正交试验法优选补肾祛瘀颗粒的提取工艺

目的:优选补肾祛瘀颗粒的提取工艺,为该制剂的工业化生产提供参考。方法:采用UV测定总多糖和总黄酮含量,检测波长分别为489,510 nm;采用HPLC测定二苯乙烯苷含量,流动相乙腈-水(22∶78),检测波长320 nm。以总多糖得率为指标,通过正交试验考察料液比、提取时间、提取次数、醇沉浓度对水提工艺的影响;以总黄酮、二苯乙烯苷提取量和浸膏得率的综合评分为指标,通过正交试验考察提取时间、提取次数、乙醇用量及体积分数对醇提工艺的影响。结果:最佳水提工艺为加12倍量水浸泡1 h,回流提取3次,每次1.5 h,醇沉浓度80%;总多糖得率8.682%。最佳醇提工艺为加10倍量80%乙醇回流3次,每次1.5 h;总黄酮和二苯乙烯苷提取量分别为660.19 mg·g-1和145.91μg·g-1,浸膏得率11.81%。结论:优选的提取工艺合理可行,为补肾祛瘀方的临床推广与应用提供实验依据。     

红景天苷通过调节miR-30d-5p表达减弱大鼠心肌细胞肥大的机制研究

[目的]研究红景天苷(salidroside,SAL)调控微小RNA(microRNA,miR)改善大鼠心肌肥大的机制。[方法]采用苯肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,以miR基因芯片筛选出3组细胞(正常对照组、模型组和SAL组)中有显著差异的miR,利用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因确定靶基因。以Real-time PCR与Western blot分别检测靶基因mRNA及蛋白表达。在分别以SAL、候选miR模拟物和抑制物干预后,检测心肌细胞的表面积,分析靶基因和靶蛋白的表达。[结果]基因芯片结果表明,模型组与正常对照组有14种miR存在显著差异,SAL组与模型组有10种miR存在显著差异。模型组miR-30d-5p表达水平显著低于正常对照组和SAL组(P＜0.05),而SAL组miR-30d-5p表达量与正常对照组无统计学差异(P＞0.05)。生物信息学方法和双荧光素酶报告基因测定确定葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)是miR-30d-5p的靶基因。SAL能够上调PE刺激诱导的肥大心肌细胞的miR-30d-5p水平,抑制心肌细胞表面积增大;miR-30d-5p模拟物能抑制心肌细胞GRP78蛋白表达,而miR-30d-5p抑制物的作用结果相反。[结论]miR-30d-5p具有抑制心肌肥大的作用,SAL可能通过增加心肌细胞中miR-30d-5p的表达,抑制GRP78 mRNA及蛋白表达,从而改善心肌肥大。     

基于数据挖掘探讨中成药治疗胃病的用药规律

[目的]基于中医传承辅助平台(V2.5),探究中成药治疗胃病的用药规律,为新药研发及临床治疗提供参考。[方法]收集《中成药临床应用指南——消化疾病分册》中治疗急慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、上消化道出血及胃下垂等胃病的中成药处方,通过频次分析、组方规律分析(用药模式、规则分析、网络展示)及新处方分析等数据挖掘手段,分析治疗胃病的中成药组方规律。[结果]共收集89首中成药处方,共计203味中药,其中药物频次大于10的中药17种,主要为补益类及理气类中药,药对频次前3位分别是“甘草、白芍”“白术、茯苓”及“白术、甘草”,关联规则分析显示“甘草、厚朴→陈皮”置信度最高。其次,分析得出用药模式及药物关联规则等相关参数31种,并挖掘出新处方4个。[结论]通过中医传承辅助平台可对治疗胃病的中成药用药经验进行归纳总结,探索其隐性规律,得出频次最高的药对及相关组合,并最终挖掘出治疗胃病的新处方,为中医药治疗胃病及相关科学研究开拓思路,提供参考依据。     

四逆汤配方颗粒和饮片煎剂抗心肌损伤作用的比较研究

目的:比较四逆汤配方颗粒及其传统饮片煎剂对心肌细胞缺氧损伤模型和大鼠离体心脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法:建立H 2O 2诱导H9c2细胞氧化损伤模型,四逆汤配方颗粒及饮片煎剂干预后,MTT法检测细胞存活率,试剂盒法检测细胞内活性氧(ROS)、脂质过氧化物(MDA)及乳酸脱氢酶(LDH)水平。建立离体SD大鼠心脏I/R损伤模型,观察I/R期间四逆汤配方颗粒及饮片煎剂干预对左心室舒张末压(LVEDP)、心率(HR)和室内压最大上升速率(+dp/dtmax)及室内压最大下降速率(-dp/dtmax)的影响。结果:2.5、5.0 g·L^-1四逆汤配方颗粒和2.5、5.0 g·L^-1四逆汤饮片煎剂预处理均显著提高H 2O 2诱导氧化损伤细胞的存活率(P<0.01,P<0.05)。与H 2O 2组相比,2.5、5.0 g·L^-1四逆汤配方颗粒和饮片煎剂均降低氧化损伤细胞内ROS水平(P<0.05,P<0.01)、MDA含量(P<0.01)以及LDH释放率(P<0.01),相同浓度下两者之间无统计学差异。四逆汤配方颗粒和饮片在0.5、2.0、4.0 g·L^-1剂量下均可改善I/R所致的LVEDP、HR和±dp/dtmax变化,两者之间无统计学差异。结论:四逆汤配方颗粒及其饮片煎剂对心肌细胞缺氧和心脏I/R损伤均具有一定的保护作用,两者药效无明显差异。     

miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因靶向调控作用的研究

目的探讨miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株磷脂酰肌醇三激酶调节亚单位α（PIK3R1）基因靶向调控的作用。方法培养HT-29细胞并用脂质体转染试剂进行转染,利用实时定量逆转录-聚合酶链反应、免疫印迹试验分别检测miRNA-455-5p上下调后PIK3R1及PI3K/AKT信号通路的PI3K下游效应分子（AKT1、MTOR）的基因及蛋白相对表达量。构建PIK3R1的3′非编码区（3′UTR）报告载体,利用双荧光素酶报告基因实验验证PIK3R1基因是否为miRNA-455-5p靶基因。结果与模拟剂对照组比较,上调miRNA-455-5p能抑制HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTORmRNA及蛋白的表达（均P＜0.05）;与抑制剂对照组比较,抑制miRNA-455-5p能促进HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTORmRNA及蛋白的表达（均P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验可获得测序验证正确的PIK3R1的3′UTR报告载体。hsa-miRNA-455-5p与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染293细胞48h后检测得到的分泌型荧光素酶/非分泌型荧光素酶（Gluc/Fluc）值较mimics-N与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染48h后得到的值明显降低（P＜0.05）。结论miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因存在负向调控作用,PIK3R1基因是miRNA-455-5p调控的靶基因。     

高效液相色谱法同时测定清热护肝方中葛根素、栀子苷和芍药苷的含量

正清热护肝方由葛根、栀子、芍药、柴胡、枸杞、茵陈、五味子、板蓝根、垂盆草、紫草组成,具有清热解毒、保肝护肝的功效。其中葛根、栀子、芍药是其重要成分。目前,未见同时测定清热护肝方多个成分含量的报道。笔者采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定清热护肝方葛根中活性成分葛根素、栀子中活性成分栀子苷和芍药中活性成分芍药苷的含量,并进行方法学考察,以期为有效控制该制剂的质量提供参考。1仪器与试药     

基于网络药理学六君子汤治疗胃癌的物质基础与作用机制研究

目的 探讨六君子汤治疗胃癌的药效物质基础与潜在的作用机制。方法 依托TCMSP和TCM-MESH数据库平台对六君子汤中的活性成分进行检索和筛选;利用SwissTargetPrediction,TTD,CTD,GeneCards等数据库对六君子汤活性成分以及胃癌相关靶点进行预测和筛选,进而构建活性成分-靶点网络图。对得到的靶点通过STRING进行蛋白互作（protein-protein interaction,PPI）网络构建并筛选核心靶点,进而通过ONCOMINE数据库分析核心靶点在胃癌中的表达。利用DAVID在线数据库对靶点进行基因本体论（gene ontology,GO）和KEGG通路富集分析以探讨靶点的生物学意义。对于得到的活性成分,作用于胃癌的靶点以及所富集的通路,构建六君子汤成分-靶点-通路网络图。结果 从六君子汤中筛选得到21个活性有效成分和43个作用于胃癌的相关靶点。靶点的PPI网络分析得到6个核心靶点,在ONCOMINE数据库的胃癌样本和正常样本中均存在显著的表达差异。对靶点的GO和KEGG通路富集分析结果显示这些靶点富集在生物过程的条目有74个,细胞组分的有9个,分子功能的有15个,而富集的KEGG通路有78条,涉及肿瘤、信号通路、病毒致癌、凋亡、癌症中的蛋白多糖等多种与胃癌密切相关的通路。六君子汤成分-靶点-通路网络图揭示了六君子汤中的药效物质和作用靶点,以及靶点与疾病通路之间的互作关系。结论 本研究初步明确了六君子汤通过多成分-多靶点-多通路治疗胃癌的作用机制,为深入研究六君子汤的药效物质基础和作用机制奠定基础。