丹参酮生物合成相关SmERF108转录因子的鉴定及其靶基因分析＊

目的 鉴定与丹参酮合成相关转录因子AP2/ERF家族中SmERF108转录因子，并分析转录因子SmERF108的靶基因。方法 利用生物信息学在线分析平台如NCBI、PFAM等分析SmERF108的序列特征；MEGA-X软件用于构建SmERF108与不同功能转录因子的系统进化树；拟南芥原生质体转化法鉴定SmERF108蛋白的亚细胞定位；通过实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）对SmERF108基因在丹参不同器官和组织差异表达进行检测；利用酵母体系对SmERF108的转录激活活性进行探究并用酵母单杂技术确定其靶基因。结果 SmERF108具有典型的AP2/ERF保守结构域，属于ERF-B3亚组，系统进化树和保守基序分析显示SmERF108与丹参中SmERF128、青蒿中AaERF2亲缘关系较近且保守基序分布一致；亚细胞定位显示SmERF108蛋白定位于细胞核；SmERF108基因在周皮中表达最高，且呈现周皮（R1）>韧皮部（R2）>木质部（R3）的规律；酵母自激活验证SmERF108具有转录激活活性，同时酵母单杂交确认其能与关键酶基因SmCPS1启动子结合。结论 鉴定到丹参中一个新转录因子SmERF108，生物信息学分析及差异表达分析预测与丹参酮合成相关，分子互作初步证实靶基因为SmCPS1二萜环化酶。     

五味消毒饮联合西药治疗慢性宫颈炎合并高危型人乳头瘤病毒感染临床研究

目的:观察五味消毒饮联合西药治疗慢性宫颈炎合并高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的疗效及安全性。方法:将86例慢性宫颈炎合并HR-HPV感染(脾虚湿毒蕴结型)患者作为研究对象,随机分为观察组和对照组各43例。2组均以重组人干扰素α2b凝胶治疗,观察组加用五味消毒饮加减方治疗。2组均连续治疗7 d。治疗前后评定中医证候积分,检测T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6 (IL-6)]水平,对比2组治疗后的临床疗效、HR-HPV转阴率和随访6、12个月的感染复发率。结果:治疗后,观察组总有效率95.35%,对照组总有效率72.09%,2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。2组带下情况、外阴瘙痒或痛、小腹胀痛、舌红苔黄腻及脉滑数评分均较治疗前下降,观察组5项评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。2组T淋巴细胞亚群指标均较治疗前有所改善,观察组CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+值均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。2组IgG、IgM、IgA水平均较治疗前上升,观察组3项指标值均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。2组炎症因子TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均较治疗前下降,观察组3项指标值均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。观察组HR-HPV转阴率高于对照组(P0.01),随访6个月和12个月的感染复发率均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:五味消毒饮加减联合重组人干扰素α2b凝胶治疗慢性宫颈炎合并HR-HPV感染患者,可有效改善临床症状,提高免疫功能,增强抗感染力,减轻炎症反应,有利于预后。     

丹参F3'5'H基因克隆及其序列分析

目的:为了验证丹参类黄酮-3′,5′-羟基化酶(Flavonoid 3′,5′-hydroxylase,F3′5′H)基因与丹参花色表型的相关性,本研究克隆并分析了紫花丹参99-3株系和一些白花丹参中的F3′5′H基因。方法:本研究通过提取紫花丹参和白花丹参中的总RNA,再将其反转录得到cDNA,以此cDNA为模板,利用PCR方法扩增获得F3′5′H基因全长序列。再利用生物信息学分析方法,分析了该基因编码蛋白质的理化性状、结构域、系统进化等特点,并预测了该蛋白质的亚细胞定位、跨膜区等;利用实时定量PCR方法检测了该基因的表达特异性;利用毛状根遗传转化方法获得了该基因的过表达阳性毛状根株系。结果:F3′5′H基因全长1551 bp,编码516个氨基酸,相对分子质量为57.4 kDa。该基因在丹参花中高丰度表达。在42份(紫花25份;白花17份)丹参样品中发现一个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点在紫花和白花丹参中呈现与花色相关的稳定变化。系统发育分析表明丹参F3′5′H与美女樱的F3′5′H具有较高序列同源性。获得了过表达F3′5′H的毛状根株系。结论:本研究在丹参中克隆到F3′5′H基因,对其序列进行了分析,为进一步研究丹参F3′5′H基因的功能奠定基础。     

五味消毒饮加减联合地红霉素治疗寻常性痤疮45例临床观察

目的:观察五味消毒饮加减联合地红霉素治疗寻常性痤疮的临床疗效。方法:将寻常性痤疮患者90例随机分成2组,每组各45例。对照组予地红霉素治疗,治疗组在对照组基础上联合五味消毒饮加减治疗。观察2组患者治疗2、4、6周后的皮损减少率,3个月后随访,观察2组复发率。结果:治疗组治疗2、4、6周后的总有效率分别为66.67%(30/45)、80.00%(36/45)、95.56%(43/45),对照组分别为35.56%(16/45)、55.56%(25/45)、86.67%(39/45),2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);3个月后随访,治疗组复发率低于对照组,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:五味消毒饮加减联合地红霉素治疗寻常性痤疮疗效较好,可降低复发率,安全性良好。     

益气通脉饮联合西药治疗气虚血瘀型冠心病心绞痛90例临床疗效观察

目的:探讨益气通脉饮治疗气虚血瘀型冠心病心绞痛的临床疗效。方法:选取2017年10月—2019年2月烟台业达医院收治的气虚血瘀型冠心病心绞痛的患者90例作为研究对象,根据随机数字表法将所选患者均分为两组,每组各45例,两组的一般资料经统计学方法,差异无统计学意义(P>0.05),因此具有可比性。对照组给予常规西药进行治疗,观察组在对照组治疗基础上给予益气通脉饮治疗,1个月后比较两组临床的疗效,评估治疗前后中医证候、心绞痛症状分级和血脂水平。临床检测的数据通过统计产品与服务解决方案(Statistical Product and Service Solutions,SPSS) 19.0软件进行分析和处理,计量的数据使用平均数±标准差(x±s)表示,采用双侧t检验,计数的数据采用χ~2检验,以%表示,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:治疗后,对照组和观察组都有一定疗效,但观察组的改善中医证候总有效率95.56%(43/45),高于对照组的82.22%(37/45),两组比较具有统计学意义(P<0.05);心绞痛的症状总有效率观察组为93.33%(42/45),对照组为77.78%(35/45),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);与治疗前相比较,两组治疗后的三酰甘油(Triglyceride,TG)、血清总胆固醇(Serum Total Cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(High Density Liptein Cholesterol,HDL-C)水平均降低(P<0.05),且观察组治疗后低于对照组(P<0.05),两组治疗后的HDL-C升高(P<0.05),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益气通脉饮治疗气虚血瘀型冠心病心绞痛的疗效显著,值得临床进一步研究与推广应用。     

利用聚多巴胺制备丹参注射液缓释制剂的研究

目的:利用聚多巴胺(PDA)对丹参注射液中多成分进行负载,构建丹参注射液(SMI)缓释制剂(PDA-SMI)。方法:建立丹参注射液的原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B3种成分的分析方法并进行含量测定;制备PDA,在pH值2.5的条件下对SMI进行负载,制备PDA-SMI;对PDA-SMI体外释放行为进行考察。结果:SMI中原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的浓度分别为0.344、0.214、0.262 mg/mL;PDA-SMI对原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的载药量分别为8.59%,15.90%和20.57%;PDA-SMI中原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B体外累计释放率分别为84.05%,77.57%和63.12%。结论:PDA可以负载SMI的多种成分,载药量较高,并具有良好的缓释效应。