体外培养树突状细胞成熟诱导物的研究进展

树突状细胞(DC)是体内功能最强的抗原提呈细胞(APC),参与多种自身免疫疾病、肿瘤、免疫缺陷病及某些炎症反应的病理过程.以成熟DC为基础制备的DC疫苗具有明显的诱发抗肿瘤免疫应答的能力,其显著的抗肿瘤效应已经得到广泛认可.目前体外培养DC的方法尚没有统一的标准,致使培养得到的DC在均一度和功能上有很大的差别,很大程度上限制了DC的基础研究和DC疫苗的临床应用工作的开展.以下综述了体外扩增DC所用成熟诱导物的特点,为相关研究者体外扩增DC提供了参考.     

肿瘤细胞裂解物抗小鼠B16F10黑色素瘤的作用研究

反复冻融B16F10肿瘤细胞制备裂解物,以白喉毒素(Diphtheria toxin,DT)为载体,OK432和来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)第407-426(mHSP70407～426,M)的两段串联重复序列M2为佐剂,制备了肿瘤细胞疫苗B16F10-DT-M2-OK432(BDTMOK),探讨其能否抑制小鼠B16黑色素瘤,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的BDTMOK免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗B16肿瘤细胞裂解物(B16 tumor cell lysate,B16TCL)类抗体。淋巴细胞增殖实验的结果显示,BDTMOK的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防结合治疗性实验的结果显示,BDTMOK激发的免疫应答对于B16肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,皮下注射BDTMOK可以延长皮下移植瘤发生的潜伏期(P<0.05),并且平均瘤重显著降低(P<0.05);抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01)。疫苗BDTMOK能有效的抑制小鼠B16黑色素瘤的生长。     

高效液相色谱法与容量分析法测定发酵液中L-赤藓酮糖含量的比较

目的：建立高效液相色谱法（ HPLC）测定发酵液中L-赤藓酮糖含量的方法,并与测定还原糖常用的容量分析法（ VA）斐林试剂滴定法进行了比较。方法 HPLC法的色谱条件为：色谱柱：Lichrospher 5-NH2（4．6 mm ×250 mm）;柱温：32℃;流动相：甲醇—水（85∶15,V／V）;流速：1．0 mL· min－1。用紫外检测器室温下检测L-赤藓酮糖,检测波长为277 nm,检测器温度为35℃。结果所得L-赤藓酮糖的线性范围为1．00～100．00 g· L－1,R2为0．9999,最低检测限为0．50 g· L－1,最低定量限为0．85 g· L－1。 F检验和t检验结果显示：在各自的线性范围内, VA法与HPLC法在95％的置信区间上存在显著性差异。结论与VA法相比,HPLC法精密度好,准确性高,不受发酵液中其它组分干扰,更适用于测定发酵液中L-赤藓酮糖的含量。     

探索一种新型生物发酵途径生产乙醇

在质粒pUC19中插入菊欧氏杆菌pehX启动子,并与全合成的运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因(pdc),乙醇脱氢酶基因(adhB)串联,构建pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆,转化大肠杆菌DH5α,经气相色谱检测,在大肠杆菌中乙醇的表达量达到0.85%。菊欧氏杆菌富含多种纤维素酶,与一些仅可利用基本糖类作为碳源的大肠杆菌等相比,其可以利用纤维素作为碳源。本实验设计将pUC19-pdc-adhB乙醇发酵重组克隆转化至菊欧氏杆菌,尝试用氯化钙、电击等转化方法,但均没有获得转化子。提示需要寻找新的转化方法或者将pdc和adhB基因整合到菊欧氏杆菌的基因组中以使其能产生乙醇。     

基于M2与OK-432的肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞疫苗抗小鼠Lewis肺癌作用研究

目的：建立增强肺癌细胞裂解物（L）致敏的树突状细胞（D）疫苗（L-D）免疫临床治疗肺癌效果的方法。方法：以来源于热休克蛋白70第407~426的两段重复序列（M）和OK-432（O）为佐剂刺激Lewis肺癌细胞裂解物,制备了树突状细胞疫苗LMO-D。结果：与L-D相比, LMO-D显著增加CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅰ和Ⅱ等细胞表面抗原的表达;LMO-D免疫荷瘤小鼠后,显著增强Th1类细胞因子肿瘤坏死因子α和干扰素γ,而不增强Th2类细胞因子白介素-5的表达;T淋巴细胞增殖诱导显著和淋巴细胞毒反应;此外LMO-D显著降低荷瘤小鼠瘤重与体积,延长了荷瘤小鼠的生存期。结论：LMO-D可通过诱导显著的T细胞免疫反应有效抑制肿瘤生长。     

药师干预对急性阑尾炎儿童抗生素应用的临床研究

目的:分析儿童急性阑尾炎围术期抗菌药物应用的合理性,并进行药物合理性干预,比较干预后的状况。方法:制定急性阑尾炎围手术期抗菌药物合理应用评价标准,观察用药适应证、药物选择、用药时机、联合用药、更换药品、用法、用量、住院天数、抗菌药物费用和院内感染率等。分析非干预措施与干预措施之间的差异。结果:非干预情况下儿童急性阑尾炎围手术期抗菌药物应用合理性为33.3%,实施干预措施后升高至62.9%,并且可以减少住院天数和抗生素费用,降低非适应证药物的使用。结论:药师干预可以提高儿童急性阑尾炎围手术期抗菌药物的合理性,值得在临床进一步推广。