利用重组人α乳清蛋白和油酸大量快速制备高活性的HAMLET肿瘤杀伤复合物

目的可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一种可导致多种癌细胞死亡的强效选择性肿瘤杀伤蛋白质-脂酸复合物。为了使HAMLET应用于肿瘤的治疗并对其杀伤机制进行探讨,我们需要建立和优化简便、快速、规模化制备与纯化HAMLET的方法。方法通过构建人α乳清蛋白分泌型细胞MCF-7的cDNA文库,PCR扩增出编码人α乳清蛋白成熟肽段的全长序列,然后克隆入pET30a(+)表达载体质粒,并转化BL21(DE3)宿主大肠杆菌。经过IPTG诱导,表达细菌的裂解,蛋白体外复性,Ni-NTA亲和层析柱纯化等步骤,获得了高纯度的重组人α乳清蛋白的C端His标签融合蛋白。纯化蛋白经EDTA脱钙后,与油酸(oleic acid,OA)在加热条件下制备HAMLET复合物。同时,对HAMLET的理化特性和生物学活性进行检测。结果通过与经典方法制备的牛α乳清蛋白和OA复合物(BAMLET)进行比较,发现我们制备的HAMLET在紫外吸收光谱、疏水性质特征及肿瘤杀伤活力方面与BAMLET活性相符,并且可引起HeLa肿瘤细胞的凋亡样程序性死亡。结论本研究自主制备的HAMLET成本经济、方法简便且具有较好的规模化放大前景,为日后临床应用奠定基础。     

pGAPZαA/HD5酵母表达载体的构建

目的 利用分子生物学技术和方法将pGAPZαA质粒改建为带有人防御素5(HD5)基因的新型表达载体pGAPZαA/HD5,为大量生产和提纯具有生物活性人防御素5抗菌肽的研究提供实验基础.方法 PCR技术,以设计的引物P1/P2从克隆载体pMD18-T/HD5中扩增人防御素5基因片段,并将扩增出来的目的 基因和pGAPZαA质粒用EcoRI和XbaI双酶切后连接构成重组质粒,然后转化至E.coli Top10感受态细胞,筛选阳性克隆.最后对PCR及酶切鉴定含有目的 基因的克隆进行测序和电泳.结果 获得HD5基因片断大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的 基因的正确序列;电泳结果证明已将此片段克隆到pGAPZαA内.结论 成功构建了HD5基因的新型表达载体pGAPZαA/HD5.     

比格犬黑皮质素受体3基因A167T对体质量性状的影响

背景：MC3R基因突变是引起体质量增加的重要因素之一。 目的：分析比格犬MC3R基因突变与体质量性状的关系。 方法：抽取112只比格犬血液,记录体质量数据,然后提取DNA;采用AS-PCR技术对MC3R基因A167T位点进行分析,并克隆测序。观察比格犬MC3R基因T167A的基因型分布及其与体质量的关系。 结果与结论：167位点表现为A、T 2个等位基因和AA、AT及TT 3种基因型;T167A碱基置换对犬体质量有显著影响(P < 0.05)。表明MC3R基因突变可致犬体质量增加,可作为犬体质量标记的候选基因。     

基于临床应用能力培养的局部解剖学课程教学实践

目的 培养具有临床思维、初步临床技能和高尚的人文素养的医学应用型人才,以提高其临床岗位胜任力.方法 选取2019级临床医学专业本科生,通过完善相关临床线上教学资源,理论授课加强临床联系,增加以临床案例为基础的线下翻转式教学;实验课解剖操作以临床外科手术为导向进行设计,增加制作"小件标本"环节;将课程思政教育贯穿于整个教...     

油酸联合胰岛素和地塞米松诱导hADSCs成脂

目的 利用油酸联合胰岛素和地塞米松诱导人脂肪间充质干细胞(human adipose derived stromal cells,hADSCs)成脂,探索一种在人体内脂肪细胞生成的诱导条件,更接近人的生物学状态,对疾病预防、治疗具有指导意义.方法 从人大腿部吸脂术所抽取的脂肪组织,分离培养hADSCs,并进行鉴定:免疫荧光染色法检测细胞表面分子的表达;进行成脂、成神经诱导.采用25、50和80μmol/L三种浓度的油酸联合胰岛素和地塞米松诱导hADSCs的成脂,油红O染色观察细胞成脂情况.结果 分离原代细胞,镜下观察呈长梭形,漩涡状排列,表面标记物CD49d和CD105为阳性表达.细胞成脂诱导后,胞浆出现大量脂滴,油红O染为红色;经神经诱导后,细胞伸出细长突起,突起之间有网状连接.油酸联合胰岛素和地塞米松可成功诱导hADSCs成脂:可见细胞内脂滴形成,油红O染为红色,三种浓度以80μmol/L浓度组油红O阳性细胞率最高.结论 成功从人大腿皮下脂肪分离、培养hADSCs,并使用80μmol/L油酸联合胰岛素和地塞米松对其诱导12d,可以获得满意的成脂效果.     

犬MC1R基因R306ter与毛色性状相关性研究

目的　分析犬MC1R基因中R30 6ter位点多态性与犬毛色表型的相关性 ,为遗传育种 ,培育出更加优良的实验用犬奠定基础。方法　采用PCR SSCP技术 ,对MC1R基因R30 6ter位点进行基因多态性检测 ,分析位点多态性与毛色性状之间的相关性 ,并对该位点进行克隆测序。结果　PCR SSCP分析结果表明 ,R30 6ter位点序列具有多态性 ,表现为C、D二个等位基因和CC、CD及DD三种基因型。对R30 6ter多态性片段克隆测序发现 ,MC1R基因在编码第 30 6位氨基酸的密码子处存在一个由CGA到TGA的终止突变。结论　经统计分析结果表明在杂种犬中MC1R基因多态性与毛色性状不存在显著的相关性 ,这可能是由于外科手术学教学用犬是杂种犬 ,其遗传背景不同所致。由于MC1R基因的R30 6ter位点内存在碱基变异 ,因此在杂种犬中表现出明显的PCR SSCP多态性     

利用软件Primer Premier 5.0进行PCR引物设计的研究

目的运用Primer Premier 5．0软件设计PCR引物，并且检验所设计引物的PCR扩增效率和特异性。方法运用Primer Premier 5．0软件设计16对猪和犬的PCR扩增引物，通过PCR扩增后进行琼脂糖凝胶电泳检测实验结果。结果在所设计的16对引物中有8对PCR扩增特异性好且效率高，成功率50％。但是，其中早期设计引物12对只有4对成功，后期设计引物4对全部成功。结论从引物设计的过程中可以看到一种趋势-后期引物设计的成功率远远高于早期。这表明我们在引物设计方面正在逐步成熟，特别是运用比较基因组学定位的原理在分离新基因的引物设计方面积累了较多的经验。     

黑素皮质素受体-4的研究进展

从动物实验替代方法(3Rs)概念提出到3Rs研究整个发展过程的每一个阶段来看，无不与动物保护、动物福利和使用实验动物进行实验研究的伦理学有着密切的内在联系。国际上的动物福利思潮和动物保护运动也波及到了实验动物领域。实验动物作为特殊的研究载体和实验材料，对人类健康做出了巨大贡献。如何维系实验动物的福利，关注并提高实验动物福利水平，正逐步成为礼会公众所共同关注的一个热点，也是我们从事自然科学研究，特别是从事生命科学研究的科技工作者必须面对和回答的现实问题。     

人轮状病毒外衣壳糖蛋白VP7基因毕赤酵母重组表达系统的构建

[目的]构建人轮状病毒糖蛋白VP7基因毕赤酵母表达系统.[方法]构建好的毕赤酵母重组表达质粒VP7-pPICZαA经Sac Ⅰ线性化后应用电转化法转化毕赤酵母菌株GS115感受态中,Zeocin平板筛选,PCR鉴定转化子,MDH和MMH平板鉴定Mut表型.[结果]线性化的重组质粒VP7-pPICZα成功转化进入毕赤酵母感受态中,PCR鉴定结果与预期相符,表型确定为Mut+.[结论]成功构建人轮状病毒耱蛋白VP7基因的毕赤酵母表达系统     

《局部解剖学》课程思政元素的挖掘

局部解剖学是连接基础医学与临床医学的桥梁课程,基于本门课程大体标本解剖的特点,它是实现思政教育目标的重要载体,其特有的教学内容和教学资源,便于将医学人文教育贯穿到理论及实践教学,但目前对于本门课程的相关思政元素挖掘不够,不能进行全方位、全程人文教育,本研究在局部解剖学的实践中进行思政教育,如仪式教育及解剖过程中建立局部与整体统一,理论与实践相联系等思维意识,并且培养同学之间互相沟通、互相合作的团队意识,老师在指导解剖操作的过程中展示的娴熟博学的专业知识及言传身教的敬业精神。在理论授课中,根据教材的编排,按照人体各个局部形态结构所涉及到的思政元素进行挖掘和实践,从而引申出职业素养、创新精神、辩证思维、伦理道德和家国情怀等人文素质的培养。本研究的设计基本实现了基础医学教育引领大学生的思想价值和落实立德树人的根本任务。