孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。     

藤黄酸对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用

本研究旨在探讨藤黄酸(gambogic acid,GA)对K562/A02细胞株的耐药逆转作用及其逆转机制。采用MTT法检测GA对K562和K562/A02细胞的增殖抑制作用及对K562/A02细胞阿霉素(ADM)耐药逆转效应;用流式细胞术检测GA联合ADM对K562及K562/A02细胞凋亡率的影响;DAPI荧光染色观察ADM联合GA作用后细胞的形态学改变;Western blot法检测K562及K562/A02细胞P-糖蛋白(P-gp)、存活蛋白(Survivin)基因的表达。结果表明:ADM作用48 h抑制K562和K562/A02细胞增殖的IC50值分别为(1.42±0.07)μg/ml和(28.42±1.40)μg/ml。GA≤0.0625μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显增殖抑制作用;0.0625μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞能增加其对ADM的敏感性,耐药逆转倍数为1.53。0.0625μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞48 h能提高细胞的凋亡率(P<0.05),下调Survivin及P-gp蛋白的表达(P<0.05)。结论:GA可以逆转K562/A02细胞的耐药性,增强耐药细胞对ADM的敏感性,其机制可能与提高K562/A02细胞凋亡、下调Survivin和P-gp蛋白的表达有关。     

三氧化二砷对K562/ADM耐药细胞凋亡抑制的逆转作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞法(FCM)测定P-糖蛋白(P -glycoprotein,P-gp)和bcl-2蛋白表达及caspase-3活性。结果:As2O3显著抑制K562/ADM耐药细胞的增殖;经 As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,annexinV /PI双染显示凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-gp合成明显降低,凋亡抑制基因bcl-2mRNA及其蛋白bcl-2表达下调, caspase-3mRNA表达和caspase-3活性显著增强。结论:As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制可能为As2O3抑制 mdr1和bcl-2基因表达,逆转耐药白血病细胞因bcl-2和P-gp高表达所介导的凋亡抑制。     

MiR-199a-5p通过靶向DRAM1调控急性髓系白血病对阿柔比星的敏感性

目的:比较miR-199a-5p在急性髓系白血病(AML)耐药细胞株K562/ADM以及敏感细胞株K562中的表达,研究其对AML耐药的调控效应并探索其机制。方法:采用MTT法检测阿柔比星(ADM)对K562/ADM和K562细胞的生长抑制率并计算IC_(50)。采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测2种细胞株(K562/ADM和K562)以及患者骨髓标本(复发难治AML患者和化疗后完全缓解AML患者)中miR-199a-5p的表达。通过细胞转染的方法在K562/ADM细胞中转入miR-199a-5p mimic使其表达上调,在K562细胞中转入miR-199a-5p inhibitor使其表达下调,采用CCK-8法检测ADM对2种细胞的增殖抑制率,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测转染后2种细胞中DRAM1基因和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与DRAM13′UTR是否存在直接结合位点。采用siRNA的方法下调K562/ADM细胞中DRAM1表达,CCK-8法检测ADM对细胞增殖抑制率的变化。结果:ADM对K562/ADM和K562细胞的IC_(50)分别为146.14±0.079和3.08±0.056μg/ml。miR-199a-5p在复发难治AML患者骨髓中的表达明显低于完全缓解患者,在K562/ADM细胞中的表达明显低于K562细胞(P 0.05)。当K562/ADM细胞中miR-199a-5p表达上调时,ADM对细胞的增殖抑制率升高,DRAM1基因和蛋白表达明显下降。当K562细胞中miR-199a-5p表达下调时,ADM对细胞的增殖抑制率明显下降,DRAM1基因和蛋白表达明显升高(P 0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-199a-5p与DRAM1的3′UTR区存在直接结合位点。K562/ADM细胞中DRAM1在基因和蛋白水平表达均明显高于K562细胞(P 0.05)。当K562/ADM细胞中DRAM1基因表达下调后,细胞对ADM的敏感性显著升高(P 0.05)。结论:miR-199a-5p在耐药白血病细胞中呈低表达。miR-199a-5p表达能够调控AML细胞对ADM的敏感性。DRAM1是miR-199a-5p调控AML耐药的功能性靶基因。     

NF-κB抑制剂PDTC逆转K562/AO_2细胞耐药性及其机制的研究

为研究NF-κB的异常活化在K562/AO2细胞耐药机制中的作用,采用非细胞毒剂量抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)抑制K562/AO2细胞NF-κB表达,用MTT法检测K562/AO2细胞对药物敏感性的变化,RT-PCR、流式细胞术分别检测K562、K562/AO2细胞mdr-1 mRNA、P-gp表达水平以及不同浓度PDTC作用一定时间对其影响。结果显示:①阿霉素(ADM)诱导耐药的K562/AO2细胞对ADM的耐药性是K562细胞的59倍;非细胞毒剂量PDTC预作用后,ADM对K562/AO2细胞的IC50显著降低,相对逆转耐药效率为93.03%,强于经典耐药逆转剂维拉帕米(Ver);②K562/AO2细胞NF-κB表达水平高于K562细胞(p0.01);3组非细胞毒剂量PDTC作用后K562/AO2细胞NF-κB表达均受抑制;0.2μmol/LPDTC作用24小时抑制效应最强,K562/AO2细胞NF-κB表达降至接近K562细胞水平(p0.05);③K562/AO2细胞mdr-1 mRNA、P-gp表达均高于K562细胞(p0.01);3组非细胞毒剂量PDTC作用K562/AO2细胞48小时后,其mdr-1 mRNA、P-gp表达明显减少。结论:抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO2细胞耐药性,其机制与mdr-1 mRNA及其编码的P-gp表达减少有关。     

HMGB1基因沉默对阿霉素诱导K562/A02细胞凋亡增敏作用的研究

目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因沉默对白血病细胞耐药逆转的作用.方法 将HMGB1基因特异性干扰RNA(HMGB1 siRNA)导入K562/A02细胞中,通过Western blot和RTPCR方法检测HMGB1基因在转染前后的表达;WST8法检测阿霉素(ADM)对转染前后K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测凋亡细胞百分率;Western blot检测线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO的释放;采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-3的活性.结果 ①与未经处理的K562/A02细胞组相比,转染HMGB1 siRNA的K562/A02细胞组HMGB1 mRNA和蛋白水平分别下降86%和71%;②HMGB1基因沉默使K562/A02细胞对ADM的药物敏感性增强,其IC50值从转染前的(4.83±0.08)μg/ml降低到(1.33±0.10)μg/ml,并在ADM浓度为1μg/ml和5μg/ml时,细胞凋亡百分率分别增加27%、32%;③HMGB1基因沉默可促进ADM所致Smac/DIABLO从线粒体向胞浆释放,并增加caspase-3的活性.结论 HMGB1基因沉默能明显增加K562/A02细胞对ADM的敏感性,逆转K562/A02细胞对ADM耐药.     

5-溴汉防己甲素和柔红霉素对K562/A02细胞凋亡和survivin基因表达的影响

本研究探讨5-溴汉防己甲素(BrTet)联合柔红霉素(DNR)治疗耐药慢性髓系白血病的潜在可能性及其相关机制。采用流式细胞术检测DNR,BrTet或DNR和BrTet联合作用K562/A02细胞48小时后凋亡率情况;采用RT-PCR法检测对照组K562细胞、耐药K562/A02细胞及DNR或(和)BrTet作用于K562/A02细胞48小时后存活蛋白(survivin)mRNA表达水平;采用Western blot法检测各组细胞survivin蛋白表达水平。结果表明:BrTet与DNR联合作用对K562/A02细胞的诱导凋亡率较其余各组显著升高,同时联合用药组K562/A02细胞survivin mRNA和蛋白的表达较空白对照组和单药组下调,K562/A02细胞survivin表达较K562细胞升高。结论:BrTet联合DNR能有效逆转耐药,促进K562/A02细胞凋亡,其机制可能与survivin表达下调有关。     

上调PTEN基因表达对白血病耐药细胞系K562/ADM细胞化疗增敏作用的实验研究

目的 探讨上凋PTEN表达对白血病耐药细胞化疗增敏的作用及其机制.方法 将PTEN真核表达质粒导入耐阿霉素(ADM)的K562细胞(K562/ADM细胞)中,采用Western blot和RTPCR方法检测PTEN基因在转染前后细胞的表达,MTT法检测ADM对转染前后K562/ADM细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,采用重组人半胱天冬酶-3(caspase-3)活性定量试剂盒分析caspase-3的活性,Western blot检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)-I/Ⅱ、自噬相关蛋白Beelinl、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶(p-p70S6K)的表达,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透视电镜观察自噬泡的情况.结果 ①与未经处理和转染空载体的K562/ADM细胞相比,转染PTEN基因的K562/ADM细胞组PTEN mRNA和蛋白表达水平均增高;②转染PTEN基因使K562/ADM细胞对ADM的敏感性增强,与转染空载体细胞比较,其细胞存活率从(94.07±2.60)%降低到(53.83±4.20)%,细胞凋亡率从(11.89±1.70)%增加到(43.69±2.30)%;经caspase-3抑制剂(Z-DEVE-FMK)预处理后,未能完全阻止ADM对细胞的毒性作用;③ADM处理细胞12和24 h后,转染PTEN基因的K562/ADM细胞casepase-3活性(2.27±0.13和3.15±0.08)均明显高于转染空载体组(1.19±0.14和1.48±0.06)(P值均<0.05);④与转染空载体组比较,转染PTEN基因的K562/ADM细胞LC3-Ⅱ和Beclinl的蛋白表达水平分别增加83%和18%,p-Akt和p-p70S6K的蛋白表达水平分别降低96%和87%;⑤增加PTEN的表达,细胞内自噬泡较转染空载体组明显增多.结论 上调PTEN基因表达能明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,该作用可能与上调PTEN基因表达、抑制P13K/AkL/mTOR通路活性从而促进细胞凋亡和自噬的发生有关.     

汉防己甲素干预K562细胞mdr1基因表达的研究

目的 观察汉防己甲素(TTD)对阿霉素诱导的K562细胞mdr1基因表达的影响,并初步探讨其机制.方法 采用MTT法观察TTD对K562细胞的毒性作用,以0.6μg/ml阿霉素单独作用或0.6μg/ml阿霉素联合不同浓度的TTD(0.5、1.0、2.0μg/ml)作用于K562细胞,用RT-PCR法检测mdr1 mRNA、NF-kB mRNA水平,用流式细胞术检测P-gP的表达情况,用胞内罗丹明123(Rho123)积聚试验检测P-gP的功能.结果 空白对照K562细胞未见明显mdr1 mRNA及P-gP表达(水平分别为0.171±0.012、7.85±0.15),细胞内Rho123平均荧光强度(反映P-gP功能)为711.9±63.6,NF-kBmRNA水平为0.783±0.090;0.6μg/ml阿霉素作用24 h后mdr1 mRNA、P-gP、NF-kB mRNA表达上调为0.428±0.012、73.68±1.84、1.075±0.047,细胞内Rho123平均荧光强度下降为347.8±60.6(P值均＜0.05);2.0μg/ml TTD预作用24 h再与0.6 μg/ml阿霉素联合作用24 h能显著抑制阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P-gp表达及功能、NF-kB mRNA的上调(分别为0.148±0.006、7.18 ±0.38、799.7±45.8、0.627±0.098)(P＜0.05),而0.5、1.0μg/TTD无明显影响.结论 TTD以浓度依赖性的方式干预阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P-gp表达和P-gp功能的上调,其机制可能与TTD抑制了阿霉素诱导的NF-kB的表达有关.     

Y-盒结合蛋白1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的：检测Y-盒结合蛋白1（YB-1）在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达,探讨其与乳腺癌发生、发展的关系。方法收集河北大学附属医院2012年9月至11月期间手术切除的乳腺癌组织（均为术后石蜡病理确诊为浸润性导管癌）标本30例,癌旁正常乳腺组织标本10例。应用免疫组织化学染色的方法检测组织中 YB-1的表达。结果免疫组化结果显示,YB-1在癌旁正常乳腺组织细胞中无表达或低表达;在乳腺癌组织中高表达,阳性表达率为80%,与癌旁正常乳腺组织相比差异有统计学意义（P＜0.05）。YB-1在Ⅰ期乳腺癌组织中的免疫组化评分显著低于Ⅱ期乳腺癌组织（2.6±1.511 vs.4.2±1.182, P＜0.05）。YB-1在无腋窝淋巴结转移的乳腺癌组织中的表达显著低于伴腋窝淋巴结转移的乳腺癌组织（2.8±1.15 vs.5.1±0.74,P＜0.05）。结论 YB-1乳腺癌中表达上调与乳腺癌临床分期及淋巴结转移有关。     

高压氧联合阿霉素对白血病K562/A02细胞凋亡的影响

本研究探讨0.2MPa高压氧(HBO)联合阿霉素对白血病多药耐药细胞K562/A02细胞凋亡的影响。利用流式细胞术法和透射电子显微镜检测细胞凋亡和caspase-3表达,用定量qReal-time PCR法检测HIF-1α、BCL-2和BAXmRNA表达水平,运用caspase-8试剂盒检测caspase-8的活性,Western blot法检测P-gp活性。结果表明:0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞凋亡率高于ADM组[(47.36±3.87)%vs(28.51±1.09)%],差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞HIF-1αmRNA、P-gp及BCL-2的蛋白水平低于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞的BAX、caspase-3及caspase-8蛋白活性均高于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论 :0.2MPa HBO联合阿霉素可逆转耐药细胞株K562/A02对阿霉素的耐药,提高细胞凋亡率,其机制可能与HIF-1α下调P-gp和BCL-2的表达以及提高caspase活性有关。     

JNK通路在AngⅡ所致肾小球足细胞内质网应激性凋亡中的作用

目的研究内质网应激（ERS）在AngⅡ所致肾小球足细胞损伤中的作用及c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路在AngⅡ所致肾小球足细胞凋亡中的促进作用及其特异性抑制剂SP600125的保护。方法足细胞诱导分化,随机分为对照组（N组）;AngⅡ组（A组）;AngⅡ＋SP600125组（A＋S组）,作用48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量PCR测定GRP78mRNA、p-JNK mRNA表达,Western blot测定GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达。结果经统计学分析后,A组与N组比较,细胞凋亡率增加,GRP78mRNA、p-JNK mRNA的表达增多,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达较N组增多,差异有统计学意义（P〈0.05）;A＋S组足细胞凋亡率、p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达较A组均有减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高AngⅡ可以在体外诱导足细胞发生凋亡。高AngⅡ诱导足细胞凋亡是由ERS途径所介导的,并通过了JNK途径引起细胞凋亡。JNK途径特异性抑制剂SP600125通过抑制c-Jun氨基末端激酶通路的激活抑制了足细胞的凋亡。     

奥沙利铂联合5-Fu术前短程冲击化疗对诱导结直肠癌细胞凋亡的影响

目的：探讨奥沙利铂（L-OHP）联合五氟尿嘧啶（5-Fu）术前短程冲击化疗对结直肠癌细胞凋亡的影响,为结直肠癌新辅助化疗方法提供理论依据。方法对60例结直肠癌患者均分为两组,一组术前采用L-OHP联合5-Fu短程冲击化疗,另一组术前不作化疗。采用RT-PCR法检测凋亡抑制基因Survivin mRNA的表达,用免疫组化检测bcl-2、p53及ki-67的表达,用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果相较于对照组,新辅助化疗组Survivin mRNA表达水平明显降低,bcl-2、ki-67阳性面积率及p53阳性面积率也明显降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）,细胞凋亡率高于对照组（P〈0.05）。结论术前L-OHP短程冲击化疗能够诱导癌细胞凋亡,可能是通过下调survivin mRNA的表达来调控或协同其他凋亡因子,从而达到新辅助化疗治疗的效果。     

脂氧素受体激动剂对巨细胞病毒感染巨噬细胞的免疫负调节

背景：脂氧素可以抑制炎症细胞、内皮细胞、小鼠脾脏树突状细胞等合成细胞因子,还可以抑制炎性细胞因子对细胞的生物效应。目的：分析脂氧素受体激动剂BML-111对人巨细胞病毒感染THP-1源巨噬细胞的免疫调节作用。方法：用人巨细胞病毒AD169毒株感染THP-1源巨噬细胞（MOI=0.5）,细胞培养后设立对照组、人巨细胞病毒感染组及人巨细胞病毒＋BML-111组。在感染后0,1,2,4,12,24,48,72h收集各组细胞培养上清液,以ELISA检测各组细胞因子的表达水平;RT-PCR检测各指标mRNA的表达强度;Western blot检测感染4h的细胞核内p65亚基蛋白表达。结果与结论：与对照组相比,其他两组各细胞因子蛋白及mRNA表达明显升高（P〈0.05）。与人巨细胞病毒感染组相比,人巨细胞病毒＋BML-111组白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α显著降低,转化生长因子β显著升高（P〈0.05）,白细胞介素10差异无显著性意义（P〉0.05）;人巨细胞病毒＋BML-111组各细胞因子mRNA均明显降低（P〈0.05）。与对照组相比,其他两组细胞核内NF-κBp65亚基蛋白浓度明显升高（P〈0.05）;人巨细胞病毒＋BML-111组显著低于人巨细胞病毒感染组（P〈0.05）。说明BML-111可能通过抑制NF-κB的p65亚基核转位,减少白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α的表达,促进转化生长因子β的表达,从而对人巨细胞病毒感染的THP-1源巨噬细胞发挥其免疫负调节作用。     

沉默Survivin基因对鼻咽癌CNE1细胞增殖和凋亡的研究

目的：探讨 Survivin表达降低时,对鼻咽癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法运用 RNA 干扰技术,结合 RT-PCR,Western blot技术,观察干扰 Survivin效果。干扰 Survivn后用 MTT法和 TUNEL法检测鼻咽癌细胞增殖,凋亡的情况。用 Western-blot方法检测凋亡相关蛋白 PARP,Bcl-2和Bax的表达。结果 RT-PCR检测显示 Survivin-siRNA干扰组,Survivin mRNA表达明显下调,其相对表达量为0.26±0.02,抑制率为43.7％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blot检测显示 Survivin-siRNA组蛋白表达下调,其蛋白相对表达量下降了57％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;MTT检测显示 Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用,在24,48和72 h的抑制率分别为21.9％,37.1％和29.6％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Tunel染色结果显示 Survivin-siRNA组细胞凋亡数明显增高。Western blot结果显示Survivin-siRNA组凋亡蛋白PARP（89KD）显著升高,为对照组的3.9倍,抑制凋亡蛋白Bcl-2降低,降低了70％,促进凋亡蛋白Bax升高,为对照组的2.4倍;同时也抑制AKT的磷酸化,磷酸化水平降低了57％,与对照组相比以上结果差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论干扰 Survivin表达,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。Survivin基因可成为鼻咽癌基因治疗的一个潜在靶点。     

外周血CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA水平与乳腺癌的关系

目的研究外周血癌胚抗原（CEA）、生存素（Survivin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）mRNA表达与乳腺癌的关系。方法采用逆转录实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测54例乳腺癌患者和23名正常对照组外周血MMP-2 mRNA、TIMP-2 mRNA、CEAmRNA和Survivin mRNA的表达水平。以正常对照组结果为正常参考范围,分析乳腺癌患者外周血CEA mRNA和Survivin mRNA表达的阳性率。结果乳腺癌患者外周血可检测到不同水平的CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA的表达。Ⅰ/Ⅱ期及Ⅲ/Ⅳ期乳腺癌组外周血MMP-2 mRNA表达量高于正常对照组（P〈0.01）;TIMP-2/MMP-2比值则低于正常对照组（P〈0.05、P〈0.01）;Ⅲ/Ⅳ期乳腺癌患者外周血CEAmRNA和Survivin mRNA表达量高于正常对照组（P〈0.01）。Ⅲ/Ⅳ期乳腺癌患者外周血MMP-2 mRNA、CEA mRNA、Survivin mRNA表达量及TIMP-2/MMP-2比值与Ⅰ/Ⅱ期乳腺癌患者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。Ⅲ/Ⅳ期乳腺癌患者外周血CEAmRNA和Survivin mRNA表达的阳性率明显高于Ⅰ/Ⅱ期乳腺癌患者（P〈0.01、P〈0.05）。结论采用逆转录real-time PCR检测外周血CEA、Survivin、MMP-2 mRNA的表达以及TIMP-2/MMP-2比值可以成为一种无创性乳腺癌辅助诊断、分期、转移的方法。     

2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞caspase-3和survivin表达的影响。实验分3组：对照组，培养基中不含2-ME；实验组，分别用1、2、4、8及16μmol／L的2-ME处理K562细胞；阴性对照组，培养液中以不合RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞。应用TUNEL、流式细胞术（FCM）、半定量RT—PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平。结果表明：2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡，与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01），且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关（γ=0．845，P=0．034）。随着2-ME浓度增加，caspase-3蛋白表达量逐渐增加，而survivin蛋白表达量逐渐降低，两者与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）；且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关（γ=-0．956，P=0．001）。随着2-ME浓度增加，caspase-3基因表达量逐渐增加，而survivin基因表达量逐渐降低，两者与对照组比较差异均有统计学意义（p均〈0．01），且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关（γ=0．966，P=0．001）。结论：2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡，显示了其对CML有潜在的治疗价值。     

CyclinD1及Survivin蛋白表达与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的研究CyclinDl和Survivin蛋白表达与鼻咽癌（nasopharyngealcarcinoma,NPC）放疗敏感性的关系。方法选取72例NPC患者放疗前活检组织标本（其中放疗敏感组49例,放疗不敏感组23例）．常规HE染色确定组织分型;免疫组化技术S-P法检测CyclinD1和Survivin蛋白表达情况;应用统计学软件进行统计学分析。结果72例NPC患者标本中,30例CyclinD1蛋白高表达,阳性表达率为41．7％。在NPC放疗敏感组和放疗不敏感组的高表达率分别为28．6％（14／49）和69．6％（16／23）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;72例NPC患者标本中,34例Survivin蛋白高表达,阳性率为4712％,在放疗敏感组和放疗不敏感组高表达率分别为34．7％（17／49）和73．9％（17／23）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。CyclinD1和Survivin蛋白的表达在NPC患者中呈正相关性,r=0．353（P〈0．05）。结论CyclinD1和Survivin蛋白的表达与NPC放射敏感性呈负相关。CyclinD1和Survivin可以作为预测NPC患者放疗敏感性的分子标志物。     

解毒通络保肾法抑制糖尿病肾病炎症发病机制的研究

目的:研究中药解毒通络保肾胶囊对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法:将实验动物分为正常对照组、DM组、解毒通络保肾胶囊中药实验组和苯那普利阳性对照组。检测各组第12周的血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率(UAER)、血脂、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量和肾脏肥大指标的变化,应用RT-PCR检测MCP-1mRNA,免疫组化检测肾内纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白、PCNA蛋白、NF-κBp65蛋白、MCP-1蛋白、ED-1蛋白表达水平。结果:中药实验组较DM组血糖水平显著降低(P<0.01),UAER明显减少(P<005),尿素氮和血肌酐水平下降,肾脏肥大指标改善(P<0.01);明显降低AngⅡ含量,PCNA、FN和ColⅣ蛋白表达显著低于DM组(P<001)。RT-PCR结果表明,DM大鼠肾皮质MCP-1mRNA表达升高,中药实验组MCP-1mRNA低于DM组(P<0.05)。结论:解毒通络保肾胶囊对DM肾脏病变有保护作用,其机制可能是通过减少肾组织中AngⅡ含量,下调DM大鼠NF-kB,减少MCP-1表达,从而抑制肾内炎症的反应。