D-半乳糖刺激小鼠睾丸TM4支持细胞分泌功能的衰退及其机制

目的采用D-半乳糖(D-Gal)刺激小鼠TM4睾丸支持细胞,建立衰老所致TM4细胞分泌功能衰退模型。方法将小鼠TM4睾丸支持细胞分为正常对照组、(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-Gal刺激组。MTT法检测TM4细胞活力、流式细胞术检测细胞周期、光镜观察细胞形态、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老细胞百分率;反转录PCR检测P21、P16、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和干细胞因子(SCF)的mRNA水平;Western blot法检测GDNF、SCF、红系2样核因子2(nuclear factor,erythroid 2 like 2,NRF2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)的蛋白水平。结果与正常对照组比较,D-Gal刺激组细胞活力显著下降;处于G1期的细胞比例增高、S期细胞比例降低,细胞阻滞于G0/G1期;SA-β-Gal染色阳性率明显增多,衰老基因P21 mRNA表达上调,GDNF和SCF mRNA及蛋白水平均显著下调;氧化应激相关蛋白NRF2、HO-1和NQO-1的蛋白水平显著降低。结论成功建立D-Gal刺激的TM4睾丸支持细胞分泌功能衰退模型,衰老机制可能与下调NRF2信号通路有关。     

心跳骤停院前早期心肺复苏对心肺复苏成功率的影响

目的对呼吸心跳骤停的院前急救的抢救与转运措施进行简要的分析.方法抽取2011-2012年这一段时间里我院对呼吸心跳骤停的患者进行院前急救的抢救与转运案例98例,对这些资料进行回顾性分析.结果对这98例案例进行仔细的研究与分析得出抢救与转运措施与患者发病的原因、年龄、时间、地点等因素有关.结论心脏骤停是一种突发性疾病,对其实施及时的抢救措施具有十分重要的临床意义.     

三种GC-1细胞DNA损伤模型的建立及比较分析

目的建立3种小鼠睾丸精原细胞株GC-1细胞DNA损伤模型并分析其异同。方法分别采用UVB辐照、D-半乳糖(D-Galactose,D-Gal)、博来霉素(bleomycin,BLM)刺激GC-1细胞不同时间,Western blot和免疫荧光法检测γ-H2AX表达及定位;免疫荧光法检测8-OHdG表达及定位;Western blot法检测p-p53和p21表达水平。结果UVB辐照和D-Gal处理后,γ-H2AX蛋白表达分别在4 h和6 h达高峰BLM刺激后,γ-H2AX蛋白表达逐渐上升且BLM浓度越高,其达到高峰时间越短。UVB辐照和BLM刺激后,胞核胞质内均有8-OHdG表达,且时间越长,核内表达越多;D-Gal处理后,8-OHdG主要表达在胞质,且在6 h达高峰。UVB辐照后,p-p53和p21蛋白表达不断上升,p21表达较滞后;D-Gal处理后,p-p53和p21表达分别在6 h和12 h达高峰;BLM刺激后,p-p53和p21蛋白表达呈同步上升趋势,BLM浓度越高,其达高峰时间越短。结论成功建立3种GC-1细胞DNA损伤模型,且D-Gal处理GC-1细胞DNA损伤较轻,而UVB辐照和BLM刺激DNA损伤较重。     

多重PCR在多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因检测中的应用

目的 建立能够同时检测多重耐药鲍曼不动杆菌(Multidrug-Resistant Acinetobacter Baumannii , MDRAB)多个耐药基因的多重PCR反应体系,了解MDRAB耐药基因分布情况,为临床治疗及感染控制MDRAB提供分子生物学依据。 方法 针对MDRAB 4种耐药基因blaoxa-23、blaAde-B、blaint-1及blaISCR-1分别设计4对引物,设计反应条件在同一PCR反应体系中同时检测这4种耐药基因,并采用建立的多重PCR反应体系检测临床分离MDRAB耐药基因携带情况。结果 本研究成功建立了一个可以同时检测4种MDRAB耐药基因的多重PCR反应体系,临床分离68株MDRAB耐药基因检测显示,1株同时携带有4种耐药基因,5株携带有blaAde-B、blaint-1及blaISCR-1,62株携带有blaoxa-23和blaAde-B。结论 多重PCR可以快速、高效、低成本检测MDRAB携带的耐药基因,多重PCR检测显示blaoxa-23及blaAde-B 是MDRAB携带的主要耐药基因。     

院前急救在重型颅脑损伤中临床效果分析

目的：探讨院前急救对重型颅脑损伤患者临床效果。方法：选择我院2013年1月~2016年1月急性重型颅脑损伤患者180例，分为观察组和对照组。对照组患者由家属送到急诊室做院内急救。观察组患者实施院前急救。观察两组患者接受救治时间、昏迷天数、住院时间；根据格拉斯哥预后评分，对患者进行预后评定。结果：观察组的患者急救时间明显缩短，治愈好转率提高，死亡率明显下降，两组对照差异具有统计学意义，P<0.05。结论：给予重型颅脑损伤患者及时合理的院前急救是改善患者预后的关键，能够有效提高救治成功率和降低病死率。     

肺炎链球菌自溶酶(LytA)黏膜免疫小鼠的生物安全性评价

目的开展肺炎链球菌自溶酶（LvtA）生物安全性的动物实验研究,为其申报生物制品鉴定提供实验数据。方法制备纯化的重组表达LytA蛋白,以6．5μg、13．0μg和19．5μg3种剂量黏膜免疫BALB／c小鼠,根据《中华人民共和国国家标准食品安全性毒理学评价程序》（GB15193．1—1994）进行LytA的90d喂养试验、传统致畸试验及遗传毒性试验检测,以分析其生物安全性。结果90d喂养试验结果显示各实验组小鼠与对照组小鼠的体重增长趋势一致,且各时间点检测的小鼠体重均无显著性差异（P〉0．05）。传统致畸试验检测发现各实验组小鼠与对照组小鼠心脏、肺、肝脏、肾、脾、胃、子宫重量、红细胞和白细胞数目、谷丙转氨酶、尿素氮、总胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、自蛋白及球蛋白等指标均元明显差异（P〉0．05）。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果显示LytA经鼻腔黏膜免疫小鼠无遗传毒性。结论利用90d喂养试验、传统致畸试验及遗传毒性试验证明LytA鼻腔黏膜免疫BALB／c小鼠安全、毒副作用不明显,有良好的生物安全性,值得进一步研究。     

增龄对大鼠睾丸自噬水平和血睾屏障完整性的影响

目的探究增龄过程中大鼠睾丸自噬水平的变化及其对血睾屏障的影响。方法HE染色法观察6、12、18和24月龄SD♂大鼠睾丸组织形态学的变化。Western blot法检测各组大鼠睾丸自噬相关蛋白Beclin1、ATG5、ATG7和LC3Ⅱ,以及血睾屏障相关蛋白Occludin和β-catenin的表达水平变化。免疫荧光法检测睾丸自噬相关蛋白Beclin1和LC3,以及血睾屏障相关蛋白β-catenin的蛋白表达及定位。结果HE染色观察发现,增龄过程中大鼠睾丸组织形态结构发生明显变化,生精小管萎缩,生精细胞层数减少,细胞间间隙增大,且发生部分脱落现象;Western blot结果显示,增龄过程中大鼠睾丸自噬相关蛋白Beclin1、ATG5、ATG7和LC3Ⅱ,以及Occludin和β-catenin表达水平均逐渐下降;免疫荧光结果显示,增龄过程中大鼠睾丸生精小管上皮细胞中Beclin1和LC3蛋白表达逐渐下调,并且血睾屏障标志蛋白β-catenin表达也逐渐下降。结论增龄过程中大鼠睾丸生精功能减退,其机制与睾丸生精上皮细胞自噬水平下降,进而破坏血睾屏障的完整性有关。     

临床分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌同源性及耐药基因携带研究

摘要 目的 研究临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)同源性及其耐药基因携带率,为有效防控CRKP感染提供理论依据。方法 采用基因分析(PCR)技术,对某医院临床分离的CRKP菌株进行耐药基因检测与分析。结果 共分析临床分离的CRKP 47株,对该医院临床常用20种抗菌药中的16种耐药率达到90%以上。该医院分离的CRKP主要来源于患者痰液,占分离总菌株数的68%,患者主要来自重症监护病房。47株CRKP中,有41株检出blaKPC-2,33株检出blaCTX-M-1-like,6株检出blaCTX-M-9-like,3株菌检出blaNDM-1。47株CRKP同源性分析显示,A型6株、B型11株及C型19株。结论 该医院临床分离的47株CRKP携带多种耐药基因,以blaKPC-2和blaCTX-M-1-like为主,共分布在3种同源菌型,必须加强CRKP监测和抗菌药物管理。     

浅析院前急救

目的对在院前急救的重要性以及特点和院前急救目前的现状等进行简要的分析.方法抽取在2011-2012年这一段时间内我院院前急救科所接受的急救患者病例106例,对这些病例的资料进行回顾性分析,总结院前急救的重要性以及特点和院前急救的现状等.结果本院救护车配备为良好,几乎车的空车率为27.7%左右,需要进行院前急救的病种主要为交通伤、急腹症、治安伤、突发心脏病等.患者的年龄分布较大一般在18-72岁之间不等,在所抢救的患者中外科患者所占比例较大一般为占58.6%左右.呼叫响应间期大约为10-15分钟左右.结论院前急救对临床工作而言具有十分重要的作用,在进行院前急救时要结合该地区的一些特点,对急救资源予以合理有效地利用,要加强相关人员的急救技术培训工作,确保急救能够真正做到及时有效.     

淫羊藿苷激活Nrf2/HO-1信号通路减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为青年对照组(2月龄)、衰老模型组(16月龄)和淫羊藿苷低、高剂量组(2、6 mg/kg,16月龄),每组8只,给予普通或含药饲料饲养4个月,禁食12 h后处死大鼠。HE染色法观察睾丸组织形态变化;黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平;免疫荧光法检测睾丸组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达和定位;Western blotting法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、γ-H2AX和DNA损伤修复相关蛋白p-p53和p21表达水平。结果HE染色结果表明,淫羊藿苷能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化,显著提高衰老大鼠睾丸组织SOD活力,降低MDA水平;免疫荧光结果显示,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸组织中各级生精细胞内Nrf2蛋白表达水平,明显下调初级精母细胞和精原细胞中γ-H2AX蛋白表达水平;Western blotting结果显示,淫羊藿苷能显著上调衰老大鼠睾丸组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平,下调γ-H2AX、p-p53和p21蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。