| 人胰岛素样生长因子在pET-DsbA载体中的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 陈德珩,李体远,朱莹,刘争红,毕晓,黄瑞芳,戴勇.人胰岛素样生长因子在pET-DsbA载体中的克隆及表达[J].北京生物医学工程,2006,25(4):420-422,444. |
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| 作者姓名： | 陈德珩 李体远 朱莹 刘争红 毕晓 黄瑞芳 戴勇 |
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| 作者单位： | 暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院,广东,深圳,518020;暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院,广东,深圳,518020;暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院,广东,深圳,518020;暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院,广东,深圳,518020;暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院,广东,深圳,518020;暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院,广东,深圳,518020;暨南大学医学院第二附属医院-深圳市人民医院,广东,深圳,518020 |
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| 基金项目： | 广东省深圳市科技局科研项目 |
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| 摘 要： | 目的 通过重组技术,对胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因进行缺失、突变以获得最有利于高水平表达的IGF-Ⅰ cDNA.构建原核表达载体,并进行表达,以获得能够高水平表达高活性产物的基因工程菌珠.方法 提取人肝脏组织总RNA,RT-PCR后琼脂糖电泳初步鉴定产物.将cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对IGF-Ⅰ基因进行序列分析.采用PCR法从克隆质粒中扩增IGF-Ⅰ片段,亚克隆至pET-DsbA原核表达载体,酶切鉴定,并进行序列测定.转化到大肠杆菌BL21(DE3)PLysS中,IPTG诱导表达,聚丙稀酰胺凝胶电泳、Western Blot分析目的蛋白.结果 成功构建原核表达载体pET-DsbA-IGF-Ⅰ,测序结果与预期序列完全一致,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达出IGF-Ⅰ融合蛋白.结论 IGF-Ⅰ融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) PLysS中的表达,对进一步研究IGF-Ⅰ的功能及开发其生物制品具有重要意义.
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| 关 键 词： | 胰岛素样生长因子 融合蛋白 表达 |
| 文章编号： | 1002-3208（2006）04-0420-03 |
| 收稿时间： | 2005-09-26 |
| 修稿时间： | 2005-09-26 |
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