松茸水提物提取工艺优化及其单糖组成分析

目的优化松茸水提物提取工艺,并分析其单糖组成。方法以提取温度、液料比、提取时间、提取次数为影响因素,多糖提取率为评价指标,正交试验优化提取工艺。水提醇沉法得到粗多糖后用三氟乙酸水解,加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生化,HPLC法分析单糖组成。结果最佳条件为药材加入50倍量水,90℃下回流提取2 h,重复3次,多糖提取率为17.44%。多糖主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖组成,摩尔比为1:3.39:1.19:0.24:0.40。结论该方法快速稳定,准确简便,可用于松茸及其相关制剂的质量控制。     

隐丹参酮对白血病细胞伊马替尼敏感性和P-糖蛋白表达作用的研究

隐丹参酮是丹参中主要的脂溶性活性化合物之一,对白血病等多种恶性肿瘤有显著的抑制作用,并可有效提高伊马替尼的化疗效果,但其发挥功能的分子机制仍未阐明.该文利用白血病细胞K562及其伊马替尼耐药株K562-R,系统研究了隐丹参酮对细胞伊马替尼的敏感性和P-糖蛋白表达的影响.利用MTT法检测隐丹参酮对伊马替尼增殖抑制功能的影响,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot检测细胞凋亡调控蛋白Caspase-3,Caspase-9,PARP的活性变化情况;梯度浓度的隐丹参酮处理细胞后,Western blot和流式细胞仪检测细胞中P-糖蛋白的表达水平变化,高效液相色谱法检测伊马替尼的胞内药物浓度的变化.结果隐丹参酮预处理后,显著增强了伊马替尼对K562和K562-R细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,细胞的促凋亡蛋白Caspase-3,Caspase-9,PARP的降解产物表达水平显著提高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).而隐丹参酮对白血病细胞中P-糖蛋白表达和伊马替尼胞内药物积累没有影响.结果表明隐丹参酮可提高CML细胞对伊马替尼的化疗敏感性,其作用机制不依赖于对P-糖蛋白表达的抑制和胞内药物浓度的提高.     

三斑海马及其混伪品的DNA条形码分子鉴定研究

目的 建立三斑海马Hippocampus trimaculatus的COI、16 S rRNA和ATP6的条形码序列数据库,应用DNA条形码技术从分子水平快速准确鉴定三斑海马和其他正伪品海马,探讨海马属药材鉴定的新方法。方法 提取三斑海马药材的基因组DNA,PCR扩增COI、16 S rRNA和ATP6的序列并进行双向测序,所得序列采用软件Codon Code Aligner V4.2对测序峰图进行校对拼接,应用ClustalX软件进行序列比对,MAGA5.0软件计算三斑海马的种内种间遗传距离(Kimura2-Parameter,K2P),构建邻接树(Neighbor-joingtree,NJTree)聚类分析不同品种海马药材的鉴定结果。结果 获得的三斑海马线粒体COI、16 S rRNA、ATP6序列长度分别649、572、603～605 bp,其中3个条形码序列的种内变异位点碱基数分别为8、4和15,种内的变异率较小,COI、16 S r RNA、ATP6序列的平均种内K2P遗传距离0.002、0.001和0.006,均远小于三斑海马的种间K2P距离;NJ树结果显示三斑海马与其他海马均可明显区分,具有良好的单系性。结论 COI、16 S r RNA、ATP6序列作为条形码均可以鉴定三斑海马及其他混伪品海马药材,为动物类药材及其混伪品和近源物种的分子鉴定提供依据,为对保障海马临床用药安全提供了新的技术手段。     

墓头回环烯醚萜酯提取部位抗肿瘤作用及机制研究

目的 研究墓头回醋酸乙酯提取物环烯醚萜酯部位（PHEBB）的体内外抗肿瘤作用及其机制。方法 硅胶柱色谱法精制PHEBB;反相高效液相色谱法分析PHEBB化学成分。MTT法检测PHEBB对人肿瘤细胞KB、COLO-205、SGC-7901的抑制活性。采用小鼠移植性瘤模型研究PHEBB对小鼠S₁₈₀肉瘤、H₂₂肝癌的体内抗肿瘤作用;免疫组化法研究PHEBB对肿瘤组织中相关基因表达的影响。结果 PHEBB主要成分均为环烯醚萜酯类,主要有desacetylisovaltratum、isovaltrate acetoxyhydrin。体外实验结果显示,PHEBB对KB、COLO-205、SGC-7901等癌细胞均具有显著抑制作用,IC₅₀在2.27～5.49 μg/mL。体内实验显示,PHEBB以60 mg/kg ip给予荷瘤小鼠,对S₁₈₀肉瘤的抑制率为45.5%,对H₂₂肝癌的抑制率为54.2%;免疫组化检测结果显示,PHEBB能上调小鼠H₂₂肿瘤组织中Bax表达,下调Bcl-2表达,且能降低肿瘤组织中微血管密度。结论 PHEBB抗肿瘤药效物质为环烯醚萜酯;其体内外均具有一定抗肿瘤作用,且其抗肿瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤微血管有关。     

基于性状鉴别和DNA条形码联用的虎尾海马生药学研究

目的:采用性状-线粒体COI条形码联用的方法对市售海马药材伪品虎尾海马Hippocampus comes进行生药学研究,提供主要海马药材伪品虎尾海马的性状和分子的鉴定特征,为海马药材的鉴定提供新方法。方法:利用外观性状鉴别方法对虎尾海马典型性状特征进行研究;扩增获得虎尾海马样品的COI条形码序列,比较各序列的碱基组成、GC含量、变异率等,分析虎尾海马与常见海马药材的正品和伪品序列,明确其种内和种间遗传距离;利用NJ(neighbor-joining)法构建虎尾海马与常见海马样品的系统进化发育树,分析其亲缘关系。结果:虎尾海马最典型性状鉴别特征为尾部有交替出现的花斑,头冠低小且有5个显著的圆形突起;虎尾海马样品的COI序列长度为649 bp,碱基GC平均含量为39.73%,种内的平均遗传距离为0.001 1,其种内遗传距离远小于与另外8种海马药材的种间遗传距离,存在显著的条形码间隔;NJ系统发育树显示虎尾海马与其他海马药材各自聚为一支,其分支支持率为100%,与刺海马的亲缘关系最近。结论:基于性状鉴别-线粒体COI条形码的生药学研究方法能够准确鉴定虎尾海马,与其他海马进行准确区分,为虎尾海马的快速鉴定提供了新的手段,对改善市售海马混乱的流通现状、控制和提高海马药材质量具有重要意义。     

蜘蛛香中1个新的单萜环烯醚酯类化合物

目的研究败酱科缬草属植物蜘蛛香Valeriana jatamansi根及根茎的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、中压色谱、制备型HPLC等方法进行分离、纯化,采用1D,2D NMR、HRMS、IR等波谱学方法鉴定化合物化学结构。结果从蜘蛛香二氯甲烷提取物中分离、纯化得到1个新的单萜环烯醚酯类成分,命名为蜘蛛香萜C(1)。结论化合物1为新的单萜环烯醚酯类成分。     

自噬调控慢性粒细胞白血病干细胞功能的研究进展

白血病干细胞具有自我更新和多向分化的潜能,参与了慢性粒细胞白血病的病程发展,是导致患者耐药和复发的重要原因之一。自噬作为一种保守的溶酶体降解途径,参与细胞内降解和循环途径,在维持细胞内环境稳态和功能方面起着关键作用。研究表明,自噬参与了白血病干细胞的分化调控,与慢性粒细胞白血病的化疗敏感性密切相关。该文就自噬对慢性粒细胞白血病化疗敏感性和干细胞功能的调控进行了系统综述,为靶向自噬的抗白血病药物的开发奠定基础。     

基于数据挖掘的中药治疗血液病的用药规律分析

目的采用Apriori算法与系统聚类的数据挖掘技术对中药方剂治疗血液病的用药规律进行分析,梳理常用的药物种类,总结药物间的配伍规律和关联规则,为临床血液病治疗的药物组方选择和中成药开发提供数据参考。方法在《中医方剂大辞典》中以"血证""虚劳""急劳""温病""热劳"5个病证作为关键词筛选治疗血液病的方剂,同时在中国知网和万方数据库采用主题"血液病"与全文"中药"进行高级检索,筛选1979——2019年有关中药治疗血液病的文献。根据支持度、置信度、提升度,对治疗血液病的中药方剂的高频次中药、配伍规律、核心中药组合、相互关系网络及聚类结果进行分析。结果共筛选获得100个方剂和中成药制剂,涉及中药64种,总用药频次772,使用频次≥10的中药有25味,频次最高的5味中药是丹参、人参、党参、黄芪和地黄;治疗血液病的中药药性以温(频次291,37.79%)、寒(频次228,29.61%)为主,药味以甘(频次486,41.82%)、苦(频次362,31.15%)为主;其中使用频次较高的核心药物组合包括川芎-当归、白芍-当归、熟地黄-当归、桃仁-当归等7个药对组合和桃仁-川芎-当归、桃仁-红花-当归、红花-川芎-当归等24个3药组合,关联规则分析发现了16种具有潜在配伍关系的白血病治疗药物组合,其中提升度4.7以上的药物组合有4个;聚类分析结果表明,高频使用的单味药物之间,具有关联性的药物组合有8组;高频药物复杂网络分析表明,当归-白芍、当归-茯苓药对和当归-白术-黄芪3药组合间的联系密切。结论治疗血液病高频药物和核心组方中以补虚药、活血药和清热药为主,益气养血、活血化瘀和清热凉血为中医药血液病的主要治法,为恶性血液病的临床用药和新药开发提供理论依据。