低剂量他克莫司治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的：探讨低剂量他克莫司（tacrolimus，又名FK506）对大鼠急性脊髓损伤是否具有神经保护作用。方法：雄性Wistar大鼠72只，随机分为假手术组（12只）、损伤组（30只）和FK506治疗组（30只）。采用Allen’s打击法致伤大鼠T10脊髓，假手术组仅做椎板切除术。FK506治疗组在脊髓损伤后5min一次性经尾静脉注射FK5060．3mg／kg，其余两组以相同方法给予等量生理盐水。致伤后30min、6h、24h、48h、72h取伤段脊髓组织行病理观察及原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡，伤后1、3、7、14、21d行脊髓功能BBB评分和斜板实验。结果：伤后3、7、14、21d，FK506治疗组斜板实验和BBB评分明显优于损伤组，两组间比较差异有显著性（P〈0．05）；伤后各时间点FK506治疗组脊髓损伤区出血坏死较损伤组轻；伤后6、24、48、72h神经细胞凋亡FK506治疗组较损伤组明显减少，两组间比较差异有显著性（P〈0．05）。结论：在大鼠急性脊髓损伤后早期应用低剂量他克莫司（0．3mg/kg）治疗对神经具有保护作用，可减少神经细胞凋亡，减轻脊髓继发性损伤，促进脊髓功能恢复。     

改良CT测量法用于椎弓根螺钉个体化植入的实验研究

[目的]探讨进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离用于椎弓根螺钉个体化植入的可行性.[方法]于华中科技大学同济医学院解剖教研室收集成人脊柱标本30例,在CT横断面扫描图像上测量如下数据:椎弓根宽度a,进钉点到椎体前缘的距离b,进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离c,椎弓根纵轴与椎体矢状轴的夹角A,在侧位片上测量椎弓根纵轴与操作台垂直线的夹角B,分为实验组和对照组,实验组采用CT图像上进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离用于进钉点在水平方向上的定位,对照组采用Ebraheim法定位进钉点,置钉后行CT扫描,判断螺钉有无穿破椎弓根内侧或外侧壁及穿破程度,按照穿破程度进行分级:A=完全位于椎弓根内;B:穿破程度＜2 mm;C=穿破程度2～4 mm;D=穿破程度＞4 mm,并进行对比分析.[结果]实验组T3-10水平螺钉穿破率明显低于对照组,T1,T2,T 11,12:两组的穿破率相当.在T 3-18水平,螺钉的穿破程度(C,D级)明显高于其他节段,与椎弓根在这些节段横径变小有关;T 1-12,实验组中C,D级的发生率低于对照组.[结论]采用进钉点到棘突中心矢状面的垂直距离用于定位椎弓根螺钉进钉点,可以明显提高螺钉在水平方向上的植入准确性.尤其在L 3-10节段,而且特别适合由于解剖变异,外伤,肿瘤破坏等原因使关节突关节,横突等解剖标志发生改变时椎弓根螺钉的植入,亦可以在正常解剖情况下作为传统定位方法的有效补充.     

兔髓核细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为髓核细胞的研究

目的 研究体外新西兰大白兔髓核细胞(nucleus pulposus cells)与SD大鼠骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)共培养时,兔髓核细胞与大鼠MSCs直接和间接接触对MSCs分化为髓核细胞的影响.方法 DAPI (4‘,6-二咪基-2‘-苯吲哚盐酸)标记原代髓核细胞后,分别与第三代MSCs按接触组和非接触组(Transwell培养系统)共培养.每隔24小时应用免疫荧光观察MSCs的形态学变化,并用RT-PCR方法检测Ⅱ型胶原和可凝集蛋白多糖(Aggrecan)的表达.结果 直接接触培养组中可见分化的MSCs形态和功能接近髓核细胞;非直接接触组的MSCs未见变化.结论 髓核细胞与MSCs的直接接触,是诱导MSCs分化为髓核细胞的重要因素.     

磁刺激对脊髓神经组织损伤的早期保护作用

目的探讨脊髓损伤后,应用磁刺激(magnetic stimlation,MS)对损伤脊髓组织早期钙、镁离子的影响.方法实验利用Allen的WD(weight drop,WD)技术,以10g×2.5cm致伤力造成wistar大鼠T8脊髓损伤模型,实验组分别于术后即刻,1h,2h,4h,24h分别予0.5HZ,70%输职强度的磁刺激,对照组不做处理.术后2h,6h,24h取治疗组,对照组动物损伤区脊髓组织作以下检测用干湿法测水含量;用原子吸收光谱法测钙、镁离子含量.结果损伤区脊髓组织水含量增多,钙离子水平升高,镁离子水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变重;而应用MS可改善上述变化.结论脊髓损伤后应用磁刺激可减损脊髓损伤后的离子失衡,从而对继发性脊髓损伤具有保护作用.     

正反义人PIN1基因克隆及真核表达载体的构建

目的 克隆正、反义人PIN1基因（hPIN1）及构建hPIN1基因正、反义真核表达载体.方法 应用RT-PCR技术从人骨肉瘤细胞系MG-63细胞总RNA中成功扩增出990bp包含hPIN1基因编码区的cDNA序列,按正、反方向加上BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点后形成正、反义hPIN1基因,然后连入含BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点的pIRES2-EGFP表达质粒上,构建正、反义hPIN1基因的重组真核表达质粒phPIN1.结果 扩增的cDNA经测秩序与基因文库完全一致;BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,正、反义表达质粒形成5.3 ＋0.99kb 两条带,与理论计算值完全一致.结论 成功克隆正、反义人PIN1基因及构建hPIN1基因的正、反义真核表达载体.     

断层解剖学分析在四肢软组织肉瘤手术计划中的应用

目的 探讨断层解剖学分析在软组织肉瘤外科边界设计中的作用。方法 2012年3月至2014年12月我科收治四肢软组织肉瘤患者10例,术前行0.625 mm薄层扫描MRI和/或CTA检查。逐层详细分析断层解剖结构,确定肿瘤累及间室、反应带区域,以间室结合广泛边缘切除为原则准确设计肿瘤切除的边界,手术严格按照设计边界进行。对术后标本观察反应带和边界厚度,做两个维度最小边界测量,病理学检查明确肿瘤性质,确认切除标本边缘是否存在肿瘤细胞。结果 ①术后肿瘤实体与术前断层解剖分析大小相比差异无统计学意义（P＞0.05）。②术后测量肿瘤外正常组织厚度,手术类型达到广泛切除或治愈性切除标准,与术前计划一致。肿瘤完整切除,术后手术切缘病理检查未发现肿瘤细胞浸润。③末次随访患者功能恢复良好,未见肿瘤复发。结论 逐层断层解剖分析为软组织肉瘤提供精确数字化外科边界,合理而精确切口设计,减少出血、创伤和肿瘤污染的可能性,有利于肿瘤切除时实现治愈性切除。规范断层解剖影像学检查和逐层断层解剖分析应该成为恶性软组织肉瘤切除术前设计必要步骤。     

髓内、外内固定与人工关节置换术治疗高龄股骨粗隆间骨折疗效对比研究

目的比较髓内、外内固定与人工关节置换术治疗高龄股骨粗隆间骨折的临床疗效。方法回顾分析自2012-09—2015-01诊治的107例高龄粗隆间骨折的临床资料,根据手术方式不同分为髓内固定(PFNA组)、髓外固定(PFLCP组)和人工关节置换(BHR组),比较3组出血量、时间和并发症发生率、切口大小、术中透视次数、术后患肢完全负重时间、卧床和住院时间、术后髋关节Harris评分。结果 3组均顺利完成手术。所有患者均获随访3~36个月,平均12个月。BHR组与另外2组比较,手术时间短、切口大、出血多、透视少、卧床和住院时间短、术后负重时间早、髋关节功能更好,差异有统计学意义(P0.05),3组并发症发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。术后9个月3组均获得良好的关节功能,Harris评分两两比较差异无统计学意义(P0.05)。结论双极人工股骨头置换术治疗高龄股骨粗隆间骨折术后可获得良好的关节功能,患肢完全负重早,是一种安全的治疗方法。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的研究

目的研究Yes相关蛋白（Yes?associated protein, YAP）通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法用siRNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性,通过Real?time PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β?catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β?catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平减少,c?Myc和Nanog基因表达减少,Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默Lats1基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平增加,c?Myc和Nanog基因表达上调,Sox9、Col2和Aggre?can基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论 YAP通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。     

SCAP重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响

目的 构建固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SRREBP cleavage activating protein,SCAP)基因干扰(small interfering RNA,siRNA)和过表达重组腺病毒,观察其对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用pAdEasyTM腺病毒载体系统构建重组腺病毒质粒pAd-SCAPsiRNA和pAdSCAP,在HEK293细胞中分别包装和扩增.RT-PCR和Western blot检测ATDC5细胞中SCAP的表达,流式细胞仪检测SCAP腺病毒对ATDC5细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、p-JNK的表达.结果 成功获腺病毒siSCAP(滴度为2.5 × 1010PFU/mL)和Ad-SCAP(滴度为3.0×10n PFU/mL).RT-PCR和Western blot结果表明:siSCAP和Ad-SCAP能分别有效抑制和增强ATDC5细胞中SCAP的表达.流式细胞仪检测结果表明:与正常组和空病毒组比较,siSCAP腺病毒处理组S期细胞比例升高15.45％和16.07％ (P ＜0.05),Ad-SCAP组比例降低14.27％和13.45％(P＜0.05);siSCAP组细胞凋亡率降低13.10％和11.50％ (P ＜0.05),Ad-SCAP组升高10.51％和10.17％ (P ＜0.05).Western blot检测结果与流式细胞仪检测结果一致.结论 成功构建SCAP腺病毒;敲低SCAP能促进ATDC5细胞增殖并抑制凋亡;过表达SCAP则抑制增殖、促进凋亡.     

全髋关节置换术后不同时间开始康复训练的效果研究

目的研究3种不同的开始时间对全髋关节置换(THA)术后患者实施康复的影响,选择出康复效果最佳的时间。方法选择本院THA术后患者90例,用抽签法随机分为3组(各30例)。分别于术后第1天(THA1组)、第3天(THA2组)、第10天(THA3组)开始按统一制定的康复训练计划实施功能锻练,并于术后第1、3、6个月末采用Harris髋关节评分法进行组间比较。结果术后1个月末THA1与THA3组、THA2与THA3组Harris评分差异有显著性意义(P<0.01);术后3个月末THA1与THA2、3组的Harris评分差异均有显著性意义(P<0.01);术后6个月末3组间Harris评分差异无显著性意义。结论在保证生命体征平稳的前提下,康复训练于术后第1天开始为最佳;THA术后早期(1~3d)开始功能锻炼效果优于晚期(10d)开始锻炼,但术后1d或3d开始锻炼可视患者具体情况而定。