085，P〈0．01），表明此浓度可造成细胞功能障碍，有明显的细胞毒性。③随着丹参酮ⅡA作用浓度的增加，细胞内BrdU掺入DNA的量逐渐下降，0．03125mg／L丹参酮ⅡA与高糖对照组相比差异有显著性意义（分别为0．958&;#177;0．086，1．059&;#177;0．047，P〈0．05），0．0625，0．125，0．25，0，5mg／L丹参酮ⅡA与高糖对照组相比差异有非常显著性意义（分别为0．865&;#177;0．058，0．781&;#177;0．099，0．738&;#177;0．071，0．616&;#177;0．028，1．059&;#177;0．047，P〈0．01）。④高糖组血管平滑肌细胞内丝裂原活化蛋白激酶的活性相对于正常对照组显著升高[分别为（1048．59&;#177;94．78），（395．82&;#177;43．53）μkat／g，P〈0．011，丹参酮ⅡA组和U0126组丝裂原活化蛋白激酶活性低于高糖组[分别为（450．55&;#177;50．47），（417．30&;#177;62．96），（1048．59&;#177;94．78）μkat／g，P〈o．01]。结论：丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖具有明显抑制作用的机制可能是其部分阻断了丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路。     

兔坐骨神经细胞微囊化处理移植至大鼠损伤脊髓对神经生长因子表达变化的影响

目的：观察并比较兔坐骨神经组织细胞微囊化处理与单纯兔坐骨神经组织细胞移植至大鼠损伤脊髓及大鼠单纯脊髓损伤3组神经生长因子表达的变化。方法：实验于2003-05／2005-05在九江学院医学科研中心完成。①制备不同移植材料：取10只成年家兔双侧完整坐骨神经制备细胞悬液；兔坐骨神经组织细胞悬液微囊化处理，将细胞浓度调整为（2．0-2．5）&;#215;10^6L^-1后与15g/L海藻酸钠生理盐水溶液混合，经双腔喷头将海藻酸钠-坐骨神经组织细胞悬液混合液喷入20mmol/L的氯化钡生理盐水溶液中，加入生理盐水洗涤2次。②脊髓损伤大鼠模型制作：取健康SD大鼠90只，随机分为3组，微囊化兔坐骨神经组织细胞悬液组（微囊化组）；单纯兔坐骨神经组织细胞悬液组（单纯悬液组）和单纯损伤组，每组30只。健康SD大鼠腹腔麻醉（30mg／kg）成功后，以T10为中心，暴露T10棘突及椎板，作脊髓右半侧横向切开，并去除约2min脊髓组织。立即在损伤腔内植入约2mm&;#215;2mm&;#215;2mm的明胶海绵作为填充支架，微囊化组在明胶海绵上吸附10μL微囊化兔坐骨神经组织细胞悬液；单纯悬液组在明胶海绵上吸附10μL单纯兔坐骨神经组织细胞悬液；单纯损伤组不做任何移植。③神经生长因子检测：于移植后1，3，7，14，28d，取出大鼠脊髓损伤平面为中心的2cm脊髓标本，每组6个标本共18张切片，进行免疫组织化学染色（SABC法），神经生长因子染色以细胞浆呈明显的棕黄色为阳性染色。分别计算每平方毫米阳性神经细胞数。 结果：90只大鼠全部进入结果分析。①各组神经生长因子阳性神经元测定结果：微囊组在1，3，7，14，28d均高于单纯损伤组和单纯悬液组；在第7，14，28天明显高于单纯损伤组和单纯悬液组[7d：（28．55&;#177;2．26），（7．65&;#177;3．35），（19．35&;#177;．2．39）个／mm^2；14d：（30．52&;#177;3．51），（8．10&;#177;2．45）（20．45&;#177;3．45）个／mm^2；28d：（27．50&;#177;4．50）。（6．59&;#177;3．85）．（17．50&;#177;4．65）个／mm^2，P〈0．01或0．05]；第14天达到顶峰（P〈0．01）。②神经生长因子免疫组织化学染色结果：微囊组可见大量棕黄色颗粒，主要分布在脊髓前角神经元和胶质细胞，白质和灰质也可见阳性颗粒。 结论：兔坐骨神经组织细胞悬液移植对大鼠脊髓损伤修复有明显的促进作用，微囊化处理后大鼠损伤脊髓神经生长因子表达高于单纯细胞悬液移植和单纯损伤组，更有利于损伤脊髓的再生和修复。     

蛋白酶体抑制剂对多巴胺能神经元的可能保护作用

目的：分析蛋白酶体抑制剂lactacystin（乳胞素）与多巴胺能神经元变性死亡的关系，为帕金森病的治疗探索新的思路。方法：实验于2005-03／11在国家人类基因组北方研究中心完成。实验细胞人神经母细胞瘤细胞系SH—SY5Y由北京神经科学研究所提供。用50μmol／L6-羟基多巴胺处理的多巴胺能神经细胞系SH—SY5Y作为帕金森病的细胞模型，于对数生长期时接种到培养皿、6孔板、96孔板中，24h后分不同组给药处理：对照组，50μmol／L6-羟基多巴胺组；50μmol／L6-羟基多巴胺加0．1μmol／L lactacystin组、50μmol／L6-羟基多巴胺加0．25μmol／L lactacystin组、50μmol／L6-羟基多巴胺加0．5μmol／L lactacystin组。镜下细胞计数，计算细胞存活率=活细胞数／对照组活细胞数&;#215;100％。磺酰罗丹明B法测定细胞括力，在酶联免疫检测仪测定吸光度值，检测波长为540nm。吸光度值=实验组细胞孔吸光度值-空白孔细胞吸光度值。取8复孔读数均值。细胞活性=实验孔吸光度值／平行对照孔吸光度值&;#215;100％结果：①50μmol／L6-羟基多巴胺组对细胞有明显毒性，细胞存活率与对照组相比只有（51,31&;#177;3．52）％，加用0．1，0．25，0．5μmol／L lactacystin后，细胞存活率分别提高到（72.16&;#177;97）％，（82.36&;#177;3．78）％，（91.44&;#177;3．06）％，各组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。而单用0．5μmol／L的lactacystln对细胞存活率无明显影响。②50μmol／L6-羟基多巴胺组对细胞有明显毒性可表现为细胞数量的减少，6-羟基多巴胺组细胞存活率只是对照组的（47．33&;#177;3．25）％，加用0．1，0．25，0．5μmol／L的lactacystin后，细胞存活率分别提高到（69．67&;#177;2．13）％，（80．38&;#177;1．12）％，（90．59&;#177;2．01）％，各组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。而单用0.5μmol／L的lactacystin对细胞存活率无明显影响。③正常培养的神经元细胞密度大，轮廓清晰，突起明显，胞体折光性好,6-羟基多巴胺处理的神经元，多数细胞死亡，残存细胞突起缩短或消失，胞体皱缩，轮廓不清，胞体折光性差，6-羟基多巴胺加lactacystin处理的细胞细胞密度和形态介于前二者之间。结论：蛋白酶体抑制剂对多巴胺能神经元有保护作用，可能是通过阻断细胞凋亡，但确切机制有待于进一步的研究     

淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响

目的：观察验方淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响。 方法：实验于2005—09／10在三峡大学医学院天然药物实验室完成。①选用昆明系雄性小鼠30只，鼠龄三四个月，体质量（20&;#177;2）g。将昆明系雄性小鼠随机分为3组：空白对照组、模型组和中药复方治疗组，每组10只。②空白对照组：实验进程中正常饲养不作任何处理；模型组：腹腔内注射80mg／kg环磷酰胺造成免疫力低下模型。1次／d。同时灌服生理盐水25mL／（kg&;#183;d）；中药复方治疗组：腹腔内注射80mg／kg环磷酰胺造成免疫力低下模型，1次／d,同时灌胃淫羊藿、鹌鹑复方粉剂溶解液（复方粉末来源于淫羊藿、鹌鹑复方胶囊。由三峡大学第一临床医学院和长阳县人民医院制备，其主要成分为淫羊藿、鹌鹑、肉苁蓉等中药材。淫一鹑胶囊为医院制剂，2g／粒）25g／（kg&;#183;d）。3组均连续干预10d。③用药10d后，取其脾制成脾细胞悬液。采用流式细胞仪检测脾组织T细胞亚群。④组间计量结果差异比较采用t检验。 结果：30只小鼠均进入结果分析。①型组小鼠脾脏CD^3＋，CD^4＋ T细胞亚群百分比和CD^4＋／CD^8＋明显低于空白对照组[（36．95&;#177;2．17）％，（26．27&;#177;2．58）％，1．61&;#177;0．21；（47．11&;#177;1．72）％，（36．14&;#177;1．95）％，1．89&;#177;0．12，P〈0．05—0．01]；中药复方治疗组明显高于模型组[（44．04&;#177;2．02）％，（28．20&;#177;1．37）％，2．23&;#177;0．11。P〈0．05-0．01]。②模型组小鼠脾脏CD^8＋T细胞亚群百分比明显低于空白对照组[（16．34&;#177;1．72）％，（19．16&;#177;2．02）％，P〈0．05]。高于中药复方治疗组[（12．65&;#177;1．12）％。P〈0．01]。 结论：淫羊藿、鹌鹑复方能够显著改善免疫力低下小鼠的免疫功能。