丹参水溶性成分拮抗脂多糖诱导HTR8/SVneo滋养层细胞凋亡的作用机制

目的 探讨丹参水溶性成分拮抗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导HTR8/SVneo细胞凋亡的相关作用机制。方法 以不同浓度(0,100,200,400,800,1 600 ng·mL^-1)LPS处理HTR8/SVneo细胞,采用实时定量聚合酶链式反应验证HTR 8/SVneo细胞炎症模型的建立;细胞活力检测试剂盒检测各组细胞活力;划痕试验评估各组细胞向损伤区域迁移能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率并分析各组细胞线粒体膜电位。结果 200 ng·mL^-1 LPS干预后HTR8/SVneo细胞的NLRP3炎症小体指标及炎症因子表达量增高(P<0.05)。与LPS组相比,丹酚酸B(0.08 μmol·L^-1)、丹酚酸C(0.4 μmol·L^-1)、紫草酸(0.08 μmol·L^-1)干预后HTR8/SVneo细胞活性明显升高(P<0.01)。与LPS组比较,丹参水溶物质组凋亡率显著降低(P<0.05或P<0.01),线粒体膜电位水平显著升高。结论 丹参水溶物质能够提高LPS干预后HTR8/SVneo细胞活力,改善细胞迁移能力,提高细胞线粒体膜电位,进而抑制细胞凋亡。     

5-对氟苄氧基杨梅醇对人肺腺癌A549-Homo BIRC5体内增殖的抑制作用及机制研究

目的 研究5-对氟苄氧基杨梅醇(myricanol 5-fluorobenzyloxy ether,5FEM)对人肺腺癌A549-Homo BIRC5体内增殖的抑制作用及机制。方法 构建A549-Homo BIRC5裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、溶剂(聚乙二醇400,2.5 mL·kg^-1)组和5FEM低、中、高剂量(20,40,80 mg·kg^-1)组,每组8只。各组每日腹腔注射给药,连续5周,每周测量移植瘤体积用于绘制肿瘤生长曲线,实验结束后处死裸鼠,剥离瘤体并称重。TUNEL法检测移植瘤组织细胞凋亡情况;RT-qPCR测定移植瘤组织中Caspase-9、PARP、Bax、Bcl-2和Survivin的mRNA表达水平;ELISA法检测瘤组织中Caspase-9、Survivin和PARP蛋白含量;免疫组化法检测瘤组织中Survivin、Caspase-9、Cleaved caspase-9、PARP和Cleaved PARP蛋白水平。结果 与模型组相比,5FEM(20,40,80 mg·kg^-1)能够显著减小移植瘤体积和减轻瘤重,呈一定剂量依赖性。TUNEL染色结果显示5FEM干预后肿瘤细胞凋亡较模型组明显增多。RT-qPCR结果显示,5FEM(20,40,80 mg·kg^-1)可以诱导瘤组织中Caspase-9和Bax的mRNA表达显著升高,并诱导Bcl-2、PARP和Survivin的mRNA表达降低。ELISA结果显示,5FEM(40,80 mg·kg^-1)可以显著增加瘤组织中Caspase-9蛋白表达量,并显著降低瘤组织中PARP和Survivin蛋白的表达量。免疫组化结果显示,5FEM(80 mg·kg^-1)处理后瘤组织中Caspase-9、Cleaved caspase-9和Cleaved PARP蛋白表达均显著升高,而PARP和Survivin蛋白表达被不同程度抑制。结论 5FEM可下调Survivin表达,促进Caspase-9和PARP活化,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肺腺癌A549-Homo BIRC5裸鼠移植瘤生长。     

LC-MS/MS 法测定人血浆中倍他米松

建立测定人血浆中倍他米松的LC-MS/MS方法。采用Venusil XBP C₈ (200 mm×3.9 mm ID, 5 μm)色谱柱，流动相为甲醇-水(含甲酸铵5 mmol·L^-1)(80∶20)，流速0.4 mL·min^-1；质谱仪离子源为电喷雾离子源(ESI)，正离子模式检测，监测离子为393.3→355.2(倍他米松)和361.3→343.2(泼尼松龙,内标)。血浆样本用乙酸乙酯处理。倍他米松在0.5~80.0 ng·mL^-1线性关系良好(r=0.999 2)， 血浆低、 中、 高3种浓度(1.0， 10.0， 60.0 ng·mL^-1)平均提取回收率为88.24%，定量限为0.5 ng·mL^-1。本方法操作简便、准确、灵敏，适用于复方倍他米松注射液人体药代动力学研究。     

中毒剂量与治疗剂量克仑特罗在兔体内的药动学研究

目的研究克仑特罗在引起不良反应的大剂量下兔体内的药动学,探讨中毒剂量与治疗剂量的药动学参数存在的差异。方法新西兰兔单剂量灌胃(ig)中毒剂量(150μg·kg^-1)与治疗剂量(5μg·kg^-1)的盐酸克仑特罗溶液,采用酶标免疫分析(ELISA)测定不同时间的血浆药物浓度。两组试验数据采用3P97程序拟合处理,求得不同剂量的药动学参数。结果两组剂量的浓度-时间曲线均符合一室开放模型。中毒剂量与治疗剂量的Ke分别为(0.39±0.08)h^-1和(0.18±0.07)h-1;t_1/2(ke) 分别为(1.82±0.34)h和(4.30±1.61)h;t1/2(ka)分别为(0.67±0.28)h和(1.05±0.28)h;t_(max)分别为(1.48±0.39)h和(2.70±0.22)h;C_max分别为(71.37±37.76)ng·mL^-1和(1.56±0.98)ng·mL^-1;AUC分别为(310.28±115.00)ng·h·mL^-1和(14.28±7.22)ng·h·mL^-1;MRT分别为(3.74±0.51)h和(8.82±2.78)h。结论两组剂量在Ke(P<0.01),t_1/2(ke) (P<0.05),t_1/2(ke) (P<0.05)、t_max(P<0.01),MRT(P<0.01)等存在显著差异;C_max,AUC随剂量增加而增加,C_max/D₀、AUC/D₀无显著性差异(P>0.05),为临床抢救中毒病人提供参考。     

活血化瘀方对糖尿病大鼠视网膜周细胞的保护作用

目的 探究自拟活血化瘀方对糖尿病大鼠视网膜周细胞（retinal capillary pericytes,RCPs）的保护作用。方法 40只SD大鼠随机分成4组,其中10只为正常组,另30只腹腔注射链脲佐菌素造糖尿病模型成功后再分为活血化瘀方高（6.75 g·kg^-1）、低剂量组（3.375 g·kg^-1）及模型组,每组各10只,灌胃60 d后取视网膜,对RCPs进行免疫组化及Bax、Bak、Bcl-2、caspase-3蛋白表达分析。在体外实验中,将高糖（30 mmol·L^-1）培养的RCPs用不同浓度的活血化瘀方进行干预,CCK-8检测RCPs增殖,JC-1染色后荧光显微镜观察细胞形态和RCPs凋亡情况,并使用流式细胞仪进行定量分析。结果 糖尿病模型大鼠较正常组RCPs凋亡明显,而活血化瘀方可减少RCPs凋亡。与0 μg·mL^-1剂量增殖效果相比,25~100 μg·mL^-1活血化瘀方有显著性差异（P<0.01或P<0.05）。在抗高糖诱导凋亡方面,25~100 μg·mL^-1与0 μg·mL^-1相比,有显著性差异。结论 活血化瘀方可通过主要外膜蛋白/Bcl-2途径抑制糖尿病大鼠RCPs凋亡,且对高糖诱导的RCPs凋亡具有保护作用。     

通过体外自乳化性能及体内药代动力学评价优化葛根素自乳化制剂

本文将水不溶性药物葛根素制备成自乳化制剂。测定了葛根素在不同油相及表面活性剂的溶解度，结果表明葛根素在油酸、Tween 80中的溶解度较好，1，2-丙二醇不但能增加药物的溶解度，而且能够提高自乳化能力。以油酸为油相，Tween 80为表面活性剂，1，2-丙二醇为助表面活性剂，配制一系列混合物，通过绘制三元相图得到自乳化区，考察不同自乳化处方的自乳化性质，采用激光粒度散射仪测定乳化后粒子大小，在体外评价基础上选择较好的3个处方进行比格犬体内药动学研究，比较不同处方自乳化制剂在比格犬体内的生物利用度包括药代动力学参数Cmax， Tmax， AUC0-t。结果表明处方2和处方3的AUC0-t值［(5.201±0.511) ng·mL^-1·h， (5.174±0.498) ng·mL^-1·h］和Cmax值［(1.524±0.125) ng·mL^-1， (1.513±0.157) ng·mL^-1］显著高于处方4［(3.013±0.623) ng·mL^-1·h， (0.939±0.089) ng·mL^-1］，通过体内研究结果获得较优处方为油酸(17.5%)、Tween 80(34.5%)、1，2-丙二醇(34.5%)。自乳化释药系统提供了水不溶性药物口服给药的新途径。     

青天葵甲醇提取物通过ERK信号通路诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡

目的 研究青天葵甲醇提取物（Nervilia fordii methanol extracts，NFME）体外对鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡作用及其作用机制。方法 MTT法检测不同浓度（0，0.25，0.5，1，2，3 mg·mL^-1）的NFME处理CNE-2细胞24，48 h对CNE-2细胞生长抑制率的影响；克隆原形成试验观察NFME对CNE-2细胞克隆形成率的影响；Hoechst凋亡染色观察NFME对CNE-2细胞凋亡的影响；Western blotting测定NFME作用下caspase-3、ERK1/2和c-Raf蛋白磷酸化水平的变化。结果 MTT试验结果显示，与对照组相比，在给药24 h时0.5 mg·mL^-1的NFME就能抑制CNE-2细胞的增殖（P<0.05），抑制率为12.64%。而在给药48 h时0.25 mg·mL^-1的NFME就能抑制CNE-2细胞增殖（P<0.05），抑制率为22.43%；克隆原形成能力试验表明，0.25 mg·mL^-1的NFME能够抑制CNE-2细胞集落的形成（P<0.05）；Hoechst33258凋亡染色观察到0.25 mg·mL^-1的NFME作用24 h能够观察到CNE-2细胞发生凋亡（P<0.05），凋亡率达到17.91%；Western blotting结果表明0.5 mg·mL^-1的NFME能使CNE-2细胞中caspase-3发生剪切，随着给药浓度增加其剪切作用越明显（P<0.01），同时0.5 mg·mL^-1的NFME能够降低CNE-2细胞中ERK1/2和c-Raf蛋白的磷酸化水平（P<0.05）。结论 青天葵甲醇提取物能抑制鼻咽癌CNE-2细胞的增殖并诱导其发生凋亡，其作用机制可能与抑制ERK信号通路有关。     

雷藤氯内酯醇对正常人及类风湿关节炎患者周围血单个核细胞及滑膜细胞产生免疫球蛋白的影响

研究了10例正常人和6例类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)及3例RA患者消化的单个滑膜细胞(DSSC),经雷公藤的有效单体雷藤氯内酯醇(T₄)处理2h对其分泌免疫球蛋白(Ig)的影响。结果显示:T₄在浓度为5～35ng·mL^-1对正常人PBMC分泌Ig有明显抑制作用,呈剂量依赖趋势。在25ng·mL^-1浓度下,T₄对RA患者PBMC及DSSC分泌Ig均有明显抑制作用。     

硫酸沙丁胺醇渗透泵控释片的人体药代动力学与生物利用度

目的:研究自制硫酸沙丁胺醇渗透泵控释片与进口控释片的人体药代动力学与生物利用度。方法:利用高效液相色谱荧光检测法,采用交叉实验设计对本品和进口硫酸沙丁胺醇控释片进行人体生物利用度对照研究。结果:硫酸沙丁胺醇控释片与进口硫酸沙丁胺醇控释片的血药浓度曲线下面积AUC 分别为(63.67 ±10.37)ng·h·mL^-1和(60.21 ±11.95) ng·h·mL^-1,最大血药浓度C_max 分别为(8.60 ±1.93) ng·mL^-1 和(8.20 ±1.40)ng·mL^-1,达峰时间T_max 分别为(6.3 ±1.0) h 和(6.8 ±1.3) h,多剂量给药达稳态时血药浓度波动系数FD 分别为1.09 ±0.23 和1.14±0.25。结论:经方差分析和双单侧检验,两种制剂生物等效。     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

CEA、CYFRA21-1与免疫治疗NSCLC预后的相关性研究★

目的 探讨临床常用的肺部肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1及CA125在肿瘤免疫治疗中的作用。方法 收集我院收治的82例首次接受纳武利尤单抗（3 mg·kg^-1，每2周1次）免疫治疗的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的临床资料。分别记录治疗前及治疗6周后CEA、CYFRA21-1、CA125水平以及治疗前后上述指标的差值。所有患者每3个月随访1次，主要生存评估指标为无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）。结果 治疗前CEA<15.675 ng·mL^-1或CYFRA21-1<10.810 ng·mL^-1、治疗6周后CEA差值<2.485 ng·mL^-1或CYFRA21-1差值<3.750 ng·mL^-1与较长的PFS和OS显著相关（P<0.001）。多因素分析结果表明，ECOG评分0~2分的患者可获得较长的PFS；ECOG评分0~2分、CEA差值<2.485 ng·mL^-1的患者可获得较长的OS。结论 治疗前CEA <15.675 ng·mL^-1、CYFRA 21-1<10.810 ng·mL^-1，治疗6周后CEA差值<2.485 ng·mL^-1、CYFRA21-1差值<3.750 ng·mL^-1可能是预测纳武利尤单抗治疗NSCLC患者预后的较为可靠的生物学指标。     

间尼索地平控释微丸Beagle犬体内药动学研究

目的建立间尼索地平血药浓度的高效液相色谱-质谱联用方法,研究Beagle犬单剂量口服间尼索地平控释微丸的药动学。方法用HPLC-MS法测定健康Beagle犬单剂量口服间尼索地平控释微丸和普通微丸的血药浓度,以DAS 2.0软件计算药动学参数。结果单剂量给药后,控释微丸和普通微丸的tmax分别为(11.154±0.5077)h和(2.213±0.3225)h,Cmax分别为(79.40±10.60)ng.mL1和(116.7±20.35)ng.mL1,AUC分别为(1227.8±296.0)ng.h.mL1和(867.8±146.7)ng.h.mL1,控释微丸的相对生物利用度为141.5%。结论本方法准确、灵敏,间尼索地平控释微丸血药浓度平稳,可较长时间保持血药浓度。     

氧化槐果碱对胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察氧化槐果碱对胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 采用CCK-8、Hoechest 33342染色、倒置显微镜和流式细胞术测定氧化槐果碱干预后对细胞的增殖、凋亡的影响,qRT-PCR检测胃癌MGC80-3细胞中Bcl-2、Bax mRNA水平,Western blot法检测胃癌MGC80-3细胞中Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平。结果 氧化槐果碱能抑制胃癌MGC80-3细胞增殖（P<0.05）,并具有时间和浓度依赖性。0.48,0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能诱导细胞凋亡（P<0.05）,凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK能逆转氧化槐果碱的凋亡诱导作用,0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能上调Bax的mRNA水平,下调Bcl-2的mRNA水平,差异均有统计学意义（P<0.05）。0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能上调Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的蛋白水平,下调Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK能逆转氧化槐果碱对Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的影响。结论 氧化槐果碱能通过调节Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的表达水平,抑制胃癌MGC80-3细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

不同浓度瑞芬太尼预处理对人肝细胞缺氧复氧损伤保护作用的影响

目的研究不同浓度瑞芬太尼预处理对人肝细胞缺氧复氧损伤保护作用的影响,探讨瑞芬太尼预处理的适宜浓度。方法将培养的人肝细胞按瑞芬太尼的浓度梯度分为11组:正常对照组(N组),缺氧复氧组(IR组),瑞芬太尼预处理组(RE1~RE8组):瑞芬太尼终浓度分别为0.5,1,5,10,20,30,40,50 ng.mL 1预处理1 h后建立缺氧复氧模型,生理盐水组(NS组)。N组正常条件下培养,其他组缺氧8 h,复氧4 h。复氧结束即刻,MTT法检测肝细胞活力;全自动生化仪检测细胞培养液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;MDA试剂盒检测肝细胞内丙二醛(MDA)含量。结果与N组比较,其他各组细胞活力降低,AST,LDH水平和细胞内MDA含量升高(P<0.05)。与IR组和NS组比较,RE2~RE6组细胞活力升高,AST、LDH水平和细胞内MDA含量降低(P<0.05);而RE1、RE7和RE8组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论临床有效血药浓度(1~30 ng.mL 1)瑞芬太尼预处理对肝细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,而低浓度(0.5 ng.mL 1)和高浓度(≥40 ng.mL 1)瑞芬太尼预处理则无此作用。     

仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1增殖的抑制作用研究

目的 研究仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1增殖的抑制作用。方法 SRB法检测不同浓度仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3（仙鹤草水提液浓度：0.15,0.3,0.6,1.2,2.4,4.8 mg·mL^-1）和PANC-1（仙鹤草水提液浓度：0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0 mg·mL^-1）分别作用24,48,72 h后的增殖抑制率;流式细胞仪检测0.5,1,2 mg·mL^-1仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3周期分布的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测1,2,4,8 mg·mL^-1仙鹤草水提液对BXPC-3细胞凋亡的影响。结果 仙鹤草水提液可显著抑制BXPC-3和PANC-1细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性;仙鹤草水提液可显著增加BXPC-3细胞停滞在G1期的百分率,促进BXPC-3细胞的早期凋亡和晚期凋亡。结论 仙鹤草水提液可通过或部分通过诱导胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1的凋亡,抑制胰腺癌细胞的增殖,发挥抗胰腺癌作用。     

LC-MS测定大鼠脑脊液与血浆中西达本胺浓度及其药动学研究

目的建立快速检测SD大鼠脑脊液和血浆中西达本胺浓度的LC-MS测定方法,并应用于大鼠静脉注射西达本胺后的脑脊液和血浆中药动学研究。方法对建立的检测大鼠脑脊液和血浆中西达本胺浓度的LC-MS分析方法进行专属性、精密度、准确性、基质效应及稳定性等考察验证。♂SD大鼠12只,分为2组,每组6只,分别静脉注射给予西达本胺3,6 mg·kg^–1剂量,于给药后0.083,0.25,0.5,1,1.5,2,3 h采集脑脊液和血浆,采用LC-MS测定大鼠脑脊液和血浆中西达本胺的浓度变化,并利用DAS药动学软件拟合脑脊液和血浆中AUC、C_max、T_max、t_1/2等主要药动学参数,计算血脑屏障透过率。结果方法学研究显示,大鼠脑脊液中西达本胺线性范围为0.2～64 ng·mL^–1(r=0.999 0,定量下限为0.2 ng·mL^–1),血浆中西达本胺的线性范围为2～1 000 ng·mL^–1(r=0.999 1,定量下限为2 ng·mL^–1     

HPLC-MS/MS法测定人体色甘酸钠血浆浓度及其药代动力学研究

采用HPLC-MS/MS法测定人血浆中色甘酸钠浓度，进行其滴鼻液和鼻用喷雾剂的药代动力学研究并评价其生物等效性。采用高效液相分离系统，流动相为乙酸铵-甲醇(含50%乙腈)(15∶85)，固定相为AGT Venusil XBP C₁₈(250 mm×4.6 mm ID， 5 μm)色谱柱。采用质谱检测系统， ESI离子源， 正离子模式， 多级反应监测(MRM)方式， m/z 469→263.1(色甘酸钠)， m/z 447.2→327.1(内标，普伐他汀钠)。在0.3～20 ng·mL^-1色甘酸钠血药浓度呈线性关系， 定量限为0.3 ng·mL^-1， 回收率在94.1%以上， 日内日间的RSD均小于14.3%。单剂量给药色甘酸钠鼻用喷雾剂或滴鼻液， 其药代动力学参数T_1/2分别为(1.82±0.54)和(1.59±0.52) h； T_max分别为(0.47±0.12)和(0.44±0.15) h； C_max分别为(9.79±4.66)和(10.88±4.05) ng·mL^-1， AUC_{0-5 h}分别为(11.52±3.46)和(12.63±4.23) ng·mL^-1·h。色甘酸钠鼻用喷雾剂相对生物利用度F_r为(93.6±13.8)%。本法灵敏度高， 适用于色甘酸钠治疗药物监测及其药代动力学和生物利用度研究。