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背景:在体外构建组织工程材料的过程中,快速获得足够数量且纯度高的种子细胞极为重要,但目前人脐静脉间充质干细胞原代培养的增殖率仍较低。
目的:观察血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞原代生长、增殖的影响。
设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/07在辽宁医学院解剖学实验室完成。
材料:正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条,由锦州市凌河区妇幼保健院及辽宁医学院附属第一医院提供。
方法:采用胶原酶消化法分离人脐静脉间充质干细胞,以1×108 L-1的密度接种于24孔培养板,设立2组,实验组加入150 g/L血管内皮细胞生长因子,对照组不加入任何细胞因子。
主要观察指标:观察细胞形态变化,MTT法检测细胞生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞CD166的表达。
结果:接种后6 h细胞开始贴壁,48 h后细胞完全贴壁生长,出现呈椭圆形、多角形的内皮细胞,以及呈梭形的成纤维样细胞,有的形成漩涡状生长集落;原代培养1周后细胞以梭形为主;传代后24 h细胞基本完成贴壁,48 h细胞开始分裂增殖,5~7 d可见多核的成纤维样细胞贴壁,呈长杆状、三角形、梭形等。与对照组比较,实验组细胞生长状态较好,增殖较快,单位时间内获得的细胞数量明显增加(t=2.235,P < 0.05),CD166阳性细胞率显著升高(t=1.638,P < 0.01)。
结论:血管内皮细胞生长因子可促进人脐静脉间充质干细胞贴壁,且更有利于间充质干细胞的增殖和纯化。 相似文献
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目的可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一种可导致多种癌细胞死亡的强效选择性肿瘤杀伤蛋白质-脂酸复合物。为了使HAMLET应用于肿瘤的治疗并对其杀伤机制进行探讨,我们需要建立和优化简便、快速、规模化制备与纯化HAMLET的方法。方法通过构建人α乳清蛋白分泌型细胞MCF-7的cDNA文库,PCR扩增出编码人α乳清蛋白成熟肽段的全长序列,然后克隆入pET30a(+)表达载体质粒,并转化BL21(DE3)宿主大肠杆菌。经过IPTG诱导,表达细菌的裂解,蛋白体外复性,Ni-NTA亲和层析柱纯化等步骤,获得了高纯度的重组人α乳清蛋白的C端His标签融合蛋白。纯化蛋白经EDTA脱钙后,与油酸(oleic acid,OA)在加热条件下制备HAMLET复合物。同时,对HAMLET的理化特性和生物学活性进行检测。结果通过与经典方法制备的牛α乳清蛋白和OA复合物(BAMLET)进行比较,发现我们制备的HAMLET在紫外吸收光谱、疏水性质特征及肿瘤杀伤活力方面与BAMLET活性相符,并且可引起HeLa肿瘤细胞的凋亡样程序性死亡。结论本研究自主制备的HAMLET成本经济、方法简便且具有较好的规模化放大前景,为日后临床应用奠定基础。 相似文献
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目的将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)作用于肺癌细胞NCI-H292,探讨其对肺癌的治疗价值。方法PS-ASODN经lipotap脂质体转染作用于NCI-H292细胞,采用MTT法、ELISA法和流式细胞术检测NCI-H292细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法检测,1.0μmol/LPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12.86%,且随着时间的延长,抑制作用逐渐增强。②ELISA法检测结果,0.5~1.5μmol/L的PS-ASODN对NCI-H292细胞作用72h后端粒酶皆为阴性,对照组阳性。③流式细胞仪检测结果:端粒酶PS-ASODN转染NCI-H292细胞培养72h后,检测到细胞早期凋亡率增加,凋亡率为15.3%,与对照组相比有极显著意义(P<0.01)。PI染色结果细胞被阻止在G1/G0期,S期比率有所降低,降为14.5%。结论①端粒酶PS-ASODN对NCI-H292细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用具有浓度、时间依赖性。②端粒酶PS-ASODN能明显地抑制NCI-H292的端粒酶活性。 相似文献
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目的 研究密度梯度离心法结合贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)及不同首次换液时间对细胞增殖的影响,探索一种简单易行、扩增效率高的方法。方法 3月龄雄性SD大鼠提取原代BMSCs,密度梯度离心法结合贴壁法分离培养,并应用3组不同首次半量换液时间(24h,48h,72h)进行培养传代,测定生长曲线和细胞的存活率;免疫细胞化学染色分析细胞表面抗原CD44和CD166的表达。结果 分离的BMSCs48h后细胞完全贴壁生长,呈形态均一的纺锤形单核细胞状,第3代细胞培养1w后呈长梭型,呈平行排列生长。48h半量换液组细胞增殖活性及生存率最高,其次为24h和72h组;表面标志物CD44和CD166均呈阳性。结论 联合应用密度梯度离心法及贴壁筛选法可成功分离BMSCs,且效率高、纯度高,48h首次半量换液更适合BMSCs的生长繁殖。 相似文献
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目的 培养具有临床思维、初步临床技能和高尚的人文素养的医学应用型人才,以提高其临床岗位胜任力.方法 选取2019级临床医学专业本科生,通过完善相关临床线上教学资源,理论授课加强临床联系,增加以临床案例为基础的线下翻转式教学;实验课解剖操作以临床外科手术为导向进行设计,增加制作"小件标本"环节;将课程思政教育贯穿于整个教... 相似文献
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目的 利用油酸联合胰岛素和地塞米松诱导人脂肪间充质干细胞(human adipose derived stromal cells,hADSCs)成脂,探索一种在人体内脂肪细胞生成的诱导条件,更接近人的生物学状态,对疾病预防、治疗具有指导意义.方法 从人大腿部吸脂术所抽取的脂肪组织,分离培养hADSCs,并进行鉴定:免疫荧光染色法检测细胞表面分子的表达;进行成脂、成神经诱导.采用25、50和80μmol/L三种浓度的油酸联合胰岛素和地塞米松诱导hADSCs的成脂,油红O染色观察细胞成脂情况.结果 分离原代细胞,镜下观察呈长梭形,漩涡状排列,表面标记物CD49d和CD105为阳性表达.细胞成脂诱导后,胞浆出现大量脂滴,油红O染为红色;经神经诱导后,细胞伸出细长突起,突起之间有网状连接.油酸联合胰岛素和地塞米松可成功诱导hADSCs成脂:可见细胞内脂滴形成,油红O染为红色,三种浓度以80μmol/L浓度组油红O阳性细胞率最高.结论 成功从人大腿皮下脂肪分离、培养hADSCs,并使用80μmol/L油酸联合胰岛素和地塞米松对其诱导12d,可以获得满意的成脂效果. 相似文献
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局部解剖学是连接基础医学与临床医学的桥梁课程,基于本门课程大体标本解剖的特点,它是实现思政教育目标的重要载体,其特有的教学内容和教学资源,便于将医学人文教育贯穿到理论及实践教学,但目前对于本门课程的相关思政元素挖掘不够,不能进行全方位、全程人文教育,本研究在局部解剖学的实践中进行思政教育,如仪式教育及解剖过程中建立局部与整体统一,理论与实践相联系等思维意识,并且培养同学之间互相沟通、互相合作的团队意识,老师在指导解剖操作的过程中展示的娴熟博学的专业知识及言传身教的敬业精神。在理论授课中,根据教材的编排,按照人体各个局部形态结构所涉及到的思政元素进行挖掘和实践,从而引申出职业素养、创新精神、辩证思维、伦理道德和家国情怀等人文素质的培养。本研究的设计基本实现了基础医学教育引领大学生的思想价值和落实立德树人的根本任务。 相似文献
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