内镜及活检病理对回盲部溃疡的鉴别诊断

目的评价内镜及活检病理对回盲部溃疡性病变病因的诊断价值。方法经内镜检查发现回盲部溃疡，结合临床表现和活检病理对证实的回盲部溃疡改变如肠结核病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、恶性淋巴瘤、大肠癌（溃疡型）进行鉴别诊断。结果内镜检查对溃疡性结肠炎、大肠癌较易诊断；对肠结核病、克罗恩病、恶性淋巴瘤诊断率不高。内镜组织活检病理形态学研究表明：异型淋巴细胞、异型上皮、类上皮结节合并干酪样坏死分别相对于恶性淋巴瘤、溃疡型大肠癌和肠结核病均有确诊意义（P〈0．05）；单纯类上皮结节（即结节样肉芽肿）见于克罗恩病和肠结核病，若未发现肠结核干酪样坏死，两者不易鉴别；隐窝脓肿多见于溃疡性结肠炎，但该病理特征诊断意义不强，可见于多种病变。结论回盲部病变以溃疡型病变最为多见。内镜及活检组织病理学检查对回首部溃疡病变的诊断是安全有效的，综合分析其结果可进一步提高诊断准确率。     

表达LTB乳酸杆菌提高艰难梭菌类毒素疫苗黏膜免疫效应的研究

目的 通过构建大肠埃希菌热敏性肠毒素B亚单位 (heat labile enterotoxin B subunit, LTB) 乳酸杆菌表达载体,研究其对艰难梭菌类毒素疫苗的黏膜免疫保护效应。方法 克隆LTB基因,制备pSIP411-LTB重组质粒,电转化到乳酸杆菌中,制备乳酸杆菌表达LTB载体;通过透析和层析等技术纯化艰难梭菌A毒素和B毒素,经甲醛处理获得的艰难梭菌A毒素和B毒素的类毒素作为疫苗候选抗原;在第0 d、第14 d和第28 d皮下接种小鼠艰难梭菌类毒素和口服乳酸杆菌表达LTB载体;在初次接种后第0 d、10 d、24 d和38 d检测抗A毒素和B毒素的血清IgG和粪便IgA;第34 d,小鼠经口感染艰难梭菌,观察疫苗保护效果。结果 成功构建了LTB乳酸杆菌佐剂表达载体和制备了艰难梭菌A毒素和B毒素的内毒素;各疫苗组和疫苗+LTB佐剂组小鼠在感染艰难梭菌后,均无腹泻、体重减轻和死亡现象,而对照组老鼠腹泻发病率为100%,死亡率42.86%,5 d体重下降0.83 g;在初次接种后的10 d、24 d和38 d,与空白组比较,各疫苗组抗A毒素或B毒素的血清IgG及粪便IgA显著升高(F=284.93,1 037.05,696.82,74,184.07,166.95,P<0.01);与疫苗组比较,接种疫苗+LTB佐剂组的血清IgG及粪便IgA显著升高(F=21.88,27.22,8.31,56.49,63.76,101.78,P<0.05)。结论 艰难梭菌A毒素和B毒素的类毒素作为疫苗的候选抗原对艰难梭菌的感染具有很好的保护效应,LTB乳酸杆菌载体表达佐剂能够提高免疫动物的抗体效价,增强黏膜免疫效应。     

复方抗感灵颗粒质量标准研究

目的建立复方抗感灵颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中金银花、连翘进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对制剂中绿原酸的含量进行测定,采用Diamonsil C18柱分离,以乙腈-0.4%磷酸(20∶80,V/V)为流动相,流速为1.0 mL/min。结果通过薄层鉴别,分别检出金银花中的绿原酸、连翘中的连翘苷。通过高效液相色谱法测得制剂中绿原酸的线性关系为A=30 461C-5938.8,r=0.9998,RSD=1.01%,表明绿原酸在10.2~102.0μg/mL范围内有良好的线性关系。结论该方法准确、快速、稳定、可靠,重复性好,可用于该复方制剂的质量控制及评价。     

艰难梭菌毒素B诱导结肠癌细胞凋亡及相关机制研究

目的检测艰难梭菌毒素B(TcdB)对结肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响,研究其引起细胞凋亡的相关机制。方法采用不同浓度的TcdB处理SW480细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞的凋亡及线粒体膜电位变化情况。结果TcdB显著抑制了结肠癌SW480细胞的增殖,作用48 h后的抑制率为46.36%,呈一定的时间-浓度相关性;流式细胞仪检测结果表明,浓度为800 ng/ml的TcdB作用48 h,SW480细胞凋亡率为20.83%,呈一定的时间-浓度相关性。结论艰难梭菌毒素B能够抑制结肠癌SW480细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与启动线粒体凋亡途径有关。     

抗艰难梭菌A毒素单克隆抗体的制备及特性分析

目的 :制备抗艰难梭菌A毒素的单克隆抗体 (mAb)并鉴定其特性。方法 :用纯化的艰难梭菌A毒素免疫BALB/c小鼠 ,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2 / 0融合 ,采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞。用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析 ;用Westernblot检测mAb的特异性。结果 :得到 6株杂交瘤细胞株 ,5C10株细胞分泌的mAb为IgG2a ,4B5和 8A1株细胞分泌的mAb为IgG1,其他 3株细胞mAb (2H7、3E9和 6G8)均分泌IgM。中和试验表明 ,所有的mAb均无中和活性。腹水mAb的效价均在 10 -4以上 ,其中mAb 2H7、6G8、5C10、4B5和 8A1具有共同的表位 ,而mAb 3E9识别的位点与其他 5株不同。mAb 8A1和 4B5的相对亲和力>10 5,其他 4株mAb的相对亲和力 >10 4。在非变性条件下 ,PAGE后Westernblot的结果显示 ,6株mAb均可与相对分子质量 (Mr)为 5 5× 10 4的A毒素产生反应 ;而在变性条件下 ,还原与非还原SDS PAGE后Westernblot均显示 ,6株mAb均可与Mr 为 5× 10 4～ 2 4× 10 4的A毒素产生反应。结论 :6株杂交瘤细胞株均能分泌抗艰难梭菌A毒素的特异性mAb ,为艰难梭菌A毒素的研究提供了有利的工具     

阻抑eIF-4E对大肠腺癌LS-174T细胞乙酰肝素酶mRNA及其翻译表达水平的影响

目的:确定阻抑结肠癌LS-174T细胞中过量表达的真核细胞起始因子-4E(eukaryoticinitiationfactor-4E,eIF-4E)是否促进乙酰肝素酶(heparanase)mRNA的降解,并改变其翻译表达水平。方法:应用脂质体包裹与eIF-4EmRNA翻泽起始点互补的asODN,转染处理人大肠腺癌细胞LS-174T。使用Westernblot和RT-PCR方法分别检测eIF-4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变。乙酰肝素酶mRNA在细胞内水平采用Northernblot定量检测,其蛋白表达水平改变采用Westernblot检测。结果:asODN经脂质体转染LS-174T细胞后,eIF-4E基因表达明显受到抑制,其蛋白表达产物也显著下降。伴随eIF-4E被阻抑表达,Northernblot结果显示乙酰肝素酶mRNA水平下降,且其蛋白翻译表达量也降低。结论:阻抑eIF-4E影响LS-174T细胞乙酰肝素酶mRNA稳定、促使其降解,并降低乙酰肝素酶表达。     

冬虫夏草菌丝体对肠道菌群失调小鼠血清VIP及SP的影响

目的 观察冬虫夏草菌丝体对抗生素诱导的菌群失调小鼠血清血管活性肠肽(VIP)及P物质(SP)含量的影响。方法 SPF级健康BALB/c小鼠48只,通过自由饮用头孢曲松钠溶液构建肠道菌群失调模型,设正常对照组(正常饮水)、模型组(饮用0.5g/L头孢曲松钠溶液)、自然恢复组(建模成功后将抗生素溶液换为无菌水)及菌丝体治疗组(将抗生素溶液换为无菌水1d后,采用冬虫夏草菌丝体灌胃1周)4组,每组12只。受试小鼠无菌取粪便,应用平板稀释法培养分析各组肠道菌群数的变化,色谱法测各组挥发性脂肪酸含量,ELISA法测血清VIP和SP含量。结果 与正常对照组比较,模型组益生菌群数明显减少,挥发性脂肪酸含量明显降低,VIP含量明显降低,SP含量明显升高(P<0.01)。与自然恢复组比较,菌丝体治疗组双歧杆菌、乳酸杆菌数量,挥发性脂肪酸及血清VIP含量均明显升高,而SP含量明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论 冬虫夏草菌丝体可能通过调节VIP和SP水平来调整菌群失调小鼠肠道内有益菌的比例。     

酪酸酸菌—婴儿型双歧杆菌二次联活菌制剂的研究

酪酸树菌对婴儿型双皮杆菌的增殖和发育有刺激作用，酪酸梭菌－婴儿型双歧杆菌二联活菌剂剂小鼠包性毒性ＬＤ５０大于１００００ｍｇ／ｋｇ，样品无毒；（２）Ａｍｅｓ试验各剂量组在加与不加Ｓ９活化系统的条件下均无诱变化；（３）灌服抗生素后小鼠肠道中菌群失调。     

中国东乡族、保安族、裕固族儿童口腔细菌学检测分析

目的了解东乡族、保安族、裕固族儿童龋齿的流行情况,并分析导致龋齿的细菌因素,为进一步预防及控制龋齿提供依据。方法选取3个民族的100名5岁儿童和165名12岁儿童,由口腔专业医师按照世界卫生组织的诊断标准及方法进行龋齿检查、测定唾液和牙菌斑中变异链球菌水平以及对牙菌斑的细菌学涂片进行分析。结果东乡族、保安族、裕固族儿童龋齿患病率的差异无统计学意义(P>0.05)。5岁儿童唾液中的变异链球菌水平东乡族以2级(32.0%)和3级(56.0%)为主,裕固族以0级(60.0%)和1级(32.0%)为主,两者间的差异有统计学意义(P<0.05);12岁儿童唾液中的变异链球菌水平东乡族以3级为主(48.0%),保安族以2级(27.3%)和3级为主(38.2%),裕固族以0级(48.3%)和1级为主(33.3%),3组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。同一民族12岁儿童4个牙菌斑部位的变异链球菌分布及程度较一致,但东乡族儿童牙菌斑的变异链球菌水平以2级和3级为主,保安族和裕固族儿童均以0级和1级为主,不同民族间4个牙菌斑部位变异链球菌水平的差异均有统计学意义(P值均<0.05)。各族5岁儿童与12岁儿童正常牙的牙菌斑细菌含量球菌和杆菌比例的差异均无统计学意义(P值均>0.05),但龋齿的牙菌斑细菌含量为球菌比例升高、杆菌比例下降,其中5岁儿童正常牙与龋齿的球菌和杆菌比例的差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论东乡族、保安族、裕固族儿童的龋齿患病率较低,东乡族儿童唾液和正常牙的牙菌斑中变异链球菌数量较多,各族儿童患龋后口腔细菌中球菌和杆菌的数量发生明显变化。