肝细胞癌中miR-942-5p的表达及其与患者恶性特征及不良预后的关系

目的:探讨微小RNA-942-5p(miR-942-5p)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其功能。方法:用实时定量PCR检测西安交通大学第一附属医院样本库保存的73例HCC组织和对应癌旁组织中miR-942-5p的表达。分析miR-942-5p表达与HCC患者临床病理资料的关系,同时分析TCGA数据库中miR-942-5p表达与HCC患者总生存率的关系。Transwell小室检测干扰miR-942-5p表达后HCC细胞迁移和侵袭能力的变化,StarBase V3.0网站和荧光素酶报告基因质粒预测分析miR-942-5p的下游靶点,并用Western blot验证。结果:miR-942-5p表达量在HCC组织中明显高于对应癌旁组织(2.390 vs. 1.764,P0.05)。miR-942-5p表达量与HCC患者肿瘤数目、血管浸润和临床分期明显有关(均P0.05)。miR-942-5p高表达HCC患者总生存率明显低于miR-942-5p低表达HCC患者(19.535%vs. 53.873%,P0.05)。沉默miR-942-5p表达后,肝癌HCCLM3和MHCC97H细胞迁移和侵袭能力明显减弱(均P0.05)。预测与分析结果显示,扣针蛋白5(FBLN5)是miR-942-5p的直接下游靶点(P0.05),沉默miR-942-5p表达导致HCCLM3和MHCC97H细胞中FBLN5表达增加。结论:miR-942-5p在HCC组织中表达异常升高并与恶性临床特征和不良预后密切相关,机制可能与miR-942-5p抑制FBLN5表达促进HCC细胞迁移和侵袭有关。     

miR-542-3p对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及机制探讨

目的探讨microRNA-542-3p（miR-542-3p）在人肝癌细胞系及组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响。方法采用RT-PCR检测miR-542-3p在肝癌细胞系（HCCLM3、Hep3B、Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97 L）以及人正常肝细胞LO2中的表达;同时采用RT-PCR检测肝癌及对应癌旁组织中miR-542-3p的表达。分别以转染miR-542-3p mimics的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为过表达组,以转染空载体的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为阴性对照组;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell法检测各组细胞体外侵袭能力,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的表达,免疫荧光法检测miR-542-3p对肝癌细胞EMT的影响。结果miR-542-3p在肝癌细胞系HCCLM3（0.221±0.034）、Hep3B（0.764±0.059）、Huh7（0.561±0.029）、SMMC-7721（0.688±0.049）、MHCC-97H（0.162±0.031）、MHCC-97L（0.473±0.041）中的表达均低于在人正常肝细胞LO2（1.0）的表达水平（P＜0.05）;在肝癌组织表达低于癌旁组织[（0.208±0.064）vs（0.746±0.093）,P＜0.05]。MHCC-97H和HCCLM3过表达组细胞增殖、侵袭转移能力显著低于阴性对照组,EMT相关蛋白荧光明显低于阴性对照组（P＜0.05）。结论miR-542-3p在肝癌组织及肝癌细胞中低表达,miR-542-3p的过表达可有效抑制肝癌细胞恶性生物学行为,该过程可能与EMT相关通路有关。miR-542-3p有望成为肝癌生物治疗的潜在靶点。     

miR-141-3p在肝细胞癌组织中的表达及其靶基因与肝细胞癌恶性特征的关系

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-141-3p在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过生物信息学软件筛选到可能靶向调控高尔基体蛋白73(GP73)基因的hsa-miR-141-3p,并以双荧光素酶报告基因实验验证存在靶向关系。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot方法分别检测HCC细胞系、HCC组织及癌旁组织中的miR-141-3p与GP73分子的表达水平,并分析HCC组织中miR-141-3p表达与HCC临床病理学特征的关系。采用噻唑蓝(MTT)、EdU及Transwell实验观察miR-141-3p过表达对HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果 miR-141-3p在HCC组织中的表达水平低于癌旁组织(P0.05),GP73 mRNA及其蛋白则相反(P0.05);HCC组织中miR-141-3p的表达水平与GP73 mRNA的表达水平呈负相关,且miR-141-3p的低表达与血管侵犯、肿瘤分化等级及临床TNM分期密切相关(P0.05)。MTT结果显示,Huh-7细胞转染miR-141-3p过表达质粒后,各时点吸光度(A)值低于空白对照组和miR-NC组(P0.05);EdU检测结果表明,转染miR-141-3p后,Huh-7和MHCC-97H细胞的EdU阳性细胞比低于空白对照组和miR-阴性对照(NC)组(P0.05);Traswell检测结果表明,转染miR-141-3p后,MHCC-97H细胞的侵袭细胞数和迁移细胞数低于空白对照组和miR-NC组(P0.05);细胞学功能回复实验结果表明,miR-141-3p+GP73组的侵袭细胞数和迁移细胞数低于空白对照组和miR-NC组,但高于miR-141-3p组和miR-141-3p+GP73-NC组(P0.05)。结论 HCC组织中miR-141-3p呈低表达,且GP73 mRNA表达水平与其呈负相关;低表达miR-141-3p与HCC细胞的侵袭和转移能力密切相关。过表达miR-141-3p能够显著抑制HCC细胞的增殖、侵袭和迁移,逆转miR-141-3p的部分抑制作用可通过恢复表达不含3′非翻译区(UTR)的GP73基因实现。     

miR-342-5p 调控靶基因Merlin 表达促进肝细胞癌侵袭转移的实验研究

目的：探讨miR-342-5p及其可疑靶基因Merlin在肝细胞癌（HCC）中表达及意义。 方法：用qRT-PCR检测miR-342-5p和Merlin mRNA在HCC组织与癌旁组织，以及正常肝细胞系与各种不同HCC细胞系中的表达；用重组慢病毒包装质粒pGCSIL-GFP-miR-342-5p或空载体（阴性对照）转染HCCLM3细胞，以无处理的HCCLM3细胞作为空白对照，划痕愈合及Transwell实验观察细胞侵袭运动能力；Western blot法检测细胞中Merlin蛋白的表达。采用双荧光素酶基因报告系统，将含野生型或突变型Merlin基因3''UTR质粒（psiCHECK-Merlin）分别与pGCSIL-GFP-miR-342-5p、空载体（阴性对照）共转染或单独转染（空白对照）HCCLM3细胞后，检测各组细胞荧光素酶活性。 结果：与癌旁组织比较，HCC组织中miR-342-5p表达明显上调，Merlin mRNA表达明显下调（均P<0.05）；HCC组织中，血管侵犯组较无血管侵犯组miR-342-5p表达明显上调，Merlin mRNA表达明显下调（均P<0.05），且miR-342-5p与Merlin mRNA表达呈负相关（r2=5.364，P<0.05）。各HCC细胞系中miR-342-5p表达均明显高于正常肝细胞系，且miR-342-5p的表达随HCC细胞系的侵袭性增高而上调，而Merlin mRNA表达则呈相反趋势（均P<0.05）。与空白对照组及阴性对照组比较，HCCLM3细胞转染pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒后，细胞侵袭运动能力明显下降（均P<0.05），而Merlin蛋白表达明显上调。psiCHECK-Merlin野生型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后，细胞的荧光素酶活性较其阴性对照组或空白对照组明显降低（P<0.05），而psiCHECK-Merlin突变型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后，细胞的荧光素酶活性与其空白对照组或阴性对照组无统计学差异（P>0.05）。 结论：Merlin是miR-342-5p的靶基因，miR-342-5p可能通过调控MerlinmRNA的表达促进肝细胞癌侵袭转移。     

基于生物信息学的肝细胞癌组织miR-1180表达与临床意义分析

目的:通过生物信息学数据分析探讨肝细胞癌(HCC)组织中miR-1180的表达及其临床意义。方法:下载GEO(Gene Expression Omnibus)和TCGA(The Cancer Genome Atlas)相关数据集,比较HCC组织和癌旁组织中miR-1180表达量,并分析miR-1180表达量与肝癌患者临床病理特征及预后之间的相关性。利用生物信息学方法对mi R-1180的靶基因进行预测及功能富集分析,并结合预后分析结果筛选miR-1180关键靶基因。结果:mi R-1180在HCC组织中较癌旁组织高表达,且对于HCC具有良好的诊断效能(AUC0.8,均P0.05);miR-1180的表达量与患者年龄、肿瘤家族史、肿瘤分化程度以及AFP等指标明显有关(均P0.05)。生存分析表明HCC组织中miR-1180高表达是影响HCC患者预后的独立危险因素(P0.05)。富集分析提示miR-1180的靶基因主要富集于脂质代谢、细胞迁移、转录调控等功能和脂肪酸降解等通路。PPARGC1A、ALDH2、SARDH、HMGCS2、ESR1、ETS2等为miR-1180关键靶基因,在HCC组织中均表达下调(均P0.05),且相对低表达者预后较差(均P0.05)。结论:mi R-1180在HCC组织中表达升高,其可能作为一种促癌miRNA参与HCC的发生、发展,并具有成为HCC诊断标志物、预后指标及治疗靶点的潜在应用价值。     

肝细胞癌中miR-574-5p的表达与作用及其与预后的关系

背景与目的 研究表明,miR-574-5p与多种肿瘤预后密切相关,但尚未见miR-574-5p与肝细胞癌（HCC）的关系报道。因此,本研究初步探讨miR-574-5p在HCC中表达及其与患者预后的关系。方法 用qRT-PCR检测130例HCC与癌旁组织及HCC细胞系（HepG2、MHCC-97H）与正常肝细胞系（L-02）中miR-574-5p的表达,用X-tile软件在患者生存数据中确定miR-574-5p表达量的最佳截断值后,分析miR-574-5p表达水平与患者临床病理因素于术后生存率的关系。分析HCC患者预后的影响因素。用TargetScan预测miR-574-5p的靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验验证与Western blot实验确证。结果 miR-574-5p表达水平在HCC癌组织中明显高于癌旁组织,在HCC细胞系中明显高于正常肝细胞系（均P<0.05）。miR-574-5p表达与TNM分期（P=0.002）和分化程度（P=0.000）明显有关。miR-574-5p高表达组的总生存率与无瘤生存率均明显低于miR-574-5p低表达组（均P<0.01）。单因素与多因素分析结果显示,miR-574-5p高表达（HR=4.101,95% CI=1.348~8.968,P=0.03）、III~IV期（HR=5.403,95% CI=1.266~13.860,P=0.02）及中低分化（HR=3.655,95% CI=2.165~6.984,P=0.00）是HCC患者总生存率的独立危险因素,miR-574-5p高表达（HR=7.168,95% CI=1.144~18.260,P=0.01）与III~IV期（HR=7.436,95% CI=1.123~20.916,P=0.00）是HCC患者无瘤生存率的独立危险因素。TargetScan软件发现FOG2存在和miR-574-5p直接结合位点,双萤光素酶报告基因实验表明FOG2是miR-574-5p的直接靶基因。Western blot结果显示,FOG2蛋白在HCC组织中的表达量低于癌旁组织;Pearson相关分析表明,HCC组织中miR-574-5p表达水平与FOG2蛋白表达水平呈负相关（r=-0.499,P<0.05）。结论 miR-574-5p在HCC中普遍升高,miR-574-5p高表达可作为HCC患者预后不良的分子标志物,miR-574-5p可能通过下调其靶基因FOG2发挥促癌作用。     

胃癌上皮-间充质转化过程中微小RNA-579-3p/含锌指和BTB域4通路的作用及其机制

目的探讨微小RNA-579-3p(miR-579-3p)/含锌指和BTB域4(ZBTB4)通路在胃癌上皮-间充质转化(EMT)中的作用机制。方法生物信息学筛选胃癌与癌旁组织差异表达的微小RNA(miRNA);实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测50例患者胃癌和癌旁癌旁组织中miR-579-3p、ZBTB4表达;检测胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株HGC27、AGS、MKN45中miR-579-3p的表达, 分析miR-579-3p与临床病理特征的关系。生物信息学分析miR-579-3p靶基因。双荧光素酶报告基因验证miR-579-3p与ZBTB4的调控关系。应用miR-579-3p抑制物(inhibitor)干扰HGC27细胞株miR-579-3p表达, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕实验、Transwell小室实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测mRNA和蛋白表达水平。采用t检验、χ2检验分析数据。结果生物信息学筛选后RT-qPCR检测结果发现miR-579-3p在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织(3.259...     

miR-105-5p在胃癌中的表达及其意义与生物学功能

目的:探讨miR-105-5p在胃癌(GC)中的表达情况、临床意义及生物学功能及其潜在的作用机制。方法:应用real-time PCR检测miR-105-5p在GC组织与癌旁组织以及不同GC细胞(MGC-803,MKN-1,SGC-7901,BGC-823和AGS)与正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达;分析miR-105-5p的表达与GC临床病理特征及患者预后的关系;采用Transwell迁移和侵袭实验以及MTT实验检测miR-105-5p对GC细胞迁移与侵袭能力以及增殖能力的影响;应用生物信息学工具预测miR-105-5p的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-105-5p对靶点的调节作用。结果:miR-105-5p在GC组织的表达明显高于癌旁组织,在各GC细胞中的表达均明显高于正常胃黏膜细胞(均P0.05)。miR-105-5p的表达水平与肿瘤大小(P=0.020)和远处转移(P=0.004)明显有关;miR-105-5p低表达GC患者的总体生存率明显高于miR-105-5p高表达组的患者(P=0.001 8)。选择miR-105-5p表达量相对较低的BGC-823细胞和相对较高的MKN-1细胞,分别转染miR-105-5p模拟物和miR-105-5p抑制物,转染后结果显示,BGC-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,而MKN-1细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显抑制(均P0.05)。生物信息学分析发现,DIRAS家族GTP结合RAS样3(DIRAS3)可能是miR-105-5p的作用靶点;荧光素酶报告实验显示,miR-105-5p能够负向调节DIRAS3-3'UTR的荧光素酶活性;Western blot显示,转染miR-105-5p模拟物的BGC-823细胞中DIRAS3的表达明显下调,转染miR-105-5p抑制物的MKN-1细胞DIRAS3的表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-105-5p在GC中表达升高,其可能通过靶向作用于DIRAS3增强GC细胞的迁移、侵袭及增殖,进而促进GC的发生发展。     

基于TCGA数据库肝细胞癌microRNA-324-5p表达与预后危险因素分析

目的:探究microRNA-324-5p(miR-324-5p)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)组织中的表达与病人预后危险因素。方法:通过TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库获得的肿瘤组织和正常肝组织miRNA表达谱数据与病人临床信息,分析miR-324-5p表达差异与病理的关系。通过绘制生存曲线分析miR-324-5p表达与病人预后的相关性。单因素和多因素Cox回归模型分析HCC相关危险因素。结果:miR-324-5p在HCC表达高于正常组织(P0.001),且与不良预后相关。多因素Cox分析表明miR-324-5p可作为HCC预后不良的独立危险因素(P0.05)。结论:miR-324-5p在HCC组织过表达,是HCC病人总生存期缩短的独立危险因素,为HCC预后判断的潜在生物学标志物。     

上调lncRNA SNHG12与miR-199a-5p/FZD6轴对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化的影响

背景与目的：肝细胞癌（HCC）是临床上常见的恶性肿瘤之一,侵袭、转移和术后复发是导致HCC患者死亡的主要原因。目前认为长链非编码RNA（lncRNA）的失调可能与各类癌症的发生和转移有关。有研究显示lncRNA SNHG12在HCC组织表达明显上调,但其具体功能尚不清楚。故本研究探讨lncRNA SNHG12在HCC细胞中的作用及机制。 方法：用qRT-PCR检测SNHG12以及预测到的靶miRNA及靶基因（miR-199a-5p与FZD6）在HCC细胞HepG2细胞与人肝内胆管上皮细胞HIBEC中的基因表达量,观察下调SNHG12对HepG2细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;采用miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析SNHG12和miR-199a-5p之间的关系,分析下调miR-199a-5p对HepG2细胞增殖、侵袭和EMT的影响,以及SNHG12对miR-199a-5p作用的影响;TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-199a-5p和FZD6的关系;检测过表达及下调FZD6对HepG2细胞增殖、侵袭和EMT的影响,以及SNHG12和miR-199a-5p对FZD6表达的影响。 结果：与HIBEC细胞比较,HepG2细胞中SNHG12表达量明显升高、miR-199a-5p表达量明显降低、FZD6表达量明显升高（均P<0.01）。下调SNHG12表达,HepG2细胞增殖、侵袭和EMT被明显抑制,过表达SNHG12作用则相反（均P<0.05）。SNHG12与miR-199a-5p特异性结合,下调miR-199a-5p促进HepG2细胞增殖、侵袭与EMT,过表达miR-199a-5p则起到抑制作用（均P<0.05）。过表达miR-199a-5p对HepG2细胞的作用,能部分被同时过表达SNHG12所逆转（均P<0.05）。miR-199a-5p靶向FZD6,下调FZD6后HepG2细胞增殖、侵袭与EMT明显抑制,过表达FZD6则相反（均P<0.05)。下调SNHG12抑制FZD6的基因和蛋白表达,而下调miR-199a-5p则促进FZD6的表达（均P<0.01）;与单独下调miR-199a-5p比较,同时下调SNHG12和miR-199a-5p,FZD6的表达被抑制（P<0.01）。 结论：HCC细胞中lncRNA SNHG12的上调可能通过影响miR-199a-5p/FZD6轴促进HCC细胞的增殖、侵袭和EMT过程。     

miR-150-5p抑制肝癌细胞的迁移和侵袭及其机制

目的:探讨mi R-150-5p在肝细胞癌(HCC)细胞迁移与侵袭中的作用及其调控机制。方法:用荧光定量PCR测定mi R-150-5p在正常肝细胞系L02及HCC细胞系Hep G2中的表达;将Hep G2细胞分成两组,分别转染mi R-150-5p(mi R-150-5p组)与随机序列(对照组),转染后,分别用细胞划痕实验、Transwell小室基质渗透实验检测细胞的迁移和侵袭能力,用Western blot检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果:mi R-150-5p的表达量在Hep G2细胞系中明显降低,为L02细胞系的0.26倍(P0.01)。转染后,mi R-150-5p组的mi R-150-5p水平明显升高,为对照组的9.53倍(P0.001);mi R-150-5p组的细胞划痕愈合率明显低于对照组(54.63%vs.87.51%,P0.01),细胞侵袭数明显少于对照组(138个vs.452个,P0.01);MMP2与MMP9蛋白表达量均明显低于对照组(0.78 vs.1.75;0.82 vs.1.85,均P0.05)。结论:mi R-150-5p在HCC细胞中表达降低,升高mi R-150-5p的表达可抑制HCC细胞的迁移和侵袭,机制可能与其下调MMP2和MMP9表达有关。     

长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一，研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达，进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程；膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调，促进恶性表型的发生，并可能受上游miR-342-3p的调控。因此，本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物），用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达；MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖；进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡；Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）；双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型，验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较，Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较，LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05），miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）；与LINC00313 siRNA组比较，共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中，LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达，miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示，与无处理的Li-7细胞移植瘤比较，LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低，肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低，而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调，LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达，进而促进HCC细胞的恶性表型。     

microRNA-616在肝癌中的表达及临床意义

目的:探讨micro RNA-616(mi R-616)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法:应用实时定量PCR检测80例HCC患者的肿瘤组织与癌旁组织标本,以及正常肝细胞与不同分化程度的HCC细胞mi R-616表达;分析mi R-616表达与HCC患者临床病理因素及预后的关系;观察HCC细胞过表达或抑制mi R-616表达后侵袭及转移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,HCC组织中mi R-616的表达明显升高,且复发患者明显高于非复发患者,有转移患者明显高于无转移患者(均P0.05);所有HCC细胞株的mi R-616表达均明显高于正常肝细胞,且在高侵袭性HCC细胞株中的表达明显高于低侵袭性HCC细胞株(均P0.05);mi R-616表达与HCC患者是否存在门静脉癌栓、Edmondson-Steiner分级、TNM分期有关(均P0.05);mi R-616表达是影响HCC患者生存的独立危险因素(P0.05),mi R-616高表达患者的总生存率和无病生存率均明显低于mi R-616低表达患者(均P0.05)。HCC细胞过表达mi R-616后侵袭迁移能力明显增强,mi R-616表达抑制后侵袭迁移能力明显减弱(均P0.05)。结论:mi R-616在HCC中表达升高,且mi R-616高表达与HCC不良预后密切相关。     

microRNA-186-5p及其靶基因CLDN18与甲状腺乳头状癌复发风险的关系

背景与目的：microRNA（miRNA）在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,而且不同的miRNA表达状态与肿瘤的不同生物学特征紧密关联。本研究通过分析不同复发风险甲状腺乳头状癌（PTC）患者差异表达的miRNA,筛选与PTC复发风险相关的miRNA,并分析其作用机制。 方法：用基因芯片技术分析低危复发风险与中高危复发风险PTC患者血清外泌体中差异表达的miRNA,然后用qRT-PCR方法PTC患者肿瘤组织中验证;用Transwell实验筛选出与PTC细胞侵袭能力有关的差异表达miRNA。通过OncomiR在线数据库对筛选的细胞侵袭力相关miRNA的靶基因进行预测,随后采用过表达与敲低策略,分析PTC细胞相关蛋白表达（Western blot）与PTC细胞侵袭能力（Transwell）的变化,明确细胞侵袭力相关miRNA与预测靶基因的关系。最后,通过GEPIA在线网站对TCGA数据库中PTC临床样本的分析进一步确证。 结果：基因芯片分析结果显示,与低危复发风险PTC患者比较,中高危复发风险PTC患者血清外泌体中4个miRNA（miR-186-5p、miR-532-3p、miR-199b-3p、miR-3158-5p）表达上调,1个miRNA（miR-3605-5p）表达下调（均P<0.05）;组织标本qRT-PCR验证结果显示,中高危复发风险PTC患者癌组织中miR-186-5p和miR-3158-5p表达上调（均P<0.05）;Transwell实验结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞侵袭能力明显增强,敲低则明显减弱（均P<0.05）,但改变miR-3158-5p的表达水平对PTC细胞的侵袭能力无明显影响（均P>0.05）。OncomiR在线数据库预测PRDX6、S100PBP、CLDN18、MAP2可能是miR-186-5p的靶基因;Western blot结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞中CLDN18的蛋白表达明显降低,敲低则相反,但改变miR-3158-5p的表达水平对其他3个基因的蛋白表达无明显影响;Transwell实验结果显示,过表达CLDN18表达后PTC细胞的侵袭能力明显减弱,敲低则明显增强,而过表达或敲低miR-186-5p对PTC细胞的作用被同时过表达或敲低CLDN18所逆转（均P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,PTC组织中CLDN18表达较正常甲状腺组织明显降低。 结论：miR-186-5p表达的增高可能与PTC的复发风险密切相关,机制可能与其通过调节下游CLDN18基因的表达而影响PTC细胞的侵袭能力有关。     

miR-19 在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的：探讨肝细胞肝癌（HCC）组织中miR-19的表达情况及其临床意义。 方法：用qRT-PCR的方法检测51例HCC组织及其癌旁组织以及10例正常肝组织中miR-19的表达;分析了miR-19表达与HCC患者临床病理因素及预后的关系。 结果：miR-19的表达量在正常肝组织、癌旁组织、HCC组织中依次增高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。miR-19表达与HCC患者的肿瘤大小（P=0.029）、转移（P=0.011）、静脉侵犯（P=0.002）及AJCC分期（P=0.008）有关,而与年龄、性别、肿瘤分化、卫星灶、肿瘤数量及AFP无相关（均P>0.05）。miR-19高表达的患者5年生存率明显低于低表达的患者（P<0.05）。miR-19高表达以及转移、静脉侵犯均为影响HCC患者生存的独立风险因素（均P<0.05）。 结论：miR-19在HCC组织中表达上调,并可能与HCC的增殖、转移有关;miR-19高表达提示预后不良。     

mir-638和Sox2在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的检测mi R-638和Sox2在原发性肝细胞癌中的表达情况,探讨其与肝癌患者临床病理特征的关系。方法采用实时定量PCR(q RT-PCR)对78例原发性肝癌患者癌组织及对应癌旁组织中mi R-638和Sox2 m RNA表达水平进行检测。免疫组化法检测所有癌组织及其相应的癌旁正常组织Sox2蛋白的表达情况。分析mir-638和Sox2与肝癌患者临床病理参数间的关系。结果 (1)与癌旁正常组织相比,mi R-638在肝癌组织中的表达明显降低(P0.05),而Sox2 m RNA在癌组织中的表达显著升高(P0.05);(2)Spearman相关分析显示,在肝癌组织中mi R-638与Sox2蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.441,P0.05);(3)临床病理相关性分析表明mi R-638和Sox2的表达与肿瘤TNM分期(χ~2=10.617,P=0.001;χ~2=9.939,P=0.002)及门静脉侵犯与否明显相关(χ~2=7.885,P=0.005;χ~2=6.370,P=0.012),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肝炎状况等其他临床病理参数无关(均P0.05)。结论肝癌中mi R-638表达水平的下调及SOX2表达水平的上升可能与肝癌的发生、发展密切相关。