基于Klotho基因的生物活性探讨中医“心肾相交”理论

"心肾相交"是指肾水上济于心,心火下降于肾。Klotho作为肾精的物质基础,在生理功能上与肾精作用相同,二者均秉承于父母,具有抗衰老、主生殖和生长发育、保护骨骼调节钙磷代谢等功用。Klotho衍生物可溶性Klotho(soluble Klotho,sKlotho)延续了Klotho的生理功能,并参与调节心肌细胞和血管平滑肌细胞的钙离子代谢,抑制钙离子沉积,调节脉道,保护心血管,具有交通心藏系统的功能。Klotho基因的这种微观调节作用,使得心藏系统和肾藏系统之间的关系更加紧密,加强了中医心肾之间的交互关系,也丰富了中医"心肾相交"理论。     

成纤维细胞生长因子与肾主水的关系

肾主水是指肾脏可通过其对水液的排泄以及重吸收功能调节全身水液代谢。通过将成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF23)的调磷特性与肾主水的理论机制进行关联性分析,探讨FGF23在肾主水过程中的作用机制。FGF23是由骨细胞或成骨细胞分泌的一种内分泌激素,通过与肾脏表明的Klotho蛋白相结合,调节肾小管上皮细胞对于磷酸盐的重吸收,进而达到体内磷代谢的调节。因此,FGF23参与肾主水的整个重吸收的生理过程。     

肾元颗粒对db/db糖尿病肾病小鼠血管钙化的改善作用及其机制

目的：通过高磷诱导db/db糖尿病肾病（DN）小鼠血管钙化,探讨肾元颗粒对db/db DN小鼠血管钙化的改善作用及其可能机制。方法：将20只SPF级db/db小鼠随机分为模型组和肾元颗粒组（n=10）,同系背景野生型（WT）小鼠作为空白组（n=10）。给药12周后,取各组小鼠血清、肾脏和胸主动脉组织。ELISA法检测各组小鼠血清FGF23水平,HE和von Kossa法检测各组小鼠胸主动脉病理形态表现以及钙盐沉积情况,实时荧光定量PCR （Real-time PCR）法检测各组小鼠肾脏组织中KlothomRNA和胸主动脉组织中Pit-1、Runx2及SM22α mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠肾脏组织中Klotho蛋白和胸主动脉组织中Pit-1、Runx2及SM22α蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠胸主动脉组织中Pit-1蛋白表达水平,免疫荧光法检测各组小鼠胸主动脉组织中SM22α和Runx2蛋白表达水平。结果：与空白组比较,模型组小鼠血清FGF23水平明显升高（P<0.05）,肾脏组织中Klotho mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,胸主动脉组织中Pit-1和Runx2 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,SM22α mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,胸主动脉组织中Pit-1和Runx2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,SM22α蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与模型组比较,肾元颗粒组小鼠血清FGF23水平降低（P<0.05）,肾脏组织中Klotho mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,胸主动脉组织中Pit-1和Runx2 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,胸主动脉组织中SM22α mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：肾元颗粒可通过上调小鼠肾脏组织中Klotho蛋白表达水平,减少Pit-1表达水平,抑制FGF23/Pit-1信号通路,调节血管平滑肌细胞（VSMC）的表型转化,达到血管保护作用。     

雷公藤多苷对比RAAS阻滞剂治疗糖尿病肾脏病有效性和安全性的Meta分析

目的系统评价雷公藤多苷(tripterygium glycosides,TG)对比肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)阻滞剂治疗糖尿病肾脏病的有效性和安全性。方法检索CNKI、CBM、VIP、万方数据、Embase、Pubmed和Cochrane Library数据库;筛选文献,对数据进行Meta分析。结果检索得到14篇文献,纳入826名患者。Meta分析结果显示,TG组治疗糖尿病肾脏病的有效率优于RAAS阻滞剂组,且差异具有统计学意义[OR=3.91,95%CI(1.91,8.01),P=0.0002];TG组UP降低程度优于RAAS阻滞剂组,且差异具有统计学意义[MD=-0.53,95%CI(-0.77,-0.29),P0.0001];TG组BUN降低程度优于RAAS阻滞剂组,且差异有统计学意义[MD=-2.20,95%CI(-2.79,-1.61),P0.00001];TG组与RAAS阻滞剂组在降低Scr方面疗效相当,差异无统计学意义[MD=-5.47,95%CI(-11.04,-0.11),P=0.05];在不良反应上,TG组与RAAS阻滞剂组相当,差异无统计学意义[MD=1.01,95%CI(0.56,1.82),P=0.46]。结论 TG治疗糖尿病肾脏病的总体疗效明显,对UP、BUN水平的降低效果优于RAAS阻滞剂,而在不良反应发生率上与RAAS阻滞剂相当。     

中药联合糖皮质激素治疗IgA肾病的Meta分析

目的为了系统评价中药联合糖皮质激素治疗IgA肾病的疗效,从而更好地指导临床,本文通过Meta分析综合探讨了中药联合糖皮质激素治疗IgA肾病的临床研究情况。方法通过检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、Pubmed、Cochrane Library、Embase数据库中公开发表的中药联合糖皮质激素随机对照试验治疗IgA肾病的相关文献,用Review Manager 5.3软件从总有效率、完全缓解率、24h尿蛋白定量、血肌酐等方面进行Meta分析,并依照Cochrane Collaboration标准和Jadad质量评分法进行检索和对检索的文献质量进行评价。结果根据检索结果和纳入排除标准最终共纳入12项随机对照试验研究的文献,共840例患者。中药联合激素的治疗组比单纯激素治疗组的临床总有效率[OR=3.36,95%CI(2.30,4.91),P0.000 01]、完全缓解率[OR=2.73,95%CI(2.02,3.69),P0.000 01]均更高,降低24h尿蛋白定量值[MD=-0.18,95%CI(-0.21,-0.16),P0.000 01]以及血肌酐值[MD=-10.13,95%CI(-12.11,-8.14),P0.000 01]更明显,差异均有统计学意义。纳入Meta分析的文献质量评分总体较高,总有效率和完全缓解率结果的异质性较低,2组24h尿蛋白定量值和血肌酐的比较虽然I250%,但漏斗图基本对称,提示虽然存在一定的异质性,但结果具有可信性。结论这一系统评价提供了中药联合糖皮质激素比单纯激素治疗IgA肾病疗效更好的证据。     

温肺化纤汤对过氧化氢诱导的肺间充质干细胞氧化应激损伤模型有氧糖酵解功能的影响

目的探讨温肺化纤汤治疗特发性肺纤维化(IPF)其可能机制。方法梯度密度离心法分离提取C57BL/6小鼠肺间充质干细胞(LMSCs)。体外培养LMSCs,采用不同浓度(100、200、300、400、500、600、700、800μmol/L)的过氧化氢(H₂O₂)诱导细胞损伤,MTT法检测LMSCs细胞存活率,选择细胞存活率约为50%的H₂O₂损伤浓度进行后续试验。细胞分为正常对照组、温肺化纤汤组,温肺化纤汤组设浓度为1600、800、400、200、100、50、25μg/ml,MTT法检测温肺化纤汤的毒性。细胞分为正常对照组、模型组、温肺化纤汤组,温肺化纤汤设浓度为1600、800、400、200、100、50、25μg/ml,根据剂量最小化和疗效最大化的原则,结合细胞存活率确定药物的最佳浓度用于后续试验。实验分为正常对照组、模型组、阳性对照组及温肺化纤汤低、中、高剂量组。除正常对照组外,模型组和温肺化纤汤各剂量组分别在温肺化纤汤预处理24 h后均给予H₂O₂造模6 h。造模结束后检测细胞上清中葡萄糖摄取量及乳酸水平,RT-PCR检测有氧糖酵解相关酶己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶2(PKM2)mRNA水平。结果600μmol/L H₂O₂作用于LMSCs 6 h,细胞的存活率为(52.17±0.82)%,并作为后续氧化应激损伤模型的浓度。与正常对照组比较,不同浓度的温肺化纤汤(25~1600μg/ml)对LMSCs均无毒性作用(P>0.05)。与模型组比较,不同浓度(25~1600μg/ml)温肺化纤汤预处理的LMSCs存活率均显著增加(P<0.01);按4倍设定等比浓度梯度,采取终浓度为25、100、400μg/ml温肺化纤汤作为低、中、高剂量组的干预浓度。与正常对照组相比,模型组LMSCs氧化应激损伤后导致葡萄糖摄取量和乳酸含量降低(P<0.01),有氧糖酵解相关酶HK2和PKM2 mRNA水平均下降(P<0.05)。与模型组对比较比,温肺化纤汤各剂量组均可增强葡萄糖摄取量和乳酸的水平(P<0.05),且温肺化纤汤中、高剂量(100、400μg/ml)则增强了HK2、PKM2 mRNA表达(P<0.01)。与阳性对照组比较,温肺化纤汤高剂量组葡萄糖摄取量、乳酸含量均升高(P<0.05)。与温肺化纤汤低剂量组比较,温肺化纤汤中、高剂量组的HK2、PKM2 mRNA水平均明显增高(P<0.05)。结论温肺化纤汤可能通过增强LMSCs的有氧糖酵解改善H₂O₂诱导的细胞氧化应激损伤,从而治疗IPF。     

基于FGF23-Klotho轴探讨肾元颗粒对db/db糖尿病肾病小鼠骨骼的保护作用

目的 观察肾元颗粒对db/db糖尿病肾病小鼠FGF23-Klotho轴的影响，并探讨其对骨骼的保护的可能机制。方法 30只db/db小鼠随机分为模型组（20 mL分为模^-1）、肾元颗粒组（6.0 g粒组模^-1）和厄贝沙坦组（30 mg坦组模^-1），10只同窝野生（wild type, WT）小鼠作为空白组（20 mL为空白^-1），各组小鼠给药容量均为（20 mL给药容^-1）。连续灌胃12周后，采用生化检测仪检测血钙、血磷含量；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组血清成纤维化生长因子23 （Fibroblast growth factor 23，FGF23）含量，以及骨骼钙盐含量、骨骼碱性磷酸酶（ALP）活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测骨骼骨保护素（osteoprotegerin，OPG）蛋白表达水平；免疫荧光双标检测肾脏Klotho和成纤维化生长因子受体1（Fibroblast growth factor receptor 1，FGFR1）蛋白，并于激光共聚焦下观察拍照。结果 与正常组比，模型组小鼠血钙减少，血磷含量升高（P <0.05），小鼠血FGF23含量显著升高（P < 0.05），小鼠骨骼中钙盐含量减少，ALP活性降低（P < 0.05），小鼠骨骼OPG蛋白表达减少（P < 0.05），小鼠肾脏Klotho和FGFR1免疫荧光双标阳性细胞数显著减少（P < 0.05）；与模型组比，肾元颗粒组小鼠血钙升高，血磷减低（P < 0.05），血FGF23含量降低（P < 0.05），骨骼钙盐含量升高，骨骼ALP活性升高（P < 0.05），骨骼OPG蛋白表达量增加（P < 0.05），肾脏免疫荧光双标阳性细胞数增多（P < 0.05）。结论 肾元颗粒能改善db/db糖尿病肾病小鼠骨质的流失，而其作用机制可能与FGF23-Klotho轴平衡恢复有关。     

温肺化纤颗粒通过调节铁死亡改善肺纤维化的机制研究

目的：探讨温肺化纤颗粒是否通过调节铁死亡改善肺纤维化的发生。方法：将50只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、温肺化纤颗粒低剂量（WFHXL）组、温肺化纤颗粒中剂量（WFHXM）组和温肺化纤颗粒高剂量（WFHXH）组。除对照组外，余各组予以气管内滴注博来霉素（5 mg/kg）进行肺纤维化造模。造模后，温肺化纤颗粒低、中、高剂量组小鼠分别给予2.925、5.85、11.7 g/kg温肺化纤颗粒混悬液灌胃，对照组和模型组予以0.1 mL/10 g的生理盐水灌胃，连续28 d。末次灌胃24 h后，采用HE和Masson染色观察小鼠肺脏病理损伤；Real-time PCR检测小鼠肺脏Nrf2、HO-1、NQO1、GPX4 mRNA表达；ELISA检测肺脏组织中GSH、Fe、MDA含量；免疫组化检测肺脏组织中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白含量。结果：与对照组比较，模型组小鼠肺泡间隔增厚、肺泡结构明显损坏，可见明显的蓝色胶原纤维沉积，肺脏组织MDA和Fe含量明显升高（P<0.01）,GSH含量明显降低（P<0.01）;Nrf2、HO-1、NQO1、GPX4 mRNA表达明显降低（P<...