扇贝多肽的毒理学研究

目的 研究扇贝多肽的毒理学作用.评价其安全性.方法 以小鼠为受试动物,采用一次性静脉注射和腹腔注射给药两种方法.观察扇贝多肽的急性毒性反应;应用小鼠骨髓细胞微核试验、染色体畸变实验和伤寒沙门菌基因回复突变实验研究扇贝多肽的致突变作用.以大鼠为受试动物,通过血液生化学指标的检测和心、肝、脾、肺、肾等主要脏器的病理组织学检...     

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

 目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol·L^-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol·L^-1PCF组、UVA+2.84mmol·L^-1 PCF组、UVA+1.42mmol·L^-1 PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69mmol·L^-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。     

扇贝多肽经由EGFR-CDK-4通路抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

目的建立8J.cm-2紫外线A(UVA)辐射损伤永生化的人角质形成细胞株(HaCaT)细胞的病理模型,经由信号通路的表皮生长因子受体(EGFR),磷脂酰肌醇-3激酶(AKT),细胞周期蛋白(CyclinD1)至周期蛋白依赖激酶4(CDK-4)角度研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法采用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR和DNA测序法检测胞内表皮生长因子受体EGFR的mRNA表达及基因变化;蛋白印迹法检测AKT,p-AKT,CyclinD1及CDK-4的蛋白表达水平。结果EGFR抑制剂AG1478和AKT抑制剂PHZ1023均可阻断UVA引起的细胞凋亡;1.42～5.68mmol.L-1范围内的PCF可抑制UVA辐射后细胞内EGFR的表达量。预先加入AG1478和PHZ1023则分别抑制UVA引起的AKT及CyclinD1,CDK-4蛋白水平的表达。结论PCF可以通过阻断EGFR-CDK-4通路来抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡。     

一株壳聚糖酶产生菌的鉴定和产酶条件优化D张子瑞1,2,孙谧1*,郝建华1,刘均忠1

对一株产壳聚糖酶菌株Y116进行了形态学观察、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列同源性分析,初步确定该菌株属于芽孢杆菌属(Bacillus)。采用单因素法和响应面法,对菌株Y116产酶的培养基成分和培养条件进行了优化。首先筛选碳源、氮源、初始pH、金属离子、NaCl浓度、酵母浸粉浓度、接种量、发酵温度和时间8个因素。研究结果显示：当酶活达到最高值时,最终确定各因素的值分别为：乳糖 35 g/L,豆饼粉30 g/L, Mg₂₊ 0.5 g/L,NaCl 5 g/L,初始pH 5.0,接种量5%,培养温度30 ℃和发酵时间96 h。再通过Plackett-Burman(PB)设计对影响壳聚糖酶产量的8个主要因素进行评价,确定了豆饼粉浓度、初始pH和Mg₂₊浓度是影响产酶量的3个主要因素;利用中心组合设计(CCD)及响应面分析,最终得到3个主要因素的最优值：豆饼粉浓度39.44 g/L,pH 5.12,Mg₂₊ 浓度5.12 g/L,酶活力比优化前提高了5倍。     

固载化木聚糖酶交联酶聚集体的制备及性质D

目的 提高木聚糖酶YS1069的稳定性、重复利用率以及便于从反应体系中分离。方法 本文将交联酶聚集体CLEAs技术与载体固定化技术相结合,用LKZ-128氨基型树脂对木聚糖酶CLEAs进行固定化,并对其性质进行初步研究。结果及结论 采用单因素法和响应面法对影响固定化酶活性的因素进行分析和优化,获得最佳固定化条件为: pH 9.0的酶液,以2 mL的异丙醇为沉淀剂,沉淀1 h,以1.59 g/L的京尼平为交联剂,交联2 h,20 ℃的环境中固定化9.25 h,加酶量为8 mg时回收率最高,达到65.63%,加酶量为60 mg时酶活性最高,达到190 U/g。重复使用10次后,其相对酶活仍为42.3%,说明具有良好的批次操作稳定性。该酶经过固定化后热稳定性和pH稳定性均得到了提高。     

扇贝多肽经Smac-XIAP通路抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的作用

目的 探讨扇贝多肽(PCF)经半胱天冬酶激活物(Smac)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)通路对抑制中波紫外线(UVB)诱导HaCaT细胞凋亡的分子机制.方法 实验分为如下6组:正常对照组(A组)、UVB模型组(B组)、UVB+1.42 mmol/L PCF组(C组)、UVB+2.84 mmol/L PCF组(D组)、UVB+5.68 mmol/L PCF组(E组)和UVB+5.68 mmol/L维生素C阳性对照组(F组),分别进行相应处理.分别采用琼脂糖凝胶电泳和Hochst 33258染色法测定各组细胞凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)检测胞浆内Smac的水平,RT-PCR检测XIAP mRNA表达.结果 B组与A组比较,细胞凋亡率显著降低(F=165.096,q=36.535,P<0.01),胞浆Smac明显增加(F=174.311,q=33.106,P<0.01),XIAP mRNA表达显著减少(F=97.141,q=26.147,P<0.01);预先加入药物各组(C、D、E、F组)与B组相比,细胞凋亡率降低(q=11.369～28.592,P<0.01);C、D、E组与B组相比较,胞浆Smac含量明显降低(q=9.191～26.180,P<0.01),XIAP表达增加(q=8.073～17.618,P<0.01).且随着PCF浓度的增加,细胞凋亡率降低(q=7.259～9.965,P<0.01),胞浆Smac含量降低(q=6.926～10.063,P<0.01),XIAP表达增加(q=3.706～5.839,P<0.05).结论 PCF在1.42 ～5.68 mmol/L浓度范围内可呈剂量依赖性地抑制Smac从线粒体释放到胞浆,上调XIAP mRNA 的表达,抑制caspase-3的活化,从而抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡.     

海洋芽孢杆菌S-12低温溶菌酶体外对PRV和PRRSV抑制作用的研究

目的研究海洋芽孢杆菌S-12低温溶菌酶体外抗伪狂犬病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用及其作用机制。方法以利巴韦林为阳性对照药物,通过细胞病变效应(CPE)观察样品溶菌酶分别对PRV和PRRSV感染细胞的封闭作用、直接灭活作用、在细胞内增殖的抑制作用以及预防作用,从而对其抗病毒机制进行初步研究。结果海洋芽孢杆菌S-12溶菌酶对猪肾细胞的半数中毒浓度(TC50)为100mg·L-1,其药物的封闭作用、直接灭活作用、在细胞内增殖的抑制作用以及预防作用的半数有效浓度(EC50)分别为3.95、9.94、2.23和3.78mg·L-1,对应的治疗指数(TI)为25.3、10.1、...     

牡蛎多肽抗血管生成作用研究

背景与目的血管发生、新血管的形成是肿瘤生长及其转移灶形成的根本原因,因此,抗血管生成治疗已成为目前一种极具潜能的肿瘤治疗策略。本实验利用鸡胚胎模型和人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein en-dothelial cells,HUVECs)对牡蛎多肽(Oyster polypeptide,OPP)在体内及体外的抗血管生成作用及其机制进行了研究。方法利用鸡胚胎绒毛尿囊膜血管发育研究体内OPP对血管形成作用;MTT、平板划痕、Transwell板、管腔形成及电镜等方法观察OPP对HUVECs的增殖、迁移、侵袭等作用。结果体内实验表明OPP能明显抑制鸡胚胎绒毛尿囊膜血管的形成。MTT结果表明OPP能明显抑制HUVECs的增殖,IC50为400μg/mL。平板划痕法结果表明,200μg/mL、400μg/mL和800μg/mL OPP作用12h对HUVECs迁移的抑制率分别为18.75%、37.93%和74.07%;侵蚀实验结果显示200μg/mL、400μg/mL和800μg/mL的OPP对HUVECs迁移的抑制率分别为15.5%、37.29%和67.24%(P<0.05)。管腔形成结果表明20...     

海洋低温溶菌酶对阴道炎常见致病菌的作用

①目的 评价海洋低温溶菌酶对阴道炎常见致病菌的体外抗菌活性。②方法 采用琼脂平皿二倍稀释法测定海洋低温溶菌酶对阴道炎常见致病菌白色念珠菌、生孢梭菌以及金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。③结果 海洋低温溶菌酶对白色念珠菌、生孢梭菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌均有较好的抗菌活性，其MIC分别为39．07、9．75、10．94、10．94μmol／L，MBC分别为39．07、19．57、10．94、21．88μmol／L。④结论 海洋低温溶菌酶对一些阴道炎常见致病菌有较好的抗菌活性。     

扇贝多肽在中波紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡中对p38MAPK-HSP27通路的影响

目的从p38MAPK-HSP27通路方面研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制中波紫外线(UVB)诱导的HaCaT细胞凋亡的作用机制。方法复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.69mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol.L-1PCF组、UVB+2.84mmol.L-1PCF组、UVB+1.42mmol.L-1PCF组。PCF预处理30min,荧光染色(Hoechst33258)结合琼脂糖凝胶电泳分析PCF在p38抑制剂(SB203580)存在和不存在两种条件下对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK、HSP27的表达及磷酸化水平的改变,同时分析HSP27在细胞内定位的改变。结果PCF可明显抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF在1.42~5.69mmol.L-1范围内,可剂量依赖性抑制p38MAPK和HSP27的磷酸化水平,并抑制HSP27由胞质向胞核中的移位。结论PCF通过阻断p38MAPK-HSP27通路来抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK的活化从而阻止HSP27的磷酸化及其细胞内移位有关。