牛磺酸对大鼠力竭运动后肝组织自由基损伤的对抗作用

以大鼠力竭运动为模型 ,观察牛磺酸对肝脏组织丙二醛 (MDA)含量、谷胱甘肽 (GSH)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)和血清谷丙转氨酶 (GPT)的影响。结果显示 :力竭运动后大鼠肝组织MDA含量和血清GPT活性显著上升 ,肝组织GSH含量和SOD活性显著下降 ,而牛磺酸可显著地抑制力竭运动后大鼠肝组织MDA和血清GPT的升高以及肝组织中GSH含量和SOD活性的下降。提示牛磺酸对肝组织具有直接抗氧化损伤的作用。     

T4 DNA连接酶介导的5'RACE法克隆大鼠Nor1全长cDNA

目的:克隆75AEST全长cDNA序列。方法:抽提在25mmol/LKCl条件下培养7d的大鼠小脑颗粒神经元的总RNA后,用DNA连接酶介导的5'RACE法克隆75A表达序列标签(EST)cDNA5'端未知序列,其产物亚克隆到pGEM-Teasy后进行序列测定以及同源性分性。结果:首轮5'RACE扩增出2.5kb序列后,75AEST鉴定为神经来源孤儿受体1(Nor1)基因的部分序列;再经过二次轮5'RACE,我们首次克隆Nor-1的全长cDNA序列。结论:T₄DNA连接酶介导的5'RACE是一种效率较高的克隆mRNA5'端未知序列的好方法,为进一步研究Nor1在小脑颗粒神经元存活或分化过程中的作用奠定基础。     

压力及维生素B1作用下视网膜神经细胞p53、MDM2及Ref1基因的表达

目的:探讨压力及压力加维生素B1联合作用下SD大鼠视网膜神经细胞p53、MDM2及Ref1基因的表达情况。方法:新生SD大鼠视网膜神经细胞体外培养,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况,细胞分单纯加压组、实验加压组(加入维生素B1)及未加压对照组,于加压后2 d(培养第9~10天)行苔盼兰染色检查计数细胞成活率,p53免疫组化检查并提取细胞总RNA,用逆转录聚合酶链反应法检测p53、MDM2及Ref1基因的表达。结果:单纯压力组p53／MDM2基因的表达较正常未加压组增强,Ref1基因表达无增强;而维生素B1作用后的加压组,其p53／MDM2基因的表达较单纯加压组明显减弱。结论:压力作用下视网膜神经细胞的损害有凋亡机制参与,维生素B1对压力作用下视网膜神经细胞具有保护作用。     

大鼠神经元Arnt2基因cDNA序列的分析

目的 克隆并分析神经元凋亡差异表达5号EST全长cDNA。方法 以大鼠大脑Marathon Ready cDNA为模板，采用SMART RACE技术克隆神经元凋亡差异表达5号EST全长cDNA，产物亚克隆刘pGEM-T easy质粒载体后进行序列测定以及同源性分析。结果 经过3次5’RACE扩增，得到的5号EST cDNA长度为5663bp，其中包含1个2136bp的完整的开放读码框序列，与已知大鼠基因芳香烃受体核转位因子2（Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator2，Arnt2）完全同源：该cDNA 3’瑞非编码区长达3323bp，包含3个AATAAA加尾信号和1个由12个腺嘌呤核苷酸组成的polyA序列。结论 5号EST目标基因为大鼠基因Arnt2，该基因3’端完整的非编码区cDNA序列为首次报道。神经元凋亡差异表达基因Arnt2的克隆鉴定为深入研究小脑颗粒神经元低钾性凋亡机制奠定了基础。     

小脑颗粒神经元凋亡差异表达基因的分离克隆研究

目的筛选分离低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡的差异表达基因。方法采用低钾处理的小脑颗粒细胞,抽提细胞总RNA,用荧光法mRNA差异显示技术分离差异表达基因,并对差异表达基因片段进行回收、克隆,经反向RNA印迹及RT鄄PCR技术验证。结果发现51条差异片段,成功克隆8个片段,其中2个未知功能的基因片段证实在低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡中表达增加。结论mRNA差异显示法是分离差异表达基因的一个良好的工具,分离出的差异基因与神经细胞凋亡有关。     

抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析

目的以重组人碱性成纤维细胞生长因子为抗原免疫小鼠,建立多株稳定分泌bFGF单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.并对bFGF单克隆抗体(McAb)可变区基因进行扩增及序列分析.方法采用Western blot法和免疫沉淀法对抗体特异性和Ig类型进行鉴定,同时,应用分子生物学技术,对Vk基因的DNA片段进行克隆,并对4a2Vk基因进行序列测定.结果bFGF单克隆抗体可特异性结合人重组bFGF抗原,且均为IgM.由杂交瘤4a2、3d3细胞株扩增Vk基因是由330个碱基组成,编码110个氨基酸残基.通过国际联机检索进行EMBL和Kabat基因库扫描发现,4a2VkDNA仅与Ig同源,符合小鼠Ig的Vk基因特征;同源性为90%～98%,应归属于Ig的Vk基因.结论杂交瘤4a2、3d3细胞株可稳定分泌bFGF单克隆抗体,并获得其轻链可变区基因,为进一步构建和表达单链Fv(ScFv)抗体打下良好的基础.     

人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达及活性研究

目的:表达人内皮抑素蛋白,制备多克隆抗体,检测其生物学活性。方法:采用PCR法扩增人内皮抑素基因,构建pGEX-ES融合表达载体,IPTG(异丙基硫代-β-D半乳糖苷)诱导表达。初步纯化的内皮抑素包含体蛋白制备兔多克隆抗体,Western-blot检测其在小鼠肝、肾等的表达。亲和纯化的内皮抑素蛋白用内皮细胞抑制实验检测其生物学活性。结果:诱导表达的人内皮抑素蛋白经凝血酶酶切后,分子量约为 20kD,具有抑制内皮细胞生长的活性。制备的多克隆抗体检测出内皮抑素在小鼠肝、肾等组织的表达。结论:人内皮抑素的成功表达及抗体制备为抗血管生成治疗实体瘤的研究及检测奠定实验基础.     

“低钾”诱导神经元凋亡过程中ARNT2上调表达的分析

目的：观察“低钾”诱导大鼠神经元凋亡过程中ARNT2的表达变化，探讨ARNT2与神经元凋亡的关系。 方法： 建立“低钾”诱导神经元凋亡模型，应用RT-PCR分析ARNT2在凋亡过程中mRNA的表达变化，Western blotting分析蛋白质的表达变化，间接免疫荧光与激光共聚焦确定亚细胞定位。 结果： “低钾”诱导30 min后大鼠小脑颗粒神经元ARNT2 mRNA表达水平即明显上调，1h后上调表达最明显，并持续至“低钾”诱导后12 h左右，ARNT2蛋白质水平的表达变化与 mRNA水平的表达变化相似，免疫荧光结合激光共聚焦分析显示ARNT2蛋白定位于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内。 结论： ARNT2分布于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内，在“低钾”诱导的凋亡过程中ARNT2 mRNA与蛋白均上调表达。     

黄牛奶树根的三萜酸类成分研究

目的研究黄牛奶树Symplocos laurina根的三萜酸类成分。方法采用硅胶柱色谱法、ODS、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、半制备液相色谱等技术进行分离纯化,通过波谱数据分析及物理常数对照等方法鉴定化合物结构。结果从黄牛奶树根95%乙醇提取物中分离得到10个三萜酸类化合物,分别鉴定为19α-羟基-4-羰基-3,24-非-2,4-开环齐墩果烷-12-烯-2,28-二酸(1)、negundonorin A(2)、2α,3β,19α,23-四羟基乌苏烷-12-烯-28-酸(3)、2α,3β,19α,23-四羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸(4)、2α,3β,23-三羟基乌苏烷-12-烯-28-酸(5)、2α,3β,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸(6)、2α,3α,19α,23-四羟基乌苏烷-12-烯-28-酸(7)、1α,3β,19α,23-四羟基乌苏烷-12-烯-28-酸(8)、3β,19α,23-三羟基乌苏烷-12-烯-28-酸(9)、3β,19α,23-三羟基乌苏烷-2-羰基-12-烯-28-酸(10)。结论所有化合物均首次从黄牛奶树中分离得到,除化合物3、7,其他化合物均为首次从山矾属植物中分离得到。