HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides,ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。方法：设计针对HIF-1α亚基的mRNA反义和正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides,SODN）,并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,观察不同时相5μmol/L的HIF-1αASODN对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α和p53 mRNA的转录水平,免疫组化SP法和免疫印迹（Western blot）检测HIF-1α和p53蛋白表达情况。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组及SODN缺氧组的蛋白表达水平随缺氧时间延长明显升高（P〈0.05）;而p53 mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强（P〈0.05）。在ASODN缺氧组,HIF-1α蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）;p53 mRNA及其蛋白的表达水平也明显减弱（P〈0.05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型p53的突变使HIF-1α稳定表达。而ASODN明显抑制HIF-1α的表达,且使突变型p53的表达水平显著下降,这说明HIF-1α可能在缺氧诱导野生型p53突变方面有一定的作用。     

基于网络药理学探讨丹参抗乙肝病毒的活性成分与作用机制

应用网络药理学方法预测了丹参抗乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)的活性成分和作用机制。首先通过TCMSP、PubChem数据库及文献调研获取丹参的化学成分,通过SwissTargetPrediction和GeneCards数据库分别预测活性成分和HBV感染所对应的潜在作用靶点。使用String数据库构建蛋白互作关系网络、Cytoscape软件将成分-作用靶点网络可视化并进行拓扑学分析、DAVID平台进行GO功能及KEGG通路富集分析、AutoDock Vina软件将丹参关键活性成分与核心靶蛋白进行分子对接。共筛选出38种活性成分,获得疾病-化合物交集靶点178个,富集分析得到405个GO相关条目、68条相关信号通路(涉及T细胞/B细胞受体信号通路、PI3K/AKT信号通路及mTOR信号通路等)。分子对接结果显示,丹参大多数关键活性成分(丹参醌酚Ⅱ、丹参新酮、原儿茶酸、紫草酸和原儿茶醛)与核心靶点(PIK3CA、APP、STAT3、AKT1和mTOR)具有较好的亲和力。更进一步,在HBV复制小鼠模型上考察了丹参代表性活性成分紫草酸的抗HBV活性及对PI3K/AKT和...     

缺氧条件下骨肉瘤MG-63细胞中TG2通过线粒体途径调节细胞凋亡的机制

目的探讨缺氧条件下TG2在骨肉瘤MG-63细胞凋亡中的作用以及TG2通过阻止细胞色素C的释放和调节Caspase-3的表达及活性抑制细胞凋亡的机制。方法建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,设立四组:(1)常氧组;(2)单纯缺氧组;(3)对照si RNA缺氧组;(4)TG2 si RNA缺氧组。观察各组在缺氧培养不同时相(6、12、24、48、72 h)骨肉瘤MG-63细胞TG2、Caspase-3表达、胞核和胞质细胞色素C的变化以及细胞凋亡率。结果与常氧组比较,单纯缺氧组及对照si RNA缺氧组的TG2活性、m RNA及蛋白表达水平明显增强(P<0.01),且随缺氧时间延长明显升高;Caspase-3活性未见明显增加,而Caspase-3及细胞质内细胞色素C蛋白的表达水平和细胞凋亡率轻度增加。与前三组比较,在TG2 si RNA缺氧组,当通过转染TG2 si RNA抑制TG2的表达时,Caspase-3的活性及胞质内细胞色素C蛋白表达水平明显增强(P<0.01);细胞凋亡率也显著增加(P<0.01)。结论缺氧条件下,MG-63骨肉瘤细胞TG2表达增强,并且可以阻止细胞核内细胞色素C向胞质释放,从而降低Caspase-3的表达及活性,抑制肿瘤细胞的凋亡。     

浅析数据备份

选用适合医院实际情况的网络备份模式是医院计算机网络安全运行的保证。文章从实际应用的角度,详细介绍了四种常用的数据备份模式,并以医院信息系统的基本需求为标尺,同时结合日常工作积累的经验,对四种模式加以比较。为保障数字化医院信息系统的正常运转,预防与处理灾难性突发事件予以参考。     

缺氧对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α、p53 、bcl-2 及细胞凋亡的影响

 目的 了解缺氧环境对骨肉瘤MG-63细胞缺氧诱导因子HIF-1α、p53、bcl-2的表达及细胞凋亡的影响。方法 建立骨肉瘤细胞体外缺氧模型,观察不同缺氧时间段（8、16、24h）HIF-1α、p53、bcl-2的表达和细胞凋亡的情况。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α、p53、bcl-2的表达水平;免疫组化（SP法）和免疫印迹（WesternBlot）检测HIF-1α、p53、bcl-2蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 缺氧处理后,HIF-1α转录水平未见明显改变,蛋白表达水平随缺氧时间延长明显增强;而p53、bcl-2mR-NA及蛋白表达水平均显著增强,两者间存在一定的相关性;细胞凋亡率却未见明显增加。结论 在缺氧条件下,不能通过以HIF-1α为中介的p53依赖途径来诱导骨肉瘤MG-63细胞的凋亡,其机制可能与缺氧诱导野生型p53的突变或缺失使HIF-1α和bcl-2的过表达有关。     

分节段减压与椎体次全切治疗多节段颈椎病的疗效比较

目的比较分节段减压融合术与传统椎体次全切除融合术在治疗多节段脊髓型颈椎病的中远期临床疗效,并评估其相关影响因素。方法回顾性总结2006年6月至2011年6月行分节段减压融合术(A组)与前路椎体次全切除减压融合术(B组)联合髂骨取骨植骨治疗多节段颈椎病52例。比较两组手术时间、术中出血量、住院天数;术后随访并通过影像学测量融合节段前凸角度、全颈椎生理曲度和颈椎矢状面的活动度(range of motion,ROM),同时评估植骨融合程度、融合节段高度的变化以及相邻节段退变情况;采用日本矫形外科学会(Japanese orthopaedic association,JOA)评分系统评估其神经功能恢复情况。结果术中B组的出血量明显大于A组,但手术时间少于A组,差异有统计学意义(P0.05)。52例患者均获得有效随访,平均随访时间为3.2年(1.2~5年)。术后6个月内JOA评分及改善率两组间无明显差异;12个月后B组明显降低。两组术后融合节段高度较术前明显增高(P0.05),其中B组平均增加值最明显,术后12个月B组高度丢失明显。术后两组ROM都明显下降,而融合节段Cobb角及全颈椎曲度与术前比较增加明显(P0.05)。术后两组脊髓减压程度相仿。结论分节段减压融合术与传统椎体次全切除融合术两种手术方式在治疗多节段颈椎病的早期均可获得满意的临床效果,但选择性椎体次全切除分节段减压植骨融合合并颈椎前路长节段钛板固定的手术方式中远期效果更可靠。     

Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的：研究骨肉瘤MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶（TG2）的抗凋亡作用,探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法：设计针对TG2的siRNA,建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型,分为常氧组（细胞在常氧下培养）、单纯缺氧组（细胞在缺氧培养箱里培养）、对照siRNA缺氧组（转染对照siRNA后在缺氧培养箱里培养）和TG2 siRNA缺氧组（转染TG2 siRNA后在缺氧培养箱里培养）。观察各组骨肉瘤MG-63细胞在缺氧培养不同时间(6、12、24、48和72 h) 后Bax和Cyt C的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测TG2活性,RT-PCR法检测TG2和Bax mRNA表达水平,免疫组织化学法检测TG2和Bax蛋白在细胞内的分布,Western blotting法检测TG2、Bax和Cyt C蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2 mRNA和蛋白表达水平明显增强(P<0.01),并随缺氧时间延长逐渐升高（P<0.01）;Bax mRNA表达水平变化不明显(P>0.05),但Bax蛋白表达水平明显下降(P<0.01),细胞胞浆和线粒体内Cyt C蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）。与单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组比较,TG2 siRNA缺氧组细胞各时间点TG2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）,Bax蛋白表达明显增加(P<0.01),胞浆内Cyt C蛋白水平明显增加(P<0.01),线粒体内Cyt C蛋白水平明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论： TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax,阻止Cyt C释放至胞浆,从而抑制肿瘤细胞凋亡。     

路边青配伍穿心莲对脱水穿心莲内酯的小鼠血液药动学影响

 目的研究路边青与穿心莲配伍使用对脱水穿心莲内酯(DAP)的小鼠血液药动学性质的影响。方法小鼠灌胃穿心莲总内酯干浸膏和复方穿心莲干浸膏药液后于不同时间点取血,血样经前处理后用反相高效液相色谱分离、测定脱水穿心莲内酯含量,采用3P97药动学软件对数据进行处理。结果小鼠灌胃穿心莲总内酯干浸膏和复方穿心莲片干浸膏后,脱水穿心莲内酯的血药浓度动态变化规律均符合一室开放模型。路边青与穿心莲配伍使用可导致脱水穿心莲内酯的吸收慢、消除快、生物利用度低。结论穿心莲与路边青配伍使用是否科学,值得深入研究。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bcl-2表达及凋亡的影响

背景与目的：本实验研究缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonueleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响，进一步探讨HIF-1α在缺氧诱导肿瘤细胞凋亡的过程中的作用机制。方法：设计针对HIF-1α RNA亚基的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynueleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相（8、16、24h）5μmol／L的HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α、P53和Bcl-2 mRNA的转录水平，免疫组化（SP法）和免疫印迹（Western Blot）检测HIF-1α、P53和Bcl-2蛋白表达情况。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：HIF-1α转录水平（8～24h）单纯缺氧组（22．0％～22．6％）及SODN缺氧组（22．0％～22．8％）与常氧组（20．2％～20．9％）比较未见明显改变，而在ASODN缺氧组（16．8％～18．5％）显著降低（P〈0．01）。其蛋白表达单纯缺氧组（33．1％～88．9％）、SODN缺氧组（32．5％～88．7％）随缺氧时间延长明显升高；而P53、Bel-2 mRNA水平单纯缺氧组、SODN缺氧组较常氧组均显著增强（3．4～7．5倍不等）（P〈0．05）。其蛋白的表达这二组也较常氧组均显著增强（2～大于37倍不等）（P〈0．05）。然而在ASODN缺氧组P53、Bel-2 mRNA活性明显减弱（11．5％～13．9％）（P〈0．05），蛋白表达水平也显著降低（13．6％～35．4％）（P〈0．05）：细胞凋亡率其他三组未见明显变化，但ASODN缺氧组显著增加（P〈0．05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型P53的突变使HIF-1α和Bcl-2的过表达，从而抑制肿瘤细胞的凋亡。而HIF-1α反义寡核苷酸抑制HIF-1α活性后，可以抑制野生型P53的突变，降低Bcl-2的表达，导致细胞凋亡的增加。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF—1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF—1α和血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法：设计针对HIF—1α RNA亚基模板序列的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF的表达的影响。RT-PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA水平，免疫组化和免疫印迹方法检测HIF-1α和VEGF蛋白表达情况。结果：与常氧组比较。单纯缺氧组及SODN缺氧组的HIF-1α转录水平未见明显改变。蛋白表达水平却随缺氧时间延长明显升高：而VEGF mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强。然而在ASODN缺氧组。HIF-1α、VEGFmRNA活性以及蛋白的表达水平明显减弱，且HIF-1α蛋白水平与VEGF转录活性有明显的相关性。结论：在缺氧环境下，转染HIF-1α反义寡核苷酸能够抑制HIF-1α活性。从而使VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显下降。