基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的布渣叶化学成分分析

目的 应用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间高分辨质谱法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）分析布渣叶中的化学成分。方法 色谱条件为Waters CORTECS UPLC C₁₈色谱柱（2.1 mm×150 mm,1.6 μm）,以甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）流动相进行梯度洗脱（0~4 min,14%~30%A;4~16 min,30%~58%A;16~25 min,58%~78%A;25~25.1 min,78%~98%A;25.1~29 min,98%A）,流速0.25 mL· min^-1,进样量1 μL;质谱条件为电喷雾离子源（ESI）,在正、负离子模式下对色谱流出物进行检测,检测范围m/z 100~1 500。结果 通过高分辨质谱数据分析、结合参考文献数据以及对照品确认,从布渣叶中共鉴别出31个化学成分,包括28个黄酮类（9个黄酮碳苷类,10个黄酮醇及其苷类,8个原花青素类,1个苯骈色原酮类）和3个有机酸类（咖啡酸、阿魏酸和p-香豆酸）。结论 UPLC-Q-TOF-MS/MS技术为鉴别布渣叶药材中化学成分提供简便、快速、准确的方法,其主要化学成分为黄酮碳苷类、黄酮醇氧苷类、原花青素类,7个原花青素类成分在该植物中属首次发现,可为布渣叶药材的质量评价及药效物质基础研究提供参考。     

傣肾宁化学成分的HPLC-Q-TOF-MS/MS分析

目的 采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法（HPLC-Q-TOF-MS/MS）对源于傣族经典名方的傣肾宁中主要化学成分进行鉴定。方法 色谱条件为Cosmosil 5 C₁₈-AR-Ⅱ色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相乙腈（A）-0.5%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~10 min,5%A;10~20 min,5%~20%A;20~30 min,20%A;30~55 min,20%~35%A;55~65 min,35%~55%A;65~75 min,55%~100%A;75~80 min,100%A;80~85 min,100%~5%A;85~90 min,5%A）,流速1 mL·min^-1,柱温40 ℃,进样量10 μL。质谱条件为选择电喷雾离子源（ESI）,正、负离子检测模式,质量扫描范围m/z 100~2 000。通过MassHunter B.06.00软件结合PubChem,MassBank,ChemicalBook等数据库,并参考文献信息,进行傣肾宁中主要化学成分的鉴定。结果 从傣肾宁中共鉴定出96个成分,主要包括32个黄酮类化合物,19个有机酸类化合物,6个糖苷类化合物,6个萜类化合物,5个苯丙素类化合物,8个酚类化合物,14个其他类化合物和6个未知化合物。结论 建立的HPLC-Q-TOF-MS/MS可同时对傣肾宁不同类型的化合物进行分析,有助于开展该制剂主要化学成分的提取分离和质量控制研究。此外,通过对傣肾宁化学成分的快速指认,推测其主要药效物质为黄酮类和有机酸类成分。     

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的黄芪桂枝五物汤基准样品化学成分分析及表征

目的 对黄芪桂枝五物汤基准样品（冻干粉）进行化学成分分析，为该经典名方制剂的质量标准制定提供质量标志物。方法 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间-串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS），色谱条件为Waters ACQUITY UPLC? HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~8 min，1%~20%A；8~10 min，20%~30%A；10~12 min，30%~35%A；12~14 min，35%~40%A，14~23 min，40%~55%A，23~27 min，55%~99%A；27~28 min，99%A；28~28.5 min，99%~1%A；28.5~30 min，1%A），柱温40 ℃，进样量2 μL，流速0.3 mL·min^-1。在正、负离子模式下采集黄芪桂枝五物汤基准样品（冻干粉）的质谱数据，质谱条件为电喷雾离子源（ESI），扫描范围m/z 50~1 200，碰撞能量10~30 eV。利用UNIFI 1.8和Progenesis QI 2.0软件解析，结合对照品和文献信息比对，对黄芪桂枝五物汤基准样品（冻干粉）的化学成分进行表征。结果 一共表征出123化学成分，其中黄酮类33个、苷类26个、有机酸类18个、萜类11个、苯丙素类7个、姜辣素类4个、生物碱类3个、氨基酸类3个、酰胺类2个、其他类16个。结论 建立的方法可以快速、准确地表征黄芪桂枝五物汤基准样品（冻干粉）中的化学成分，可为该经典名方的质量评价指标筛选提供依据，并为其制剂研究提供参考。     

经典名方小承气汤中化学成分的UPLC-Q-Orbitrap-MS分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS）对小承气汤中的化学成分进行快速识别和鉴定。方法 采用CORTECS T3色谱柱（2.1 mm×150 mm,1.6 μm）,以甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）作为流动相进行梯度洗脱（0~5 min,3%~21%A;5~20 min,21%~36%A;20~32 min,36%~50%A;32~42 min,50%~62%A;42~50 min,62%~85%A;50~60 min,85%~95%A）,流速0.2 mL·min^-1,柱温30 ℃;采用加热电喷雾离子源（HESI）,正、负离子模式检测,扫描模式为Full MS/dd-MS²,扫描范围m/z 100~1 200,碰撞能量20,40 eV。通过与对照品比对并结合文献报道、质谱数据库信息等对化合物进行鉴别。结果 从小承气汤中共鉴别了123个成分,包括33个黄酮类成分,25个蒽醌及蒽酮类成分,23个苯丙素类成分,15个鞣质类成分,10个含氮类成分及其他类化合物17个。其中,有32个成分通过与对照品比对后确认。结论 利用UPLC-Q-Orbitrap-MS技术系统地阐明了小承气汤的物质基础,明确其主要化学成分黄酮类、蒽醌及蒽酮类、苯丙素类成分分别来源于枳实、大黄和厚朴,可为该复方的物质基础全面阐释和质量标准合理制定提供科学依据。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的甘青乌头抗乙酰胆碱酯酶活性成分分析

目的 明确甘青乌头抗乙酰胆碱酯酶的活性成分,为寻找新的抗阿尔茨海默病（AD）药物提供参考。方法 采用改良的Ellman''s法筛选甘青乌头抗乙酰胆碱酯酶活性部位,超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）对活性部位的化学成分进行分析,色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）,流动相选择乙腈（A）-0.4%氨水溶液（B）梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,柱温30 ℃。二氯甲烷萃取部位A相比例随时间变化为0~3 min,5%A;3~7 min,5%~20%A;7~11.5 min,20%~33%A;11.5~15.5 min,33%~50%A;15.5~20.5 min,50%~80%A;20.5~23 min,80%~85%A;23~25 min,85%~95%A。正丁醇萃取部位A相比例随时间变化为0~2 min,5%A;2~8 min,5%~20%A;8~11 min,20%~33%A;11~15 min,33%~95%A。质谱条件为电喷雾离子源,正离子全扫描模式采集数据,检测范围m/z 100~1 500。结果 甘青乌头醇提物的二氯甲烷萃取部位和正丁醇萃取部位对乙酰胆碱酯酶均有一定的抑制作用,二者的半数抑制浓度分别为（64±4.4）,（85.7±3.8） mg·L^-1。经UPLC-Q-TOF-MS/MS分析,从二氯甲烷萃取部位共推测出21个生物碱类成分,正丁醇萃取部位共推测出11个生物碱类成分;2个部位均含有的关附壬素为首次在甘青乌头中发现。结论 二萜生物碱是甘青乌头抗乙酰胆碱酯酶活性的主要药效物质,值得深入挖掘。     

基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术的芪蛭降糖胶囊化学成分分析

目的 为系统分析芪蛭降糖胶囊的化学组成,采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-QE-Orbitrap-MS）对该复方的化学成分进行鉴定。方法 采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,以乙腈（A）-水（B）为流动相梯度洗脱（0~13 min,1%~25%A;13~21 min,25%~35%A;21~28 min,35%~85%A;28~30 min,85%~100%A;30~32 min,100%~1%A）,流速设定0.2 mL·min^-1,柱温30 ℃,进样量3 μL;运用电喷雾离子源（ESI）,扫描范围m/z 100~1 500,正、负离子全扫描模式采集数据。采用对照品比对、自建化合物数据库搜索、文献信息比对、诊断离子筛选及Compound Discoverer 3.0软件推测的方法快速鉴定各离子峰。结果 共鉴定了芪蛭降糖胶囊中52个化学成分,并归属了化合物的来源药材,其中氨基酸类成分主要来源于水蛭,苯丙素类成分来源于黄芪和地黄,环烯醚萜苷类成分来源于地黄,香豆素和三萜类成分来源于黄芪,黄酮类成分来源于黄芪和黄精。结论 建立的UPLC-QE-Orbitrap-MS分析方法能全面快速地分析和鉴定芪蛭降糖胶囊中的化学成分,其中多种成分经现代药理研究证明具有改善糖尿病及其并发症相关症状的作用,体现了芪蛭降糖胶囊多成分协同作用的特点,可为其药效物质基础和质量控制研究提供参考。     

去核对余甘子药材质量的影响

目的 通过化学分析和体外试验考察余甘子果核、果肉间化学成分和药理活性的差异,探究果核对余甘子药材质量的影响。方法 基于现有数据库对余甘子与去核余甘子（余甘子肉）进行文献、药材标准、市场调研;应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap HRMS）技术对果核、果肉进行化学成分鉴定,流动相选择0.1%甲酸水溶液（A）和甲醇（B）梯度洗脱（0~25 min,5%B;25~30 min,5%~95%B;30~35 min,95%~5%B）,流速0.2 mL·min^-1;选择加热电喷雾离子源（HESI）,正、负离子模式检测,扫描范围m/z 100~1 500。利用高效液相色谱法（HPLC）测定余甘子果核、果肉中没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸和鞣花酸的含量,流动相甲醇（A）-0.05%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（0~6 min,5%A;6~15 min,5%~7%A;15~20 min,7%~15%A;20~25 min,15%~21%A;25~31 min,21%~22%A;31~41 min,22%A;41~47 min,22%~28%A;47~51 min,28%~32%A;51~57 min,32%~38%A;57~70 min,38%~45%A;70~80 min,45%~65%A;80~85 min,65%~5%A）,检测波长270 nm。通过滤纸片法考察余甘子果核、果肉对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌的抗菌作用,运用1,1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）自由基清除试验比较余甘子果核、果肉的抗氧化活性。结果 从余甘子果核、果肉中共鉴定出了47种化合物,主要包括鞣质类、黄酮类、酚酸类、脂肪酸类、氨基酸类、有机酸类、糖及糖苷类化合物,大部分有效成分主要集中在果肉,果核中脂肪酸类成分占比较高。HPLC含量测定结果显示20批余甘子药材果肉中没食子酸、柯里拉京、诃黎勒酸、鞣花酸等多酚类化合物含量远远高于果核;抗菌试验结果显示不同浓度余甘子果核均不具有抗菌作用;DPPH自由基清除试验结果表明果核［半抑制浓度（IC₅₀）=199.632 mg·L^-1］的抗氧化作用远小于果肉（IC₅₀=12.688 mg·L^-1）。结论 从多酚含量与抗菌、抗氧化活性来看,古代和现今采用余甘子肉具有一定的科学性,这可能是为了去除余甘子质次部分,以增强临床治疗效果。同时,鉴于余甘子果核占比较大,且含有较高的脂肪酸等成分,在实际临床应用中是否去核使用还有待于深入研究确认。     

经典名方温经汤的基准样品特征图谱分析

目的 建立温经汤基准样品特征图谱。方法 采用高效液相色谱法（HPLC）,建立温经汤基准样品的HPLC特征图谱分析方法,在此基础上,分别采用同一品牌多根色谱柱和4种不同品牌色谱柱,3个不同厂家仪器进行了系统适应性考察,计算相对保留时间,统计不同色谱柱、不同仪器的相对保留时间偏差,并对该方法进行方法学考察。采用超高效液相色谱-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MSⁿ）对温经汤基准样品成分进行鉴别,色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~2.8 min,10%A;2.8~8.0 min,10%~18%A;8.0~12.2 min,18%~25%A;12.2~15.3 min,25%~40%A;15.3~17.4 min,40%A;17.4~20.5 min,40%~90%A）,流速0.4 mL·min^-1,柱温30 ℃。质谱条件为电喷雾离子源,正、负离子模式扫描,检测范围m/z 50~1 600。结果 共选取了10个共有特征峰,通过对照品比对,指认了其中8个,分别为芍药苷（1号峰）,芹糖甘草苷（2号峰）,甘草苷（3号峰）,阿魏酸（4号峰）,甘草素（6号峰）,桂皮醛（8号峰）,丹皮酚（9号峰）和甘草酸（10号峰）。通过质谱分析,共鉴定了30个化合物,主要包括甘草三萜皂苷类和黄酮类、人参中人参皂苷类、白芍中单萜苷类和鞣质类、牛膝中甾酮类、当归中酚酸类成分。结论 所建立的温经汤特征图谱分析方法简便稳定、重复性好,通过质谱指认及来源归属,基本明确了温经汤基准样品的物质基础,可为后续温经汤的开发和质量控制提供参考依据。     

基于含量测定和指纹图谱的不同基原地骨皮药材异同点考察

目的 通过比较2020年版《中华人民共和国药典》收载的不同基原地骨皮药材主要化学组成的异同点,判定2种基原的地骨皮是否具有化学一致性。方法 收集有代表性的30批地骨皮药材,采用超高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法（UPLC-PDA）建立含量测定方法及指纹图谱分析方法,分别以乙腈（A）-0.15%三氟乙酸水溶液（B）和乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）作为流动相进行梯度洗脱（0~4 min,5%~12%A;4~8 min,12%A;8~12 min,12%~14%A;12~15 min,14%~30%A;15~17 min,30%~40%A;17~18 min,40%~90%A）,检测波长280 nm。结合多元统计分析,评价不同基原地骨皮的异同点。结果 建立的含量测定及指纹图谱方法具有良好的精密度、稳定性和重复性。30批地骨皮的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均>0.9,且宁夏枸杞地骨皮和枸杞地骨皮指纹图谱中的8个相同共有峰均为酚酰胺类成分,分别为地骨皮乙素、N-（4,9,13-triazatridecan-1-yl）-3,4-dihydroxybenzenepropanamide、阿魏酰基-1,4-丁二胺、N₁,N₅-bis（dihydrocaffeoyl）spermidine或N₅,N₁₀-bis（dihydrocaffeoyl）spermidine、N₅-caffeoyl-N₁₀-dihydrocaffeoylspermidine、N₅-dihydrocaffeoyl-N₁₀-caffeoylspermidine、N₁,N₅-bis（caffeoyl）spermidine和枸杞素A。其中地骨皮乙素在宁夏枸杞地骨皮、枸杞地骨皮中的质量分数范围分别为2.52%~12.24%、1.22%~8.18%。结论 建立的UPLC分析方法可用于地骨皮药材的含量测定和指纹图谱分析。宁夏枸杞地骨皮与枸杞地骨皮的化学轮廓相似,地骨皮乙素含量差异无统计学意义,二者化学组成基本一致。     

青钱柳醇提物中化学成分的UHPLC-Q-TOF/MS分析

目的 应用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法（UHPLC-Q-TOF/MS）对青钱柳醇提物进行快速定性分析。方法 色谱条件为Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm，2.7 μm），以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱（0~26 min，2%~18%B；26~60 min，18%~72%B；60~70 min，72%~100%B；70~71 min，100%~2%B；71~72 min，2%B），流速0.4 mL·min^-1，进样量3 μL；质谱条件为电喷雾离子源（ESI），检测范围m/z 50~1 100，正、负离子模式采集。通过安捷伦MassHunter工作站对所采集的数据进行处理，根据各化合物的保留时间、质谱信息，并结合现有文献及质谱数据库信息对化合物进行鉴定和裂解规律解析。结果 在正、负离子模式下，分别鉴定了52、55个化学成分，其中，正离子模式鉴定黄酮类14个、三萜类3个、有机酸类15个及其他类20个，负离子模式下则鉴定黄酮类18个、三萜类9个、有机酸类18个及其他类10个；汇总正、负离子模式并去除共有化合物，最终推测鉴定化合物87个，包括黄酮类22个、有机酸类27个、三萜类11个及其他类27个。结论 UHPLC-Q-TOF/MS技术可快速解析青钱柳的化学成分，1-酮糖和18β-甘草次酸等与青钱柳降糖活性相关的成分首次在该药材中被鉴定，可为阐明青钱柳药效物质基础提供实验依据。