采用MALDI-TOF MS和全基因组测序鉴定和分析动弯杆菌属及其亲缘关系北大核心CSCD

目的用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术结合16S rRNA基因测序鉴定动弯杆菌,并通过全基因组测序分析动弯杆菌的耐药基因及该菌属种间亲缘关系。方法将65例细菌性阴道病（bacterial vaginosis,BV）患者的阴道分泌物标本厌氧培养获得25株动弯杆菌,采用MALDI-TOF MS及16S rRNA基因测序鉴定细菌种属,并提取细菌全基因组DNA进行二代测序,测序后得到的原始数据根据SPAdes软件进行拼接组装,并与ARGD耐药基因库比对得到这些细菌含有的获得性耐药基因,最后通过Harvest软件对所有菌株进行核心基因组多样性比较,构建进化树。结果采用MALDI-TOF MS鉴定动弯杆菌属仅能获得柯氏动弯杆菌的鉴定结果;采用16S rRNA基因测序能将动弯杆菌属菌株区分为柯氏动弯杆菌和羞怯动弯杆菌;全基因组分析显示动弯杆菌主要含有四环素耐药基因tet（o）及大环内酯类耐药基因erm（x）,其中tet（o）基因的检出率为84.7%,erm（x）基因的检出率为61.5%;动弯杆菌属两个种内亲缘关系相近,种间亲缘关系甚远。结论本实验结果表明目前MALDI-TOF MS不能鉴定出动弯杆菌属中的羞怯动弯杆菌;动弯杆菌对四环素类及大环内酯类抗生素具有潜在的耐药性;动弯杆菌在种内进化缓慢,暂无新种出现的趋势。     

甘油浓度对红细胞冻干保存效果的影响

目的探讨甘油浓度浓度对红细胞冷冻干燥保存的回收率、溶血率及残余水含量的关系。方法以甘油浓度分别为3%、6%、9%、12%、15%、18%、21%(w/v)的冻干保护剂处理红细胞,冻干,用显微镜观察细胞形态、血细胞计数仪检测细胞数、分光光度计测定游离血红蛋白量,分析细胞复水后红细胞计数、溶血情况。用热重法测定冻干红细胞水分含量,分析不同保护剂组红细胞的水分含量变化情况。结果复水后红细胞形态正常,甘油浓度为9%、12%、15%时,红细胞回收率分别为(77.08±9.41)%、(84.37±3.42)%、(80.21±9.20)%,红细胞溶血率分别为(19.82±2.23)%、(17.66±1.17)%、(15.86±2.23)%,相应的冻干红细胞残余水分含量为(19.43±1.36)%、(22.89±1.57)%、(26.17±1.09)%。结论保护剂中甘油浓度影响红细胞冻干保存的效果;甘油浓度为(9-15)%时对冻干保存的红细胞损伤较小;冻干红细胞残余水分含量随保护剂中甘油浓度的增高而增高。     

基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱仪快速鉴别甲氧西林耐药和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌的研究

目的：分析基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱仪（ matrix-assisted laser desorption／ionization time-of-flight mass spectrometry , MALDI-TOF MS）快速鉴别甲氧西林耐药和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌。方法收集浙江大学医学院附属第二医院已保存的临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）25株和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）30株用于模型的建立。同时选取34株临床分离株（12株MRSA和22株MSSA）用做模型验证菌株。 MALDI-TOF MS对所有菌株进行鉴定,ClinProTools 3．0软件对MALDI-TOF MS鉴定细菌所产生的质谱峰图进行分析。结果 ClinPro-Tools软件的4种算法所得出的结果基本一致,灵敏度均大于95．0％,其中遗传算法（GA）的灵敏度最高（100．0％）;除监督式神经网络算法（ SNN）外,其余3种算法的特异性均大于90．0％。质荷比为3279、6485、6555和3299 m／z的质谱峰是用于区分MRSA和MSSA的最为主要的特征性峰。受试者工作特征曲线（ ROC）显示,这4个特征性峰的曲线下面积（ AUC）均大于0．9;凝胶浏览图显示,MSSA组的3279、6485、6555 m／z峰的蛋白强度高于MRSA组,而3299 m／z峰的蛋白强度低于MRSA组。外部验证显示,GA模型对MRSA组的准确鉴定率为83．3％,对MSSA组的准确鉴定率为90．9％。结论在严格控制实验条件的情况下,MALDI-TOF MS可快速准确地鉴别MRSA和MSSA,具有耗时短,灵敏性高,特异性高的优点。准确鉴定的同时区分MRSA和MSSA,尽早为临床防治MRSA提供参考依据,限制其传播及暴发流行。     

MALDI-TOF MS在中段尿样本细菌直接检测中的应用

目的运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定系统对中段尿样本中的细菌进行直接快速检测,以建立快速的细菌检测方法便于临床应用。方法 692例中段尿样本接种于固体培养基上,利用MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对单个菌落进行鉴定;同时对尿液样本进行前处理后直接进行质谱分析。结果 692例中段尿样本中,98例单一菌感染且细菌数104CFU/m L的样本应用MALDI-TOF MS直接检测出74株菌,检出率达75.5%,其中大肠埃希菌39株,检出率达79.6%;粪肠球菌23株,检出率为100.0%;摩根摩根菌5株,检出率为100.0%。64例样本为2种菌混合感染,采用MALDI-TOF MS直接检测出44例样本中的1种优势细菌。质谱直接检测尿液的鉴定结果与单菌落质谱鉴定结果及Vitek 2 Compact鉴定结果完全一致,符合率为100.0%。结论 MALDI-TOF MS可用于直接检测尿液样本中的细菌,检出率高,结果可靠;MALDI-TOF MS对混合菌感染的样本有一定鉴定能力;该方法可比常规尿培养鉴定方法提早42 h报告鉴定结果,是对临床尿液样本细菌鉴定的一大革命性进步。     

临床重要耐药菌感染传播防控策略专家共识

耐药菌的传播严重威胁人类健康,目前耐药问题日益加剧,给医疗卫生造成极大负担。加强耐药菌感染的预防、控制和诊疗能力建设是医疗机构防控耐药菌感染传播的重要内容。本共识分析当前临床重要耐药菌的流行病学、耐药机制及实验室检测现状,并提出耐药菌感染传播防控的专家推荐意见,旨在提高防控意识,规范临床重要耐药菌感染传播防控策略,明确防控流程。     

非淋菌性宫颈炎174例临床分析

目的探讨非淋菌性宫颈炎的诊断和治疗。方法对2009年9月～2010年3月174例非淋菌性宫颈炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果 174例中支原体感染76例,占43.68;沙眼衣原体感染42例,占24.14;两者混合感染56例,占32.18;大多数患者宫颈口有白色稀薄分泌物流出,94例有宫颈管接触性出血,占54.02;阿奇霉素治愈率65.52;多西环素联合阿奇霉素治愈率86.21%。结论对久治不愈的妇科炎症患者其宫颈口有白色稀薄分泌物流出及颈管内触血者,应行支原体、衣原体检测,尽早明确诊断。治疗药物是多西环素联合阿齐霉素优于单一阿奇霉素。     

摩根摩根菌中质粒介导KPC-2型碳青霉烯酶的检测

目的 研究碳青霉烯耐药摩根摩根菌的分子流行病学及其耐药机制.方法 2010年10月-2011年2月从杭州市中医院分离到7株碳青霉烯不敏感的摩根摩根菌.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株之间的同源性;琼脂稀释法测定抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC);接合试验、质粒图谱分析、特异性PCR扩增和序列分析等研究细菌对碳青霉烯耐药的分子机制.结果 分离自急诊监护病房的6株摩根摩根菌PFGE条带完全相同或相差1～3个条带;分离自重症监护病房的1株摩根摩根菌与其他6株PFGE条带差异明显.7株摩根摩根菌的耐药模式基本相同.亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC值差异较大,分别为8μg/ml(耐药)、1μg/ml(敏感)和0.25～0.50μg/ml(敏感或中介耐药).7株摩根摩根菌对青霉素类、氨曲南和环丙沙星耐药,对头孢菌素类耐药或敏感,对阿米卡星敏感.接合试验使大肠埃希菌EC600对碳青霉烯类抗生素由敏感变为耐药,对其他β-内酰胺类抗生素也均耐药.摩根摩根菌及转移接合子均含有一个约为60kb的质粒.PCR扩增及测序表明摩根摩根菌及转移接合子均产KPC-2型碳青霉烯酶,且携带qnrS1基因.结论 首次在摩根摩根菌中检测到KPC-2型碳青霉烯酶,KPC-2是引起摩根摩根菌对碳青霉烯类不敏感的主要原因.     

神经内分泌肿瘤的诊断研究进展

近年神经内分泌肿瘤（NET）的诊断率不断增高,NET也越来越被重视.NET的诊断主要依靠肿瘤的组织学特征和神经内分泌特征（NSE、Cyn、CgA等神经内分泌标记物,24 h尿液5-HIAA,电镜下神经内分泌颗粒等）.B超、CT、MRI、核医学扫描可定位肿瘤原发灶以及转移灶,不同的影像技术可在各部位NET的诊断中发挥不同的优势.     

经鼻-蝶入路垂体瘤切除术中配合的体会

垂体瘤是一种常见的生长缓慢的颅内良性肿瘤。垂体瘤的手术途径大体可分为经颅垂体瘤切除和经蝶垂体瘤切除两种。随着显微外科的发展,显微镜下经鼻蝶窦入路垂体瘤切除术被认为既能切除肿瘤又能完好保存垂体功能,手术和麻醉时间短、并发症少、不良反应少、恢复快、死亡率低,所以经单鼻腔蝶窦入路垂体瘤切除是目前国内外治疗垂体瘤的首选方法,收集自2002-02～2010-03对25例垂体瘤经鼻-蝶入路手术切除效果满意,现将手术中配合报告如下。     

鼻咽非霍奇金淋巴瘤的MRI表现与侵犯特点

目的 探讨鼻咽非霍奇金淋巴瘤(NHL)的MRI表现特征及鉴别诊断.方法 回顾性分析41例经病理证实的鼻咽NHL的MRI表现.评价病灶的大小、分布、侵犯范围及淋巴结累及情况.对B细胞型和T或NK/T细胞型2组NHL的侵犯生长方式比较采用Fisher确切概率法或Pearson卡方检验.结果 41例患者中,成熟B淋巴细胞肿瘤26例,成熟T淋巴细胞肿瘤2例,NK/T细胞瘤13例.病灶以鼻咽黏膜增厚或形成软组织肿块为主要表现,在T2WI上呈稍高信号,T1WI呈等信号,增强后均匀轻到中度强化.均匀累及鼻咽各壁24例,伴溃疡形成5例,超腔生长9例,累及舌或腭扁桃体共23例,邻近肌肉受侵20例,颅底骨质破坏12例.41例患者中,25例合并咽后淋巴结受侵,27例合并颈部淋巴结受侵.NK/T淋巴细胞型鼻咽NHL更易超腔生长、咽旁结构侵犯、溃疡形成(T或NK/T淋巴细胞型鼻咽NHL分别为8、11、4例,B淋巴细胞型鼻咽NHL分别为4、10、1例),B淋巴细胞型鼻咽NHL扁桃体侵犯更常见(B淋巴细胞型鼻咽NHL为18例,NK/T淋巴细胞型鼻咽NHL为5例).结论 鼻咽NHL在MRI上表现具有一些特点,鼻咽各壁均匀增厚多见,常累及鼻腔或扁桃体,当肿瘤体积较大但没有或仅有少许深度侵犯时要考虑NHL.不同病理类型鼻咽NHL其MRI表现有一定差异.

Abstract：

Objective To characterize the features of Nasopharyngeal non-Hodgkin's lymphoma (NHL) on MR imaging and find the main points to differentiate it from the other nasopharyngeal tumors.Methods The MR images of 41 patients with pathologically and immunohistochemically proven nasopharyngeal NHLs were reviewed retrospectively. Images were assessed by the size, invasive extent,signal intensity of primary nasopharyngeal tumor, and the distribution of cervical lymphadenopethy. The difference of regional tissues invasion and cervical lymphadenopathy distribution between the patients with B-cell NHLs and the patients with T-cell or NK/T-cell NHLs were analyzed by Pearson's Chi-Square test or Fisher's exact test Results Of the 41 patients, 26 patients had mature B-cell lymphoma, two patients with mature T-cell Iymphoma, and thirteen patients showed Nature killer/T-cell lymphoma in nasopharynx. MRI revealed that NHLs of nasopharynx can be showed as thickening of nasopharyngeal mucosa and (or) lumps in nasopharynx, which were slightly hyper-intensity on T2-weighted images, and intermediate signal intensity (similar to muscle) on T1 -weighted images, with mild or moderated enhancement following contrast medium administration. Twenty four cases had symmetrical disease of all walls of nasopharynx, and 17 cases had unsymmetrical tumor. Of all cases, 5 cases had superficial ulcerations, 9 cases had exceed nasoharynx invasion spreads superficially along the mucosa, 23 cases had invasion of lingual and (or) palatine tonsils,20 cases showed invasion of parapharygeal muscles, 12 cases suffered from skull base bone infiltration,25 cases had retropaharyngeal lymphadenopathy, and 27 cases had cervical lymhadenopathy. Patient with nasopharyngeal Nature killer/T-cell lymphoma had a higher incidence of exceed nasopharynx invasion,parapharyngeal structures invasion, and superficial ulcerations (the cases were 8, 11, 4 in patient with T-cell or N K/T-cell lymphoma, and 4, 10, 1 in patients with B-cell lymphoma, respectively). Patients with nasopharyngeal B-cell lymphoma had a higher incidence of inasion of lingual and (or) palatine tonsils.Conclusions Nasopharyngeal NHL is a homogeneous tumor that tends to diffusely involve all walls of the nasopharynx and spread in an exophytic fashion to fill the airway, rather than infiltrating into the deep tissues. Different pathological types of nasopharyngeal NHLs have some different appearance on MRI between each other. A large tumor in nasopharynx that fills the nasopharynx cavity, with no or minimal invasion into deep structures, but with invasion extend down into the lingual and(or)palatine tonsils, may suggest the diagnosis of nasopharyneal NHL.