T24-多柔比星原位膀胱癌多药耐药模型的建立及检测

 目的　建立T24-多柔比星（ADM）模拟人类原位膀胱癌多药耐药模型并行耐药性检测。方法　采用细胞移植法将T24-ADM耐药株及T24细胞敏感株移植到两组裸鼠膀胱后定期观察其一般情况。28 d后处死裸鼠,称成瘤膀胱质量、测体积,行组织病理学和细胞学检测,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测多药耐药基因-1（MDR-1）的表达,MTT法测瘤组织制成的细胞悬液耐药性。结果　T24-ADM组及T24组裸鼠膀胱的成瘤率分别为80 %（8／10）和90 %（9／10）,成瘤膀胱平均体质量和体积分别为 （0.8±0.3）g、（1.0±0.5）g、（875±158）mm3、（903±192）mm3,组间比较差异均无统计学意义（t＝1.332和t＝1.215,P＞0.05）。组织病理学：T24-ADM组4只出现右肾增大,T24组2只出现右肾增大,1.0 cm×1.8 cm,色暗灰到暗红。膀胱肿瘤组织切片细胞结构排列较乱,形态不规则,向肌层不同深度浸润,未突破浆膜层,两组间差异不明显。RT-PCR测MDR-1表达两组间差异有统计学意义（t＝3.612,P＜0.01）。MTT检测T24-ADM组裸鼠肿瘤细胞较T24组对ADM有明显的耐药性,差异有统计学意义（F＝412.107,P＜0.01）,且对其他几种药物也有耐药性,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　细胞移植法成功建立了T24-ADM原位膀胱癌耐药模型,并具有多药耐药特性。     

多药耐药膀胱癌T24/ADM细胞内阿霉素分布变化与其耐药性的关系

目的了解化疗药物阿霉素(adriamycin,ADM)在人类多药耐药膀胱癌T24/ADM细胞内的分布变化与耐药的关系及维拉帕米(verapamil,Ver)对其的调节作用。方法MTT法检测癌T24/ADM细胞对ADM的敏感性及Ver的耐药逆转作用,用共聚焦显微镜观察分析ADM在细胞内的分布变化,以及Ver对其影响。结果T24/ADM细胞对ADM具有明显耐受性,Ver可以部分逆转T24/ADM对ADM的耐受性。ADM在T24/ADM细胞及其对应的敏感T24细胞内均主要集中分布于细胞质中,而细胞核内较少。与T24细胞相比,T24/ADM细胞核及细胞质中ADM浓度均较低。ADM联合Ver应用后只明显增加T24/ADM细胞质内ADM的浓度,对其细胞核内ADM浓度影响很小,而对T24细胞无影响。结论ADM在T24/ADM细胞内的异常分布与肿瘤细胞耐药性的形成有关。     

两种破坏粘膜的方法对原位膀胱癌模型建立的影响

目的比较两种不同的膀胱粘膜损伤方法对细胞移植法原位膀胱癌模型建立的影响及优缺点。方法4～6周龄裸鼠两组,每组10只。麻醉后经尿道置入膀胱静脉留置针,导尿后一组注入100ul10％胰酶保留30min,另一组注入100ul0．1mol·L^-1Hcl15s．PBS冲洗后将浓度为1×10^7L^-1L。的人膀胱癌T24细胞悬液注入两组鼠膀胱保留1～2h。另设一组5只导尿冲洗后直接注入细胞保留1～2h。定期观察裸鼠一般情况。28d后断颈处死,解剖观察膀胱成瘤及转移情况,并取膀胱及可疑肾脏行病理学检查。结果胰酶破坏组到2w有2只间断出现淡红色血尿,下腹肿块不明显。到28d后处死,肉眼2只成瘤,约占膀胱50％以上。病理检查证实成瘤2只,多局限于粘膜,未突破肌层。盐酸破坏组约12d开始出现血尿,其中4只可及下腹肿块,2只于2d死亡。到28d处死．共8只大体成瘤,2只见右肾肿大。病理检查示8只成瘤,细胞结构紊乱,未突破浆膜层,两只肾转移。未行粘膜破坏组无明显变化,也无瘤形成。结论胰酶破坏膀胱粘膜对动物损伤轻,但成瘤率低;盐酸破坏粘膜对动物损伤稍大,但成瘤率满意,在细胞移植法建立原位膀胱癌模型可明显提高成瘤率。