丹酚酸A对实验性大鼠肝纤维化Ⅰ型胶原及其基因表达的影响

目的:研究丹酚酸A(SA-A)抗肝损伤、肝纤维化作用及其对Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法:采用CCl_4诱导大鼠肝损伤及肝纤维化,期间予SA-A灌胃治疗,另设秋水仙碱组、丹参组作对照,6w后进行肝组织病理学和Ⅰ型胶原免疫组化观察,肝组织羟脯氨酸(Hyp)、血清ALT、AST和白蛋白含量测定,并以RT-PCR法检测肝组织Ⅰ型胶原mRNA。结果:SA-A可降低血清ALT、AST水平及肝组织Hyp含量,减轻肝纤维化程度与秋水仙碱、丹参一致。此外,SA-A组肝组织Ⅰ型胶原mRNA表达明显轻于模型组。结论:丹酚酸A有显著的抗肝损伤、肝纤维化作用,对损伤肝组织Ⅰ型胶原mRNA表达有明显抑制作用。     

半枝莲水煎液对肝纤维化模型大鼠间质胶原和TGF-β_1的影响

目的:观察半枝莲水煎液对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,研究其对肝纤维化形成的抑制作用,并探讨可能的作用机制。方法:采用CCl4复合因素制备大鼠肝纤维化模型,半枝莲水煎液低、中、高不同剂量灌胃给药,用肝脏HE和Masson染色法观察各组大鼠肝组织的炎性坏死与胶原纤维沉积变化;免疫组织化学方法(SABC法DAB显色)检测分析各组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和TGF-β1的含量。结果:半枝莲水煎液能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和TGF-β1的含量,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05);半枝莲水煎液高、中、低剂量均可以明显减轻大鼠肝脏内胶原纤维增生沉积(P<0.05),抑制肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白(P值均<0.05)及TGF-β1的合成表达。结论:半枝莲水煎液可有效减少肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的沉积和拮抗TGF-β1的合成,有良好的抗肝纤维化作用。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的 :从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法 :抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC ,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原 ,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量 ;半定量法RT -PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP1)的mRNA表达。结果 :抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组 (P <0 .0 1) ;能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达 (P <0 .0 1) ,且能促进MMP1的mRNA表达 (P <0 .0 1)。结论 :抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达 ,从而可达到抑制胶原合成 ,促进胶原降解 ,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

ERK2和PI-3K在小柴胡汤抗大鼠肝纤维化中的表达

目的观察小柴胡汤对肝纤维化大鼠肝组织细胞外信号调节激酶2(ERK2)、磷酸肌醇-3激酶(PI-3K)表达的影响,探讨小柴胡汤治疗肝纤维化的分子机制。方法皮下注射10%四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,第9周开始四氯化碳给药同时给予小柴胡汤灌胃治疗6周。通过血清生化检测反映肝脏功能;HE染色法观察肝组织病理学变化;免疫组织化学方法观察肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,以反映肝星状细胞的活化情况;Real time RT-PCR观察ERK2、PI-3K mRNA的表达。结果与模型组相比,小柴胡汤中、高剂量组在血清学和组织学上均有明显改善,肝组织ERK2、PI-3K mRNA的表达明显减少,具有统计学意义。结论小柴胡汤抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化作用可能与干预Ras/ERK和PI-3K信号通路有关。     

仲景三方对大鼠肝纤维化不同时期胶原Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ影响的观察

目的 :探讨小柴胡汤、大黄虫丸、鳖甲煎丸治疗肝纤维化机理之异同。方法 :用CCl₄ 制造肝纤维化模型 ,分别于造模第 1天、第 5周、第 9周时分别加入上述三方制成的混悬液 ,用药时间均为 4周 ,处死取材后HE及免疫组化染色 ,观察三方在肝纤维化不同时期对胶原Ⅰ ,Ⅲ ,Ⅳ的影响。结果 :小柴胡汤预防组及治疗Ⅰ组肝脏病理变化不明显 ,胶原Ⅰ ,Ⅲ ,Ⅳ阳性程度轻 ;治疗Ⅰ组、治疗Ⅱ组以大黄虫丸、鳖甲煎丸组病变程度轻 ,胶原Ⅰ ,Ⅲ ,Ⅳ阳性程度轻 ,但ridite分析治疗Ⅰ组大黄虫丸优于鳖甲煎丸 ;治疗Ⅱ组鳖甲煎丸优于大黄虫丸。结论 :小柴胡汤治疗肝纤维化当早期用药 ;轻度肝纤维化大黄虫丸疗效最优 ,亦可用鳖甲煎丸 ;较重的肝纤维化鳖甲煎丸疗效最优 ,亦可用大黄虫丸。     

补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响

目的:研究补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响,探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法:建立Wistar大鼠CCL4损伤性肝纤维化模型,通过免疫组化及图像分析等方法,观察补肾化瘀方对肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及MMP-1/TIMP-1表达的影响。结果:经补肾化瘀方治疗后,用药组肝细胞变性程度和纤维化程度明显减轻;Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达明显降低(P<0.05);MMP-1含量明显增加,TIMP-1含量降低,MMP-1/TIMP-1比值显著增加,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:补肾化瘀方可能通过增加MMP-1的产生、减少TIMP-1的分泌而使其对MMP-1的抑制作用减弱,促进了Ⅰ型及Ⅲ型胶原的降解,起到抗纤维化的作用。     

玉米须对大白鼠肝星状细胞增殖分化的影响

目的:观察玉米须(Stigma maydis or corn silk)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells)的增殖,并探讨其抗肝纤维化作用机制。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Metrizamide密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,用MTT比色法和ELISA法分别检测大鼠肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原的合成。结果:玉米须能明显抑制肝星状细胞的增殖及Ⅰ型胶原的合成,随着玉米须用量增加,抑制作用增强,呈明显的剂量效应关系(P0.05)。结论:玉米须可通过抑制大鼠肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成而起到抗肝纤维化的作用。     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

肝舒胶囊含药血清体外抗肝纤维化的实验研究

目的研究肝舒胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)自分泌的TGF-β1和Ⅰ型胶原的增生抑制作用,探讨肝舒胶囊体外抗肝纤维化的机制。方法含药血清作用于HSC-T6后,采用貂肺上皮细胞(Mv-1-Lu)生长抑制MTT法检测HSC-T6分泌的TGF-β1的活性及其总量,ELISA法检测PDGF诱导的HSC-T6的I型胶原含量。结果肝舒胶囊含药血清不仅可减少HSC TGF-β1的分泌总量,并抑制TGF-β1的活化,而且还可降低I型胶原的分泌。结论肝舒胶囊含药血清能抑制肝星状细胞TGF-β1产生并活化及降低I型胶原含量,可能是与其具有抗肝纤维化的作用有关。     

干扰素联合小柴胡汤治疗肝纤维化的临床观察

目的:观察干扰素-α联合小柴胡汤治疗慢性肝炎肝纤维化的疗效。方法:对照组用干扰素、肌苷等治疗,治疗组在此基础上加用小柴胡汤。结果:治疗组在临床总体疗效以及改善肝功能和肝纤维化指标等方面,明显优于对照组。     

一贯煎对大鼠肝星状细胞雌激素受体的影响

目的:观察一贯煎含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)2种亚型基因表达的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:体外培养活化的大鼠HSC-T6细胞,分为空白组、雌二醇组和一贯煎高、中、低剂量组,共5组,空白组加入空白鼠血清,药物组加入相应的含药血清进行干预,培养24 h、48 h、72 h后,分别收集细胞和上清液,保存备用。MTT法检测细胞增殖情况;ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量;Real time-PCR方法检测ERα、ERβ mRNA的表达。结果:一贯煎高剂量组表现对细胞增殖有明显的抑制作用,能够降低细胞上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量,且作用较雌二醇显著(P0.05);一贯煎在提高HSC-T6细胞ERα、ERβ mRNA的表达方面作用较雌激素含药血清组弱,差异无统计学意义。结论:一贯煎能够抑制肝星状细胞活化,其机制可能是通过提高肝星状细胞的雌激素受体表达而起作用。     

疏肝健脾方醇水双提物对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠的保护作用

目的探讨疏肝健脾方(柴胡、黄芪、白芍、白术等)醇水双提物对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的保护作用。方法除正常组外,其余各组采用皮下注射50%四氯化碳,每周2次,持续12周,复制肝纤维化大鼠模型。造模后第7周,分别灌胃给予疏肝健脾方醇水双提物(1.5、3.0、6.0 g/kg)剂量组和阳性药秋水仙碱组,每天1次,连续6周。实验结束后,Masson染色观察肝脏组织胶原沉积;放射免疫法检测血清中透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原肽(procollagen-Ⅲ-peptide,PⅢNP)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-C)的水平;免疫组化染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)的表达。结果与模型组比较,疏肝健脾方醇水双提物不仅可减轻胶原纤维的沉积,改善肝纤维化损伤程度,还可显著降低血清中透明质酸、层粘蛋白、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原的水平,抑制肝组织中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达。结论疏肝健脾方醇水双提物对化学性肝纤维化大鼠具有很好的抗肝纤维化作用,其可能机制与抑制肝星状细胞活化、减少细胞外基质的合成有关。     

平肝散降解肝内纤维定量变化及意义

采用日本血吸虫感染动物制备小白鼠病理性肝纤维化模型。并观察平肝散对早期血吸虫性肝纤维化病理过程的阻断及逆转作用。中药组动物血清Ⅰ型前胶原（ＰＣ－Ⅰ）及血清Ⅲ型前胶原（ＰＣ－Ⅲ）含量减少,血清Ⅲ型前胶原与对照组比较有显著性差异;动物血清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）及白细胞介素６（ＩＬ－６）均低于实验对照组;肝组织中羟脯氨酸（ＨＹｐ）含量下降。图象分析结果表明平肝散能使日本血吸虫性肝虫卵肉芽肿的周长、最大直径及最小直径缩小,肝内病灶中网状纤维减少,增生纤维组织所占面积下降,肝病灶炎性细胞浸润明显减轻。     

扶正化瘀方与黄芪汤合用对实验性肝硬化大鼠的治疗作用

目的:观察扶正化瘀方与黄芪汤合用对实验性肝硬化大鼠的治疗作用,探讨补虚中药对肝硬化的治疗作用特点。方法:二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射4周制备肝硬化大鼠模型。成模后模型大鼠分别给予扶正化瘀方、黄芪汤、扶正化瘀方合黄芪汤灌胃2周。观察大鼠体重、肝重、脾重;HE染色观察肝组织炎症病理;天狼星红染色观察肝组织胶原沉积;试剂盒检测大鼠血清肝功能(ALT,Alb,T.Bil)、肝组织SOD活性及MDA含量;盐酸水解法测定肝组织Hyp含量;免疫组化染色观察肝组织α-SMA表达;Western blot检测肝组织α-SMA蛋白表达。结果:与正常大鼠相比,模型大鼠血清ALT,T.Bil明显升高,Alb含量显著降低;肝组织SOD活性下降,MDA和Hyp含量显著升高;肝组织炎症病变和胶原沉积明显,α-SMA表达显著增加。黄芪汤、扶正化瘀方及两方合用均可显著改善模型大鼠血清肝功能,改善肝脏脂质过氧化,降低肝组织Hyp含量,减轻肝组织炎症和胶原沉积,抑制α-SMA表达。在改善肝脏胶原沉积与抑制α-SMA表达方面,两方合用优于单用。结论:扶正化瘀方、黄芪汤、扶正化瘀方合黄芪汤均可改善DMN模型大鼠肝纤维化,两方合用较之各单方组抑制胶原沉积明显,其部分机制在于两方合用可更好抑制肝星状细胞活化。     

肝复康对实验性大鼠肝纤维化肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响

目的研究肝复康对实验性大鼠肝纤维化的肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值的影响.方法采用四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模60 d后给予肝复康治疗3个月,以秋水仙碱及肝脾康为对照药.检测肝组织羟脯氨酸含量,苦味酸天狼星红染色法偏振光显微镜显示肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原,并结合图像分析计算Ⅰ、Ⅲ型胶原面积及面积比.结果肝复康治疗后肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量较模型对照组明显减少,Ⅰ型胶原面积明显降低(P《0.01),Ⅲ型胶原面积明显降低(P《0.01),Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的比值明显降低(P《0.01).结论肝复康可明显降低肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,降低Ⅰ、Ⅲ型胶原含量比,使细胞外基质的成分趋于正常.     

芪术颗粒对Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原影响的免疫组化研究

目的：观察芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的影响。方法：人血白蛋白免疫致敏法建立大鼠肝纤维化模型,用芪术颗粒治疗,分别在治疗1个月、3个月时取肝组织,ABC免疫组化方法染色,MPEAS－500型图像分析仪进行图像分析。结果：芪术颗粒治疗各组Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原减少明显,仅见于中央静脉周围及汇管区,其中以大剂量组三个月疗程时最显,与模型组比较P＜0.05。尤其对Ⅰ、Ⅳ型胶原的作用更为明显,治疗3个月时其相对含量与治疗1个月时相对有效相关性。结论：芪术颗粒能减少大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的相对含量,从而减轻肝纤维化的程度。     

夏枯草硫酸多糖对CCl4致大鼠肝纤维化及TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞活化的影响

目的:观察夏枯草硫酸多糖(PSSP)对四氯化碳(CCl4)所致的大鼠肝纤维化及转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)的影响,从而初步探讨PSSP抗纤维化的机制。方法:采用CCl4-橄榄油溶液腹腔注射诱导大鼠肝纤维化造模,随机分为5组,分别为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.25 mg·kg-1),PSSP高剂量组(300 mg·kg-1)和PSSP低剂量组(100 mg·kg-1)。分别测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ胶原(C-Ⅳ)的含量;采用苏木素-伊红(HE)及天狼猩红染色观察大鼠肝组织病理学改变;体外培养HSC-T6细胞;采用细胞增殖与活性法(CCK-8)测定PSSP对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原(Col-I),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组比较,PSSP可明显降低大鼠ALT,AST,HA,LN,PC-Ⅲ和C-Ⅳ的含量,并减轻大鼠肝纤维化程度(P0.01);PSSP可抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖,减少HSC-T6细胞Col-I,α-SMA mRNA和蛋白的相对表达量(P0.01)。结论:PSSP具有很好的抗纤维化作用,其机制可能与抑制肝星状细胞活化及抑制胶原合成与沉积,减少细胞外基质(ECM)的生成并促进其降解有关。     

加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型胶原影响的实验研究

目的 观察加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原的影响效果,从而探讨该方抗肝纤维化的机理.方法采用二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,加味四逆散灌胃给药,免疫组织化学方法检测分析各组大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原的含量.结果加味四逆散能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原的含量,与病理模型组比较有显著性差异(P<0.05).结论加味四逆散可有效的减少肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原的沉积,对肝纤维化有肯定的治疗作用.     

半枝莲水煎液对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1及TIMP-1表达的影响

目的 研究半枝莲水煎液对免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1表达的影响.方法 Wistar大鼠72只随机分为正常对照组、模型组和半枝莲水煎液低、中、高剂量治疗组及秋水仙碱对照组共6组;采用猪血清腹腔内注射构建肝纤维化大鼠模型,肝组织切片HE染色后,光镜下观察大鼠肝组织纤维化程度;免疫组化染色法(SABC型)观察肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1含量变化.结果 半枝莲水煎液各治疗组与模型组相比肝纤维化程度显著减轻;半枝莲中、高剂量治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1水平又显著低于模型组(P<0.01).结论 半枝莲水煎液能够显著降低免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及TIMP-1表达.