高血压病患者循环内皮微颗粒水平与动脉弹性功能关系的研究

目的:研究高血压病患者循环内皮微颗粒水平和动脉弹性功能的关系。方法:采用流式细胞仪技术测定高血压病患者(n=60,高血压组)和健康志愿者(n=32,对照组)血浆中CD31+/CD42-内皮微颗粒的水平,袖带震荡技术无创检测肱动脉与胫后动脉之间的肱踝脉搏波传导速度,评估二者之间的相关性。结果:与对照组相比,高血压患者循环内皮微颗粒水平显著升高[(972.6±116.2)比(1920.3±152.0)个/μl,P<0.001];高血压组患者肱踝脉搏波传导速度增快[(1369.3±147.3)比(1793.0±328.3)cm/s,P<0.001]。循环内皮微颗粒水平与肱踝脉搏波传导速度呈正相关(r=0.42,P<0.001),以肱踝脉搏波传导速度为因变量的多因素回归分析显示,循环内皮微颗粒水平是其独立影响因素。结论:高血压病患者循环内皮微颗粒水平升高且肱踝脉搏波传导速度加快,循环内皮微颗粒是肱踝脉搏波传导速度的独立影响因素,提示高血压病患者体内较高水平的循环内皮微颗粒加速了大动脉弹性功能减退。     

T4 DNA连接酶介导的5'RACE法克隆大鼠Nor1全长cDNA

目的:克隆75AEST全长cDNA序列。方法:抽提在25mmol/LKCl条件下培养7d的大鼠小脑颗粒神经元的总RNA后,用DNA连接酶介导的5'RACE法克隆75A表达序列标签(EST)cDNA5'端未知序列,其产物亚克隆到pGEM-Teasy后进行序列测定以及同源性分性。结果:首轮5'RACE扩增出2.5kb序列后,75AEST鉴定为神经来源孤儿受体1(Nor1)基因的部分序列;再经过二次轮5'RACE,我们首次克隆Nor-1的全长cDNA序列。结论:T₄DNA连接酶介导的5'RACE是一种效率较高的克隆mRNA5'端未知序列的好方法,为进一步研究Nor1在小脑颗粒神经元存活或分化过程中的作用奠定基础。     

人卵巢癌细胞株侧群细胞的生物学特征

目的 研究人卵巢癌细胞株细胞中乳腺癌耐药蛋白与侧群细胞表型的关系,并探讨侧群细胞在卵巢癌病理牛理中的作用以及卵巢癌细胞株在卵巢癌肿瘤干细胞研究中的应用. 方法 利用流式细胞术从人卵巢浆液腺癌细胞株OVCAR3中分离排斥双苯酰亚胺(Hoechst 33342)染色的侧群细胞以及能被其染色的非侧群细胞,比较两个亚群的细胞集落形成率,并检验其在软琼脂平板生长的能力.同时以免疫印迹和免疫荧光染色检测两种细胞的乳腺癌耐药蛋白表达情况. 结果 OVCAR3细胞株中排斥Hoechst 33342的细胞占2.0%,此活动对维拉帕米(verapamil)敏感.侧群细胞和非侧群细胞克隆形成率分别为46.17%±23.27%和6.17%±3.06%,侧群细胞克隆形成率高于非侧群细胞(P<0.05),并能在软琼脂平板中生长、形成球形的细胞集落.侧群细胞表达乳腺癌耐药蛋白. 结论 人卵巢浆液腺癌细胞株中存在排斥Hoechst 33342染色、对维拉帕米敏感的侧群细胞,是维持细胞株的主要因素,其表型与乳腺癌耐药蛋白相关.OVCAR3可用于卵巢癌肿瘤干细胞的研究.     

大鼠神经元Arnt2基因cDNA序列的分析

目的 克隆并分析神经元凋亡差异表达5号EST全长cDNA。方法 以大鼠大脑Marathon Ready cDNA为模板，采用SMART RACE技术克隆神经元凋亡差异表达5号EST全长cDNA，产物亚克隆刘pGEM-T easy质粒载体后进行序列测定以及同源性分析。结果 经过3次5’RACE扩增，得到的5号EST cDNA长度为5663bp，其中包含1个2136bp的完整的开放读码框序列，与已知大鼠基因芳香烃受体核转位因子2（Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator2，Arnt2）完全同源：该cDNA 3’瑞非编码区长达3323bp，包含3个AATAAA加尾信号和1个由12个腺嘌呤核苷酸组成的polyA序列。结论 5号EST目标基因为大鼠基因Arnt2，该基因3’端完整的非编码区cDNA序列为首次报道。神经元凋亡差异表达基因Arnt2的克隆鉴定为深入研究小脑颗粒神经元低钾性凋亡机制奠定了基础。     

普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的抑制作用(英文)

目的观察普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的保护作用。方法建立大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡模型,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记,Hoechst 33258核染色,琼脂糖凝胶电泳以及醋酸荧光素染色等方法,根据细胞凋亡的形态学及生物化学等特征,分析普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的影响。结果大鼠小脑颗粒神经元与普卡霉素预孵育1 h及持续作用下,普卡霉素浓度依赖性地抑制低钾诱导24 h所致的大鼠小脑颗粒神经元凋亡,其有效浓度在50~200 nmol.L-1之间,普卡霉素浓度为200nmol.L-1时达到的最大凋亡抑制率约为80%。结论普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡具有较强的抑制作用。     

高血压患者内皮微颗粒水平对肱动脉内皮功能的影响

目的 运用彩超评价高血压内皮微颗粒(EMPs)水平对肱动脉内皮功能的影响.方法 采用流式细胞术检测高血压患者30例和健康志愿者30例血浆中EMPs的水平,比较两组对肱动脉内皮功能的影响.结果 2组在年龄、性别、体重指数、总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、吸烟等指标上差异均无统计学意义(P＞0.05).与健康志愿者组相比,高血压患者循环EMPs水平显著升高(P＜0.01);高血压组患者肱动脉内皮舒张功能(FMD)减低(P＜0.01),循环EMPs水平与FMD值呈负相关(r=-0.142,P＜0.01).结论 提示高血压病患者体内较高水平的循环EMPs是肱动脉内皮舒张功能减低的影响因素,彩色多普勒可作为诊断及观察疗效的一项重要手段.     

小脑颗粒神经元凋亡差异表达基因的分离克隆研究

目的筛选分离低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡的差异表达基因。方法采用低钾处理的小脑颗粒细胞,抽提细胞总RNA,用荧光法mRNA差异显示技术分离差异表达基因,并对差异表达基因片段进行回收、克隆,经反向RNA印迹及RT鄄PCR技术验证。结果发现51条差异片段,成功克隆8个片段,其中2个未知功能的基因片段证实在低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡中表达增加。结论mRNA差异显示法是分离差异表达基因的一个良好的工具,分离出的差异基因与神经细胞凋亡有关。     

正常及炎症状态人牙髓中八聚体结合转录因子4B的表达

目的 研究人正常及炎症牙髓组织中八聚体结合转录因子4B(Oct-4B)的表达特点,检测大肠杆菌脂多糖刺激后人牙髓细胞( HDPCs)中Oct-4B的表达水平,以探讨Oct-4B在牙髓炎症中的可能作用.方法 采用免疫组织化学和反转录聚合酶链反应( RT-PCR)方法检测正常及炎症牙髓组织中Oct-4B的表达情况.RT-PCR检测1 mg/L脂多糖刺激HDPC 24、48、72 h后Oct-4B和热休克蛋白70(HSP70)表达水平的变化.结果 正常牙髓组织中未检测到Oct-4B的表达,炎症牙髓组织病灶处牙髓成纤维细胞和炎症细胞胞质中Oct-4B表达强阳性.炎症牙髓组织中Oct-4B mRNA水平显著高于正常牙髓组织(P<0.05).脂多糖刺激48.72 h后,HDPC中Oct-4B和HSP70 mRNA水平同步上调(P<0.05).结论 Oct-4B在炎症牙髓组织中高表达,且脂多糖刺激可上调牙髓细胞内Oct-4B表达,Oct-4B可能参与牙髓炎症修复过程.     

人胰腺癌细胞系SW1990中肿瘤干细胞样侧群细胞的分离及生物学特性研究

目的 从人胰腺癌细胞系SW1990中分离肿瘤干细胞样侧群(side population,SP)细胞,并进一步研究其生物学特性.方法 细胞常规培养后应用Hoechst 33342和PI染色、荧光激发流式细胞仪检测并分选SP细胞,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析干细胞标志物CD133的表达,克隆平板测定细胞克隆形成能力,Western blot检测细胞ABC超家族成员G2(ABCG2)蛋白表达.结果 人胰腺癌细胞系SW1990中SP细胞比例为2.70%,可完全被维拉帕米阻断.培养9 d后,SP细胞的A492值为2.1,克隆形成率为(38.7±6.8)%,CD133阳性率为69.63%,均显著高于非SP细胞的0.5,(15.5±2.8)%,16.71%;SP细胞ABCG2表达也较非SP细胞强.结论 胰腺癌细胞系SW1990存在SP细胞.