犬MC1R基因多态性与毛色表型相关性的研究

目的利用PCR—RFLP技术检测犬MC1R基因中T105A位点的多态性，分析该多态性与犬毛色表型的相关性。方法抽取36只比格犬血液并提取DNA，记录毛色表型。采用PCR—RFLP技术，对MC1R基因T105A位点进行基因多态性分析。用相关分析的统计学方法分析位点多态性与毛色性状之间的相关性。结果PCR—RFLP分析结果表明，T105A位点序列具有多态性，表现为A、B二个等位基因和AA、AB及BB三种基因型。A、B等位基因频率分别为58．33％和41．67％，基因杂合度（H）为0．59。基因型从频率为33．33％，BB为16．67％，AB为50．00％。经统计分析结果表明MC1R基因多态性与毛色性状不存在显著的相关性，这可能与Agouti蛋白对毛色的影响有关。结论在比格犬中MC1R基因的T105A位点表现出明显多态性并与毛色性状无相关性。     

犬MC1R基因多态性的研究

目的 利用PCR—RFLP和PCR—SSCP技术分别检测犬MC1R基因中两个序列T105A和R306Ter的基因多态性，为遗传育种、培育出更加优良的实验用犬奠定基础。方法 以224只犬为实验材料，对犬MC1R基因T105A片段和R306Ter片段分别进行PCR-RFLP和PCR—SSCP分析，并且分别对具有RFLP和SSCP多态性的片段进行克隆测序，找出等位基因的差异位点。结果 经对犬MClR基因的PCR-RFLP分析，发现犬MC1R基因的T105A序列具有多态性，表现为三种基因型：AA、AB和BB。通过对具有RFLP多态性的片段进行克隆测序发现MC1R基因在编码第105位氨基酸的密码子处存在由G到A的单碱基突变，该突变导致第105位氨基酸发生由精氨酸向苏氨酸的改变，此外在第207位氨基酸的密码子处还发现由A到G的单碱基突变，并产生了一个HhαI限制性内切酶位点。同时，经过犬MC1R基因的PCR—SSCP分析，发现犬MC1R基因的R306Ter序列具有多态性，表现为三种基因型：CC、CD、DD.通过对具有SSCP多态性的片段进行了克隆测序发现，MC1R基因在编码第306位氨基酸的密码子处存在一个由CGA到TGA的终止突变，而使翻译终止。结论 利用PCR—RFLP和PCR—SSCP分析技术证实犬MC1R基因具有明显的多态性。     

MC4R基因多态性及饮食运动与儿童肥胖关系

目的:分析MC4R基因多态性及饮食运动与儿童肥胖的关系。方法:调查本市区672名儿童的一般资料,检测MC4R基因多态性,对MC4R基因多态性及饮食运动与肥胖的相关性进行统计学分析。结果:对照组与肥胖组GA/AA突变基因型频率无统计学差异(P0.05),MC4R基因GA/AA突变型及静态生活与儿童肥胖具有相关性(P0.05)。结论:MC4R基因多态性受儿童静态生活的影响,可促使肥胖风险不断增加。     

遗传性先天性白内障与αA-晶体蛋白基因相关性研究

目的 分析遗传性先天性核性和绕核性白内障与定位于21q22．3的αA-晶体蛋白（CRYAA）基因之间的关系。同时对比单链构象多态性（SSCP）和变性高效液相色谱法（DHPLC）两种方法检测单核苷酸多态性（SNP）。方法 用PCR方法扩增CRYAA基因的3个外显子,分别用SSCP和DHPLC两种方法分析扩增产物,对异常者进行DNA测序,寻找基因变异情况。结果用SSCP分析15个样本,未见异常条带;同时用DHPLC检测15个样本,其中1个样本出现双峰,将该样本扩增产物测序鉴定,发现在5’端第6个核苷酸为G／A杂合,二者是同一氨基酸的2个密码子,该核苷酸为CRYAA基因的多态性位点。未发现该基因突变。结论 实验中未发现15例先天性白内障患者与CRYAA基因之间有关联。应用SSCP与DHPLC同时分析,DHPLC检测出1个多态性位点。DHPLC对杂合子检出的敏感性要高于SSCP。     

应用降落PCR及克隆测序检测2型糖尿病外周血白细胞胰岛素样生长因子受体IGF1R基因甲基化

目的:比较应用降落PCR(TD-PCR)及克隆测序检测2型糖尿病患者外周血白细胞中胰岛素样生长因子受体(IGF1R)基因启动子区DNA甲基化位点的方法。方法:提取2型糖尿病患者外周血白细胞DNA进行亚硫酸氢盐处理,设计引物扩增IGF1R基因启动子区富含CG位点序列,分别行普通PCR和TD-PCR扩增,对含目的条带产物进行直接测序和克隆后测序。结果:与普通PCR扩增结果相比,TD-PCR扩增条带清晰、产物量多、二聚体少;且TD-PCR减少了对退火温度不断摸索的过程。克隆后测序峰图清晰,碱基丢失错判频率减少。结论:推荐应用TD-PCR检测亚硫酸氢盐处理的DNA甲基化位点,并进行克隆后测序。     

白介素-23R基因多态性与肝癌易感性研究

目的探讨白介素-23R(IL-23R)基因rs10889677A/C、rs1884444G/T两个位点单核苷酸多态性(SNP)与肝癌的遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测84例肝癌和94例健康对照者外周血白细胞DNA的IL-23R基因rs1884444、rs10889677两个位点多态性。结果 IL-23R基因rs10889677位点AA、AC、CC基因型及A、C等位基因型分布频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-23R基因rs1884444位点TT、TG、GG基因型及T、G等位基因型分布频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。危险性分析显示含有T等位基因型的个体较含有G等位基因型者发生肝癌的风险高(OR=1.636,95%CI=1.027～2.607);GA单倍型与肝癌的患病风险性有相关性(P=0.020 9),携带GA单倍型的个体患肝癌的风险增加至1.72。其他单倍型与肝癌的患病风险无相关性(P>0.05)。结论 IL-23R基因rs1884444T/G位点多态性与肝癌的遗传易感性有关,而rs10889677A/C位点多态性与肝癌的遗传易感性无明显相关性。     

H4受体的表达水平与SLE发病的关联性研究

目的研究组胺H4受体（H4R）在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中的表达和基因多态性,并探讨其与SLE发病的相关性。方法利用PCR扩增、基因测序及荧光实时定量PCR技术,分别对H4R外显子基因多态性及H4R的mRNA表达水平进行检测及分析,并比较SLE组与健康对照组之间的差异。结果在H4R全部三个外显子检测到的单核苷酸多态性（SNP）位点中,未发现与SLE发病明显相关的位点。SLE组H4R的mRNA表达量比对照组显著升高,且差异有统计学意义（p=0.004）。结论H4R的外显子基因多态性与系统性红斑狼疮的发病无关;SLE患者的H4R的表达量与系统性红斑狼疮的发病相关。     

代谢酶CYP1A1、CYP2D6基因多态性与肺癌易感性的病例对照研究

目的 探讨代谢酶CYP1A1基因MspⅠ位点多态性、CYP2D6*10等位基因C188T位点多态性与人群肺癌遗传易感性之间的相关性.方法 应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测86例广州市肺癌患者和86例对照的CYP1A1、CYP2D6基因多态性分布频率,分析基因多态性与肺癌遗传易感性之间...     

一例低钾型周期性麻痹患者的基因分析

目的探讨低钾型周期性麻痹患者是否存在相关基因的突变。方法采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR—RFLP)、聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR—SSCP)检测1例低钾型周期性麻痹患者和150例体检健康者及患者家属的基因突变位点。结果1例患者及对照组的基因中未找到任何突变位点。结论低钾性周期性麻痹的遗传存在异质性。     

具有独特表型的LHON家系及其线粒体基因突变的初步分析

目的探讨一个5代遗传的具有独特表型的Leher遗传性视神经病（LHON）家系的线粒体基因突变。方法对LHON的常见致病突变位点（3460、11778、14484、14459等）、线粒体遗传病Leigh病常见突变位点8893和线粒体脑肌病伴Leigh病表型的常见突变位点13513进行聚合酶链反应（PCR）、单链构象多态性（SSCP）和DNA测序分析。结果SSCP和测序结果均为阴性。结论该家系是新的LHON突变亚型。为明确该家系的诊断,需要进行线粒体DNA的全长序列分析。     

PCR-STR和PCR-SSCP方法对苯丙酮尿症基因诊断的意义

①目的 探讨苯丙酮尿症的基因诊断方法。②方法 采用聚合酶链反应－短串联重复序列（PCR－STR）连锁分析技术和聚合酶链反应－单链构象多态（PCR－SSCP）分析技术,对5个苯丙酮尿症家系中17个成员的苯丙氨酸羟化酶基因突变进行分析。③结果 用PCR－STR法能准确进行基因诊断的家系3个,50％能排除诊断的家系3个;用PCR－SSCP法检出3例已知突变。④结论 联合应用PCR－STR和PCR－SSCP技术可以提高苯丙酮尿症的基因诊断率。     

IRM-2近交系小鼠的遗传监测

目的 观察IRM-2小鼠基因纯合性和遗传质量。方法用电泳法对IRM-2近交系小鼠进行了生化标记基因检测,并做了毛色基因和皮肤移植试验。结果分析测定了第23代小鼠13条染色体上25个基因位点和第38代的13个生化标记基因,所查基因位点全部纯合;同系异体问背部皮肤移植100d后,未见排斥现象,为同系组织遗传性;与BALB／c白化系小鼠交配进行的毛色基因测试,杂交第一代小鼠的毛色与IRM-2小鼠一致,均为浅桂皮色,基因型为AAbbCCDD。结论可以认为,IRM-2小鼠是遗传上高度纯合的近交系小鼠。     

微卫星座位对实验动物beagle犬的遗传分析

目的对美国进口、广州自养beagle犬基因组中存在的微卫星结构进行分析,研究其群体的微卫星多态性,以此探索在分子水平上对作为实验动物的beagle犬进行检测。方法通过微卫星分子标记技术进行遗传背景分析,并结合微卫星位点测序结果,研究DNA分子特征。结果在研究位点上共发现6个复等位基因,进口犬群体共有6个等位基因片段,自养犬群体共有5个等位基因片段,根据基因型计算各群体等位基因频率,由相关公式计算杂合度、群体多态信息含量(PIC)、基因纯合率、基因分化系数。结论两群体的杂合度、PIC值均较高(分别为0.7010、0.6747和0.7876、0.7515),基因分化系数很低(0.021),表明两群体没有形成明显的独立群。     

昆明无毛小鼠近交系培育及其生物学特性的研究

目的 培育无毛小鼠近交系。方法 采用全同胞兄妹对交配,20代后用毛色基因测试、皮肤移植、生化标记基因法测定该近交系的纯度。结果 表明毛色基因测试该品系小鼠基因型为aabbccDD;经过皮肤移植的小鼠全部存活;对AKP-1等25个生化标记基因的检测,未发现杂合型。     

胰岛素受体底物—1基因3′非翻译区的突变与中国人2型糖尿病的关系

目的：研究胰岛素受体底物－1（IRS－1）基因3′非翻译区的突变与中国2型糖尿病的关系。方法：采用PCR－SSCP技术扫描120例中国2型糖尿病患者和120例正常对照的IRS－1基因3′非翻译区序列，所有SSCP变异的样品进行DNA测序分析。结果：SSCP分析存在假阳性结果。测序未发现有基因突变。结论：IRS－1基因3′非翻译区的突变不是引起中国人2型糖尿病的重要遗传因素。     

胰岛素受体底物-1基因3′非翻译区的突变与中国人2型糖尿病的关系

目的 :研究胰岛素受体底物 1(IRS 1)基因 3′非翻译区的突变与中国 2型糖尿病的关系。方法 :采用PCR SSCP技术扫描 12 0例中国 2型糖尿病患者和 12 0例正常对照的IRS 1基因 3′非翻译区序列 ,所有SSCP变异的样品进行DNA测序分析。结果 :SSCP分析存在假阳性结果。测序未发现有基因突变。结论 :IRS 1基因 3′非翻译区的突变不是引起中国人 2型糖尿病的重要遗传因素     

湖南汉族群体HLA-DQA1位点等位基因多态性分析

目的 :分析湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因多态性。方法 :应用PCR/SSP和银染PCR/SSCP技术对 60名无血缘关系湖南汉族健康个体作HLA DQA1基因分型。结果 :检出 1 0种HLA DQA1等位基因 ,基因频率范围为 0 .0 1 67～ 0 .2 2 54 ;HLA DQA1 0 30 2 , 0 50 1 , 0 1 0 2为常见等位基因 ,HLA DQA1 0 1 0 1 , 0 2 0 1 , 0 4 0 1为少见等位基因。检出 2 6种基因型 ,基因型观察值和理论值分布符合Hardy Weinberg平衡 (P >0 .0 5)。 5例样本的PCR/SSP分型只能确定一个等位基因 ,另一等位基因经PCR/SSCP确认。结论 :提供了湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因频率正常值     

PCR/SSCP used as a complementary method for HLA oligotyping]

Seventy samples randomly selected from Hunan Han nationality normal individuals were typed for HLA DPA1 polymorphism by PCR/SSO with the primers and SSOs. Silver staining PCR/SSCP was also performed on the polymorphic second exon of all samples, which demonstrated the accurate gene frequencies of DPA1*01,02 to be 0.2632 and 0.7327, respectively. Using PCR/SSCP technique, we found that PCR/SSO mistyped a DPA1*01/02 heterozygote as single DPA1*01 gene because of weak hybridization signals. PCR/SSCP also revealed DPA1*02 in Hunan Han population to be composed of a single subtype. The results indicate that PCR/SSCP can be used to clarify the samples with atypical or irregular PCR/SSO hybridization patterns and to analyze the possible polymorphisms outside SSOs sequences. Thus this method may guarantee the accuracy of HLA oligotyping.     

PCR-SSCP法快速检测鉴定临床病原菌的探讨

目的：探讨利用PCR—SSCP快速检测和鉴别临床病原菌的方法。方法：采用细菌保守的16s rRNA基因为模板，以PCR—SSCP方法检测病原菌，并以普通PCR法和PCR—RFLP法作比较。结果：普通PCR法很难从电泳图谱中鉴别细菌；PCR—RFCP法电泳图谱虽呈多态性，但仍有部分细菌图谱相同和相似，不易区分；经PCR—SSCP电泳出来的细菌图谱差异明显，可以互相区分。结论：PCR—SSCP技术能快速简便地检测、鉴别病原菌。