液-质联用测定Nrf2野生型和基因敲除型小鼠肝脏中16种胆汁酸

目的:建立测定小鼠肝脏中16种胆汁酸浓度的LC-MS/MS法,并将测定结果应用于比较Nrf2野生型和基因敲除型小鼠胆汁酸代谢谱。方法:小鼠肝脏样品加入70%乙腈匀浆,用甲醇沉淀匀浆液中的蛋白并高速离心,取上清液置进样瓶, 用Xtimate^TM C₁₈柱分离,以甲醇-醋酸铵及甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 ml·min^-1,进样5 μl分析。结果:16种胆汁酸在0.013~8.000 μmol·L^-1范围内,线性关系良好,定量下限浓度为0.013 μmol·L^-1,肝脏匀浆液加样回收率在94.9%~112.8%之间,日内、日间RSD均小于10.8%。结论:该方法准确可靠,灵敏度高,处理简便,适用于肝脏中胆汁酸浓度的测定,为生物样品中胆汁酸含量测定提供参考。     

荧光猝灭法研究二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白的相互作用

目的 研究二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。方法 运用荧光光谱法结合Stern-Volmer方程和Line Weaver-Burk双倒数函数计算出BSA与二氢槲皮素和二氢杨梅素相互作用的猝灭常数和结合常数,通过反应前后热力学参数如焓变ΔH和熵变ΔS的大小对作用力类别进行判断。结果 测得二氢槲皮素与BSA在不同温度下的结合常数293 K为2.27×10⁴ L·mol-1,298 K为2.06×10⁴ L·mol-1,303 K为1.89×10⁴ L·mol-1,二氢杨梅素与BSA在不同温度下的结合常数293 K为2.43×10⁴ L·mol-1,298 K为2.39×10⁴ L·mol-1,303 K为2.13×10⁴ L·mol-1。确定其使牛血清白蛋白荧光猝灭的过程为静态猝灭过程,通过热力学参数确定其结合力主要为疏水作用。结论 应用荧光猝灭法了解二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白之间有较强的结合反应,结合力以疏水作用力为主。     

异甘草素对Nrf2基因敲除/野生型小鼠肝脏小分子代谢物谱的影响

目的探讨异甘草素(Iso)通过Nrf2防御通路对小鼠肝脏代谢谱的影响。方法将12只野生型小鼠和12只Nrf2基因敲除小鼠分别分为空白对照组和Iso组,各6只。Iso组以25 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组给予同体积的0.5%CMC-Na,灌胃给药3 d后,处死小鼠,取肝组织,采用GC-MS法分析各组小鼠肝脏组织代谢图谱,利用化学计量学方法筛选组间差异代谢物。结果筛选得到了组间差异代谢物,经文献分析这些代谢物与Nrf2防御通路相关。结论利用代谢组学技术获得的小分子差异代谢物能够用于探讨Iso与Nrf2通路的关系。