HPLC-ESI-MS鉴定罗氏海盘车中的多种化合物及相关指纹图谱研究

目的：建立高效液相色谱-电喷雾质谱（HPLC-ESI-MS）联用技术用于海洋中药罗氏海盘车有效成分快速鉴定及其指纹图谱研究的方法。方法：对罗氏海盘车药材进行超声波提取，采用HPLC-ESI-MS 对罗氏海盘车粗提物中多种化合物进行分析，并在此基础上建立罗氏海盘车药材的HPLC 特征指纹图谱。结果：结合文献，应用HPLC-ESI-MS 鉴定出罗氏海盘车提取物中的11 种化合物；在化合物鉴定的基础上，建立了罗氏海盘车药材的HPLC 指纹图谱，发现不同批次罗氏海盘车的质量存在差异。结论：本方法可用于罗氏海盘车药材有效成分的快速鉴定及质量控制。     

羟基红花黄色素Ａ抗谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对谷氨酸(Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法以体外原代培养Wistar胎鼠大脑皮层神经元为实验材料，进行形态学观察，采用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst33342/PI双荧光探针染色、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量检测、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及免疫细胞化学法检测细胞色素C（CytC）荧光强度，综合评价HSYA对Glu氧化性神经损伤的保护作用。结果与Glu损伤组相比，HSYA能显著提高细胞相对存活率，维持细胞内较高SOD和GSH水平，降低Glu引起的细胞凋亡率及线粒体内CytC向胞质的释放，以160μg/mL浓度的 HSYA保护效果最为显著。结论HSYA对Glu氧化性神经损伤有显著的保护作用，其机制与抗氧化、抑制细胞凋亡有关。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

目的 研究Rho激酶特异性抑制剂Y-27632对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,分为正常对照组(C组)以及不同浓度Y-27632 2.5、5、10、25、50μmol/L处理组(分别为A1组、A2组、A3组、A4组、A5组).镜下观察HepG2细胞的生长变化,MTT法检测各组HepG2细胞增殖情况.结果 在Y-27632作用下,HepG2细胞失去原有“铺路石”样排列,细胞间连接减少,细胞间隙增大,细胞胞体皱缩、变圆,细胞黏附性下降,有倾向凋亡趋势.与C组相比,不同浓度Y-27632作用后的HepG2细胞光密度值减少,细胞活力相对下降,且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 Rho激酶抑制剂Y-27632能有效抑制人肝癌HepG2细胞增殖.     

绞谷蓝皂苷含药血清对谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究绞股蓝皂苷（gypenosides,GP)含药血清对谷氨酸(glutamic acid ,Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法采用中药血清药理学方法，收集GP含药血清，以体外培养的胎鼠大脑皮层神经元为研究对象，采用倒置相差显微镜观察细胞形态；MTT法测定细胞存活率；Ho33342/PI荧光双染法鉴定细胞死亡方式；生化法检测细胞内超氧化物歧化酶（Super Oxide Dismutase，SOD）活性和谷胱甘肽（L-Glutathione，GSH）含量；流式细胞仪测细胞内游离Ca²⁺变化，综合评价GP含药血清对谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用。结果谷氨酸可导致神经细胞发生凋亡和坏死；GP含药血清能明显拮抗谷氨酸的细胞损伤作用，提高细胞的存活率，维持细胞内较高GSH含量和SOD活性，抑制细胞内游离Ca²⁺浓度的升高。结论GP含药血清能明显拮抗Glu诱导的氧化性神经毒性，以400mg· kg^-1·d^-1GP灌胃含药血清作用最显著。     

小海马 DPPH 自由基清除作用及 HPLC 指纹图谱研究

 目的 采用体外 1 ， 1- 二苯基苦基苯肼（ DPPH ）抗氧化模型对海马提取物的抗氧化性质进行评价，并建立小海马 HPLC 特征指纹图谱，用于小海马药材的鉴别及质量评价。 方法 利用离线 DPPH 抗氧化评价体系对海马不同提取物进行评价，结果表明，海马水提物抗氧化能力最强，在此基础上又探明了海马水提物抗氧化能力随时间和浓度的变化规律，为海马抗氧化活性提供了科学依据。依据抗氧化活性实验结果，建立了海马水提物 HPLC 特征指纹图谱分析方法。 结果 海马水提物大部分化合物达到基线分离，方法的精密度、重现性、稳定性良好；建立小海马药材 HPLC 指纹图谱，采用中药指纹图谱相似度计算软件，对小海马进行真伪辨别和质量评价。 结论 表明该方法简捷、有效，是小海马药材鉴别及质量控制的有效方法。     

HPLC—ESI—MS鉴定罗氏海盘车中的多种化合物及相关指纹图谱研究

目的：建立高效液相色谱一电喷雾质谱（HPLC—ESI—MS）联用技术用于海洋中药罗氏海盘车有效成分快速鉴定及其指纹图谱研究的方法。方法：对罗氏海盘车药材进行超声波提取，采用HPLC—ESI—MS对罗氏海盘车粗提物中多种化合物进行分析，并在此基础上建立罗氏海盘车药材的HPLC特征指纹图谱。结果：结合文献，应用HPLC—ESI—MS鉴定出罗氏海盘车提取物中的11种化合物；在化合物鉴定的基础上，建立了罗氏海盘车药材的HPLC指纹图谱，发现不同批次罗氏海盘车的质量存在差异。结论：本方法可用于罗氏海盘车药材有效成分的快速鉴定及质量控制。     

GPCR-G蛋白融合传感器检测GPCR与G蛋白相互作用的灵敏度

目的 以GPR56-G 蛋白融合传感器为例,建立一种检测 GPCR 与 G 蛋白相互作用的高灵敏方法。 方法 将带有 NanoLuc 荧光素酶(Nluc)的G蛋白α亚基的 N 端融合到 GPCR 的 C 端,构建 GPCR 和G蛋白 α 亚基两者的融合蛋白为实验组,受体和G蛋白共表达作为对照组。在受体表达水平相同的条件下,利用生物发光共振能量转移(BRET)方法检测GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白、GPR56 和 Gα₁₂亚基共表达的组成性活力。利用BRET方法检测GPR56激动剂(P19)对 GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白相互作用的影响。 结果 BRET 比率结果显示,与对照组 GPR56 和 Gα₁₂亚基共表达相比,GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白具有更强的组成性活力(F=424.7,P<0.001);与对照组比较,P19激活实验组的半数有效浓度(EC₅₀)下降,差异有统计学意义(t=13.36,P<0.001),GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白对激动剂(P19)的感知更灵敏,亲和力更强。 结论 GPCR-Gα 亚基融合蛋白系统是一种检测GPCR与G蛋白相互作用更灵敏的方法。     

体外原代培养胎鼠大脑皮层神经元NMDAR1亚基表达的发育性变化

目的 探讨体外原代培养胎鼠大脑皮层神经元NMDAR1（NR1）亚基表达的发育性变化。 方法 利用体外原代培养Wistar孕14～15d胎鼠大脑皮层神经元,采用免疫荧光法鉴定神经元的纯度和NR1亚基在神经元上的定位,采用流式细胞术和免疫印迹法（Western  blot）检测不同培养时间神经元NR1亚基的表达情况 结果 体外原代培养的胎鼠大脑皮层神经元纯度均达到90%以上,免疫荧光标记显示NR1亚基主要分布在神经元胞膜及树突干膜上,流式细胞仪检测培养1、2、3、4、6、9、12d神经元NR1亚基平均荧光强度分别为4.57±0.99、8.18±1.22、13.67±1.99、20.33±1.03、26.30±2.88、31.71±2.47、28.63±1.40,Western blot显示细胞膜蛋白中NR1亚基在1～2d表达微弱,3～6d表达逐渐增高,6d以后保持稳定。  结论 体外原代培养的胎鼠大脑皮层神经元NR1亚基有发育性变化,这种变化与神经元的成熟度有关。     

灰树花多糖对四氯化碳肝L-02细胞损伤的保护作用

目的 探讨灰树花多糖（PGF）对四氯化碳诱导的肝L-02细胞损伤的保护作用。 方法 培养人肝L-02细胞,建立CCl4肝细胞损伤模型,分组实验：正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度的PGF（50 、100、200和400μg/mL）保护组。采用形态学观察,MTT检测,生化分析培养液中ALT、AST活性及细胞内SOD活性、MDA含量,流式细胞仪检测线粒体膜电位、荧光探针观测胞内Ca2+浓度;Western blot检测细胞bcl-2、bax蛋白表达。结果与CCl4损伤组相比,各PGF保护组细胞活力明显增强,上清液中ALT、AST活性明显降低; 细胞内SOD明显升高、Ca2+浓度MDA含量降低,细胞bcl-2的表达上调、 bax的表达下调。以100μg/mL浓度保护效果最佳。结论 PGF对CCl4诱导的肝L-02细胞损伤有明显的保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制肝细胞内Ca2+浓度的升高、改变凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达水平,有效地防止线粒体膜电位的下降、减少细胞凋亡有关。