大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎CD4^＋,CD8^＋的改变及意义

目的：观察实验性变态反应性脑脊髓炎模型大鼠外周血CD4^＋，CD8^＋的改变及免疫调节剂左旋咪唑的作用。方法：实验于2005—05／07在遵义医学院附属医院神经科实验室和贵州省细胞工程重点实验室完成。取Wistar大鼠23只单纯随机分为4组：①正常组（n=5）：不干预。②模型组（n=8）：每只大鼠一次性注入0．5mL豚鼠脊髓匀浆（相当髓鞘碱性蛋白3．5mg）和完全福氏佐剂混合乳剂，其中0．4mL注入双后足掌皮下，0．1mL注入尾近端。在注入抗原乳剂后即刻、24，48h共3次腹腔注射左旋咪唑10mg／kg。③完全福氏佐剂组（n=5）：注射无豚鼠脊髓匀浆生理盐水＋完全福氏佐剂混合液0、5mL，用法同模型组，不注射左旋咪唑。④左旋咪唑组（n=5）：每间隔24h腹腔注射左旋咪唑，用法同模型组。将注射日规定为第0天，每日观察2次记录大鼠神经体征变化，所有大鼠于注射第16天取材，流式细胞仪检测外周血CD4^＋，CD8^＋的变化，苏木精一伊红染色观察病理变化，Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果：23只大鼠全部进入结果分析。①神经体征变化：正常组、完全福氏佐剂组和左旋咪唑组均未出现症状，模型组8只大鼠中有7只于第14天出现症状，发病率为87．5％。②CD8^＋的变化：左旋咪唑组和模型组低于正常组[（31．24&;#177;7、01）％，（20．64&;#177;5．52）％，（41、73&;#177;7．28）％，P〈0．05，0．01]，且模型组低于左旋咪唑组（P〈0、05）。③CD4^＋的变化：左旋咪唑组和模型组高于正常组[（45、21&;#177;5．35）％，（43、30&;#177;5．47）％，（34．44&;#177;7．01）％，P〈0．05]，但前2组比较差异不显著。④CD4＇／CD8^＋：左旋咪唑组和模型组高于正常组（1．53&;#177;0、49，2．33&;#177;1．04，0．86&;#177;0．32，P〈0．05．0、01）。⑤模型组苏木精-伊红染色见大脑自质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润；Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变。结论：①大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎是通过降低CD8^＋、增高CD4^＋及CD4^＋／CD8^＋介导的免疫性疾病。②左旋咪唑破坏了机体的免疫平衡，是诱导实验性变态反应性脑脊髓炎发生的重要免疫凋节剂。     

肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后脑组织NF-κB、ICAM-1、MMP-2和MMP-9表达的意义

目的 观察肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后脑组织中核转录因子(NF-κB)、细胞间黏附分子(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化,探讨高血压加重缺血性脑损伤的机制.方法 Wistar雄性大鼠20只,随机分为高血压组和正常血压组.前组采用狭窄肾动脉方法建立肾性高血压大鼠模型,正常血压组再分为假手术组(N)和缺血再灌注组(IR),分别行假手术和缺血再灌注处理.采用大脑中动脉线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注22h.采用免疫组织化学技术检测脑组织NF-κBp_(65)、ICAM-1、MMP-2和MMP-9的表达,用图像分析仪测定灰度值.结果 与N组比较,IR组NF-κBp_(65)、ICAM-1、MMP-2和MMP-9灰度值明显增高(P<0.01);与IR组比较,HIR组NF-κB_(65)、ICAM-1、MMP-2和MMP-9灰度值增高(P<0.05).结论 高血压加重缺血再灌注后脑组织NF-κB_(65)、ICAM-1、MMP-2和MMP-9的表达.     

糖尿病大鼠脑缺血再灌注后脑组织细胞凋亡与Bax、Bcl-2及P53基因表达

目的观察糖尿病性高血糖大鼠脑缺血再灌注后脑组织细胞凋亡与Bax、Bcl-2和p53表达情况。方法将Wistar大鼠随机分成正常对照组、假手术组、正常血糖脑缺血再灌注组(NIR)和糖尿病性高血糖脑缺血再灌注组(DIR),采用链脲佐菌素腹腔注射制作糖尿病模型、线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,应用TUNEL法和免疫组化法分别检测细胞凋亡和Bax、Bcl-2及p53表达。结果与假手术组和正常对照组比较,NIR组凋亡细胞百分率和Bax、Bcl-2、p53表达明显增加(P均<0.01);与NIR组比较,DIR组凋亡细胞百分率和Bax、p53表达明显增加,Bcl-2表达明显降低(P均<0.01)。结论糖尿病性高血糖大鼠脑缺血再灌注后梗死周边区细胞凋亡增加是高血糖加重缺血性脑损伤的机制之一;Bax和p53表达上调、Bcl-2表达下调参与了糖尿病大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的调控。     

颈动脉支架成形术围术期患者精神状态变化的临床观察

目的探讨颈动脉粥样硬化性斑块形成致狭窄的患者行颈动脉支架成形术围术期精神状态的变化。方法选择2010年7月²012年7月入住我院的脑血管病患者80例,均行全脑数字减影血管造影术诊断为颈动脉狭窄、且达到支架置入治疗标准,均行颈动脉支架成形术。分别于颈动脉支架成形术前及术后1个月,采用简易智能状态检查量表(MMSE)、焦虑自评量表(SAS)及抑郁自评量表(SDS)和美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评定患者神经功能,并进行统计学分析。结果 80例患者颈动脉支架成形术全部成功,无任何不良事件发生;颈动脉支架成形术前患者的MMSE、SAS、SDS以及NIHSS评分分别为(21.20±3.72)分、(55.32±3.28)分、(53.94±3.31)分及(10.00±4.82)分;术后1个月,患者上述各项评分分别为(24.02±4.11)分、(48.15±3.57)分、(45.63±4.25)分和(5.00±3.05)分,与术前比较,MMSE评分明显增高,而SAS、SDS以及NIHSS评分明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对于动脉粥样硬化所致颈动脉狭窄的患者,颈动脉支架成形术可能有助于改善患者的精神状态及神经功能,从而提高患者的生存质量。     

银丹心脑通对脑缺血再灌注大鼠海马区神经细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 明确银丹心脑通对脑缺血再灌注时神经细胞凋亡的保护作用,探索其治疗缺血性脑卒中的分子作用机制. 方法 将40只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、阳性对照组(尼莫地平组)、银丹心脑通组.尼莫地平组及银丹心脑通组预先连续灌胃给药7d,假手术组和模型组每日灌服相当量的蒸馏水,第8大制备大鼠大脑中动脉阻塞模型.脑缺血再灌注24 h后应用TUNEL法检测各组大鼠海马CA1区凋亡阳性神经细胞数,应用免疫组化染色测定各组大鼠脑组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达. 结果 模型组大鼠均能见到较多的凋亡阳性细胞数及Caspase-3阳性细胞数,与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,银丹心脑通组、尼莫地平组能明显减小凋亡阳性细胞数及Caspase-3阳性细胞数,差异有统计学意义(P＜0.05);银丹心脑通组与尼莫地平组在凋亡阳性神经细胞数及Caspase-3阳性细胞数上比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 银丹心脑通对脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,能够减少脑缺血再灌注大鼠神经细胞的凋亡,其作用机制可能与减少脑组织中Caspase-3的表达有关.     

Celecoxib对糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织NF-kB和ICAM-1表达的影响

目的探讨celecoxib对糖尿病大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-xB和ICAM-1表达的影响。方法采用SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）和线栓法制作糖尿病大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型;大鼠分为假手术组（S组）、脑缺血再灌注生理盐水组（NS组）、celecoxib低剂量组（LCIR组）和高剂量组（HCIR组）,分别于缺血后30rain给予生理盐水或celecoxib溶液灌胃,再灌注后6、12、24、48h将大鼠断头取脑,免疫组化法检测脑组织中NF-kB和ICAM-1的表达水平。并对大鼠进行神经功能缺损评分。结果NS组、LCIR组、HCIR组大鼠神经功能缺损评分有显著差异（P〈0．05）;NS组、LCIR组、HCIR组NF-kB阳性细胞及ICAM-1阳性微血管主要表达于缺血周边区,较S组表达明显增强（P〈0．05）,LCIR组、HCIR组NF_KB阳性细胞表达率及ICAM-1阳性微血管数较NS组减少（P〈0．05）,LCIR组、HCIR组之间未见明显差异（P〉0．05）,每组不同时间点之间NF-gB阳性细胞表达率有明显差异（P〈0．05）以及它们之间的ICAM-1阳性微血管数也有明显差异（P〈0．05）。结论celecoxib可能通过抑制糖尿病大鼠脑缺血一再灌注后脑组织中NF-kB和ICAM-1的表达而减轻神经功能缺损,从而发挥脑保护作用。     

石菖蒲挥发油对氯化锂-匹鲁卡品致病大鼠血清和脑脊液CGRP及NSE表达的影响

目的：探讨石菖蒲挥发油对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠血清和脑脊液中降钙素基因相关肽（CGRP）及神经元特异性烯醇化酶（NSE）表达的影响.方法：依照随机数字原则将成年雄性SD大鼠66只,分为对照组（6只）、癫痫组（30只）、石菖蒲挥发油组（30只）,后两组采用氯化锂-匹鲁卡品灌胃法建立癫痫动物模型.在痫性发作后6h、12h、24h抽取血液和脑脊液,用ELISA方法测定血清及脑脊液中CGRP和NSE含量.结果：癫痫组与石菖蒲挥发油组大鼠血清和脑脊液中CGRP含量在致痫后6h开始上升,24h达到最大值.两组血清和脑脊液中CGRP含量在相同时间点存在显著差异（P＜0.05）,两组CGRP含量在相同时间点均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;癫痫组与石菖蒲挥发油组大鼠血清和脑脊液中NSE的浓度在致痫后6h数值最高,12h-24h逐渐下降.两组血清和脑脊液中NSE含量在相同时间点相比存在显著差异（P＜0.05）,两组血清NSE含量在相同时间点均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：血清和脑脊液中CGRP与NSE表达水平的变化是癫痫后脑损伤的早期生化指标,石菖蒲挥发油可能是通过降低血清及脑脊液中NSE的表达、升高CGRP的表达,而减少神经元的损伤,达到对致痫后大鼠脑神经元的保护作用.     

糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织NF-κB和ICAM-1的表达及意义

目的观察糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织核转录因子(NF-κBp65)和细胞间粘附因子(ICAM-1)表达及意义。方法将89只Wistar大鼠随机分为对照组、假手术组、正常血糖缺血再灌注组(nIR)和糖尿病缺血再灌注组(dIR),观察时间点为再灌注0、6、12、24h,每个时间点各5只,用小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱发形成糖尿病大鼠模型,采用线栓法复制大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,应用免疫组化的方法测定NF-κBp65和ICAM-1的表达水平。结果dIR组和nIR组NF-κBp65和ICAM-1主要表达于缺血周边区,dIR组再灌注0、6、12、24h NF-κBp65阳性细胞百分率分别为(24.7±4.2)、(53.4±8.0)、(72.4±7.2)、(60.7±5.0)%,与nIR组同一时间点比较差异有显著性(P<0.05);dIR组再灌注0、6、12、24h ICAM-1阳性微血管数分别为(0.8±0.8)、(2.4±1.6)、(5.1±2.1)、(3.6±1.6)条/8个400倍视野,与nIR组同一时间点比较0h组之间差异无显著性(P>0.05),而6、12、24h差异有显著性(P<0.05);缺血周边区脑组织NF-κBp65与ICAM-1的表达有明显的时间依从性。结论糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织NF-κBp65和ICAM-1表达增加和表达时间提前可能是糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

糖尿病大鼠缺血-再灌注对脑组织核转录因子-κBp65和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的观察糖尿病大鼠缺血-再灌注后脑组织核转录因子-κBp65和基质金属蛋白酶-9的表达及意义。方法89只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血-再灌注组和糖尿病缺血-再灌注组，采用腹腔注射小剂量链脲佐菌素诱发形成糖尿病大鼠模型，线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型；应用免疫组织化学方法分别检测再灌注0h、6h、12h及24h脑组织标本中核转录因子-κBp65和基质金属蛋白酶-9的表达水平。结果糖尿病缺血-再灌注组和缺血-再灌注组大鼠核转录因子-κBp65和基质金属蛋白酶-9主要表达于缺血周边区。糖尿病缺血-再灌注组大鼠再灌注0h、6h、12h及24h核转录因子-κBp65阳性细胞百分率分别为（24．68±4．19）％、（53．37±7．86）％、（72．38±7．24）％和（60．66±5．02）％，与缺血-再灌注组同-时限相比差异有统计学意义（P〈0．01）；基质金属蛋白酶-9阳性血管数分别为（0．83±0．81）支、（2．44±1．61）支、（5．08±2．11）支和（3．63±1．60）支，与缺血-再灌注组同一时限比较，再灌注0h组间差异无统计学意义（P〉0．05），而再灌注6h和12h组间差异有统计学意义（P〈0．01），其中24h组基质金属蛋白酶-9阳性表达低于12h组（P〈0．05）。缺血周边区脑组织核转录因子-κB065与基质金属蛋白酶-9的表达具有明显的时间相关性。结论糖尿病大鼠缺血-再灌注后，脑组织对核转录因子-κBp65和基质金属蛋白酶-9的表达水平升高且表达时间提前，这可能是糖尿病加重脑缺血-再灌注损伤的机制之一。     

ACEI对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的观察血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后神经功能和细胞凋亡的影响,探讨ACEI的脑保护机制。方法采用狭窄肾动脉方法建立肾性高血压大鼠模型,随机分依那普利组(A组)和高血压缺血再灌注组(B组);正常血压组分为假手术组(C组)和缺血再灌注组(D组)。用线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注时间22h。用免疫组织化学技术检测脑组织bcl-2、bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果(1)脑缺血再灌注后神经功能评分:A组神经功能评分较B组和D组降低(P<0.05,);D组神经功能评分低于B组(P<0.05)。(2)A组与B组和D组比较bcl-2表达明显增多(P<0.05),bax表达显著降低(P<0.05),神经细胞凋亡明显减少(P<0.05);B组与D组比较,bcl-2表达明显降低(P<0.05),bax表达明显增加(P<0.05),而神经细胞凋亡明显增多(P<0.05)。结论ACEI明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,减少神经细胞凋亡,上调脑组织bcl-2表达,抑制bax表达,提示对脑缺血再灌注损伤有脑保护作用。