基于DNA条形码-产地-形态联用的药材溯源新方法研究——以黑果枸杞1种伪品为例

利用NCBI核酸数据库中ITS (internal transcribed spacer) 序列, 结合产地分析和形态分析对新发现的一种黑果枸杞混伪品进行溯源研究。通过提取样品DNA, PCR扩增及双向测序, 获得样品的ITS序列。所得序列用ContingExpress软件进行拼接, 截取ITS序列全长;利用 NCBI核酸数据库中已登录的ITS序列进行相似度分析对其进行DNA条码溯源;根据其产地分析DNA条形码溯源结果;再根据形态特征进一步验证结果, 3种方法联用获得溯源结果。新发现的黑果枸杞混伪品来源于小檗科小檗属植物喀什小檗Berberis kaschgarica。与黑果枸杞的主要区别:喀什小檗果实表面平滑, 质地轻脆, 黑果枸杞表面皱缩, 质地坚实而硬;喀什小檗外果皮细胞壁连珠状增厚, 石细胞壁平直, 层纹不明显, 黑果枸杞外果皮细胞壁不增厚, 石细胞壁波浪状, 层纹明显;喀什小檗的ITS序列长度为606 bp, 黑果枸杞的长度为654 bp, 二者序列对齐后的相似度为53.32%。     

基于叶绿体rbc L序列扩增的天南星药材及其常见混伪品的分子鉴定研究

目的利用DNA条形码技术,基于叶绿体核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶大亚基(Ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase-oxygenase large subunit,rbc L)基因序列对天南星药材及其常见混伪品进行鉴定,为天南星药材的真伪鉴定和质量评价提供新的技术依据。方法从市场收集天南星药材及其常见混伪品共计13份,采用广谱植物基因组DNA快速提取试剂盒进行DNA提取,基于rbc L序列选择引物进行PCR,扩增产物进行测序分析。此外,从GenBank数据库下载天南星药材及其常见混伪品的rbc L序列,采用DNAMAN、Editseq、MEGA5.0等分析软件对所得数据进行处理分析,通过计算种间、种内的Kimura 2-parameter(K2-P)遗传距离及构建Neighbor-joining(N-J)系统聚类树对不同样品进行鉴定。结果13份样品中除1份扩增失败外其余均扩增成功。对rbc L引物扩增序列进行分析,结果显示样本中最大种内遗传距离为0.2%,样本种间遗传距离为0.3%~9.2%,中药天南星的正品来源天南星、异叶天南星、东北天南星种间遗传距离相对较小,天南星属与菖蒲属种间遗传距离最大。不同样本之间存在变异位点56处,且构建N-J系统聚类树结果显示同种样本序列严格聚为一支。结论rbc L引物对天南星药材及其混伪品鉴别效率高,结果准确,可用于市售天南星及其混伪品鉴别。     

浅析京帮炮制技术传承与发展

京帮炮制是全国主流炮制流派之一,是根据北京地区临床用药需求和区域用药习惯所形成的独具特色的炮制技术体系。从炮制理论和方法、饮片品种和规格、炮制辅料、炮制工艺方面对京帮炮制技术传统特色进行总结。从挖掘整理京帮炮制理论、搭建传承与开发研究平台、开展京帮炮制理论体系研究、建立科学的质量评价模式的角度为京帮炮制技术的传承创新再发展提供思路。     

北京地区传统中药饮片特色品种初探

目的:整理北京地区传统特色中药饮片资源,挖掘特色中药饮片品种,进而抢救具有京都特色的炮制方法及技艺,促进特色传统炮制品的传承与创新。方法:通过文献检索、分析对比的方法,从北京地区传统中医用药、中药资源、炮制方法、地方标准等方面总结北京地区特色中药饮片资源和品种。结果:根据不同特点整理了北京地区140种具有传统特色的中药饮片。结论:北京地区传统中药饮片地方特色鲜明,文化底蕴深厚,对其整理、传承利于中药传统炮制技术继承吸收和创新推广,利于增强中药饮片服务临床功能,为中医临床新药开发提供依据。     

试论京帮炮制技术的形成与特色

通过文献检索、走访调查及现存资料整理,分析京帮炮制技术形成背景、挖掘京帮炮制技术特色。从药业发展、宫廷文化、社会精细化分工等方面分析得出京帮炮制技术形成有着独特的历史背景和鲜明的地域特色,其具有切工精湛、方法多样、因时制宜、善用辅料的技术特色。通过对其整理、挖掘,可以为中药炮制技术的继承、创新、发展、推广提供参考。     

脱落酸对甘草化学成分含量和颜色的影响

该试验拟以栽培甘草为材料,不同浓度ABA叶面喷施,5个时间点取样,研究ABA对甘草化学成分含量和颜色的影响.结果发现,ABA施加后甘草45 d内甘草酸、甘草苷的含量均有一定程度的提高,以甘草苷含量变化更为显著.其中高浓度ABA(3.96 mg·L^-1)施加使得甘草酸的质量分数30 d内从(1.099±0.108)%上升至(1.665±0.319)%,上升幅度为52%;甘草苷的质量分数30 d内从(0.353±0.090)%上升至(1.738±0.428)%,上升幅度为392%,二者均在45 d时有明显的下降趋势.高浓度ABA(3.96 mg·L^-1)施加后45 d内甘草粉末的颜色指标a^*,b^*较对照组有显著的升高,即甘草粉末色泽加深,偏红黄两色.由此得出结论为高浓度ABA(3.96 mg·L^-1)叶面施加不仅能够提高以颜色为指标传统认知上的质量,又能提高以甘草酸、甘草苷含量为指标现代认知上的质量.     

基于trnL-trnF序列的人参和西洋参DNA条形码鉴定研究

探讨trnL-trnF序列的相似度、特异位点、遗传距离和系统发育树这4个分子鉴定指标对人参和西洋参药材的鉴定能力,优化人参和西洋参分子鉴定指标。从人参和西洋参药材中提取DNA,以trnL-trnF通用引物进行扩增测序,利用NCBI数据库中的BLAST功能计算相似度,利用DNAman软件比较特异位点,利用Mega软件计算遗传距离,构建系统发育树。结果表明,人参和西洋参的种内相似度均为100%,种间相似度为99.6%;人参和西洋参分别在G153A,T463A,C732G,T818C有特异位点;种内遗传距离(0)小于种间遗传距离(0.004);系统发育树中人参和西洋参均分为2个单系分支。因此,利用trnL-trnF序列,相似度、特异位点、遗传距离和系统发育树指标均可以区分人参和西洋参。综合分析,trnL-trnF序列的G153A,T463A,C732G,T818C特异位点指标是人参和西洋参的最佳鉴定指标。