HSP90β干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在骨肉瘤细胞Saos-2中的表达

目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统，并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平。方法:设计合成shRNA，以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体，酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功。重组病毒转染H1299细胞，以嘌呤霉素筛选稳定转染的Saos-2细胞，通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为干扰NC组（NEG-shRNA）、干扰组（shRNA-HSP90β）、过表达NC对照组（NEG-pEZ）及过表达组（pEZ-HSP90β）。通过qRT-PCR 与Western blotting 分别从mRNA 和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果:插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。病毒包装成功后，嘌呤霉素最小致死浓度1 μg/ml，感染复数200，感染人Saos-2的感染效率达80%，其中shRNA-HSP90β组干扰效率为86.35%，pEZ-HSP90β组的mRNA相对表达量增加2.8倍。进一步研究发现，shRNA-HSP90β组较NEG-shRNA组中HSP90β蛋白表达明显降低，pEZ-HSP90β组较NEG-pEZ组HSP90β蛋白表达增加。结论:HSP90β基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功，并能够在Saos-2中稳定表达。     

妊娠期附件包块的诊断策略

妊娠期附件包块包括生理性包块、炎性包块、良性肿瘤、恶性肿瘤等，近年来发生率有上升趋势。妊娠期卵巢生理性包块多在妊娠中、晚期或产后自行消失；卵巢良性肿瘤若无并发症出现，未阻塞产道，妊娠期可密切观察；而妊娠期卵巢恶性肿瘤危及母胎安全，需积极干预处理。因此，孕期对于卵巢恶性肿瘤的诊断和鉴别诊断具有重要的意义。在诊断过程中，影像学检查及肿瘤标志物的结果需考虑妊娠本身的影响。文章主要阐述妊娠期附件包块的诊断方法及特点。     

青霉素杂质谱分析方法的优化与转换

目的建立青霉素杂质谱HPLC分析方法,并将其转换成UPLC/UHPLC方法。方法以青霉素混合降解溶液为样品;首先分析《中国药典》(2010年版,ChP2010)方法甲醇-缓冲盐二元流动相色谱系统的缺陷;再利用实验设计理念,以响应曲面法(response surface methodology,RSM)的中心组合设计(central composition design,CCD)对色谱系统进行优化,满意度函数法确定最优色谱条件,并优化梯度洗脱条件;最后,利用软件对HPLC方法的流速、进样体积和梯度时间进行几何缩放,并通过色谱柱的选择,将其分别转换为UPLC方法和UHPLC方法。结果新HPLC方法:色谱柱为Capcell Pak C18 MGII(4.6mm×250mm,5μm),流速:1.0m L/min,进样体积:20μL;UPLC方法:色谱柱为Cortecs C18(2.1mm×100mm,1.6μm),流速:0.35m L/min,进样体积:2.0μL;UHPLC方法:Cortecs C18(4.6mm×150mm,2.76μm),流速:0.8mL/min,进样体积:10μL。3种方法的检测波长均为225nm,柱温均为34℃;流动相A均为磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾10.6g,加水至1000mL,用磷酸调pH至3.4)-甲醇(72:14,V/V),流动相B均为乙腈;均为梯度洗脱,但梯度洗脱表不同。结论 3个色谱系统的分离效果(出峰顺序和个数)相似。新HPLC方法可以分离出更多的降解杂质,并明显改善了青霉素峰的拖尾,缩短了分析时间。     

加味启膈散抑制细胞增殖治疗 Barrett食管作用机制研究

目的:观察加味启膈散对Barrett食管(BE)模型大鼠PCNA、Ki-67蛋白表达的影响。方法:SPF级成年健康Wistar大鼠72只,雌雄各半,常规适应性喂养7天后,随机分为6组:正常组、模型组、全方组、行气活血组、理气化痰组、化痰祛瘀组,每组12只。采用改良后的"食管十二指肠端侧吻合加铁剂术"进行BE造模。造模31周后,正常组、模型组大鼠给予生理盐水灌胃,各治疗组分别给予相应药液灌胃,连续给药14天后,处死动物留取吻合口食管组织,采用免疫组化法检测PCNA、Ki-67蛋白表达情况。结果:与正常组比,模型组大鼠Ki-67表达显著增强;全方组Ki-67表达低于模型组(P0.05);理气化痰组和行气活血组Ki-67表达水平高于全方组(P0.05),化痰祛瘀组Ki-67表达与全方组差异无统计学意义(P0.05)。模型组PCNA表达水平较正常组显著增强(P0.05);全方组PCNA表达水平显著低于模型组(P0.05);理气化痰组和行气活血组PCNA表达均高于全方组,差异有统计学意义(P0.05),化痰祛瘀组与全方组PCNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:加味启膈散抑制细胞增殖治疗Barrett食管,其机制与抑制PCNA、Ki-67蛋白表达有关。     

慢性瘙痒患者生活行为方式与皮肤生理功能的相关性

  目的   调查慢性瘙痒患者生活行为方式对皮肤生理功能的影响，为瘙痒患者健康管理提供依据及措施方案。   方法   对慢性瘙痒患者进行生活行为方式调查，包括饮酒、吸烟、饮水、饮食，膳食平衡指数（dietary balance index，DBI）、锻炼5种常见因素；完成经表皮水分流失、表皮含水量、表皮脂质、皮损红斑指数检测，评估患者瘙痒程度，并分析患者生活行为方式与其皮肤生理状况的相关性。   结果   吸烟者91例（44.4%），饮酒者18例（8.78%）；日均饮水量（1211.90±520.28） mL，显著低于健康标准（P < 0.05）；DBI负端分显著高于正端分，膳食质量距显著偏移标准值（ P < 0.05），196例（95.6%）锻炼不充分。吸烟可增加患者瘙痒体验程度，生活方式与皮肤生理功能指标相关（ P < 0.05）。膳食结构和质量在疾病中呈现出复杂性影响。   结论   瘙痒患者的多种生活行为方式偏离健康要求，而生活方式也对皮肤生理功能产生影响。因此在瘙痒患者的管理中，对生活行为方式的个体化指导、干预与管理，应列为瘙痒预防和诊治的重要措施。      

脓毒症液体复苏的临床评估指标

脓毒症是临床常见疾病，可导致脓毒症休克，住院死亡率超过40%。尽管《拯救脓毒症运动：2016脓毒症和脓毒性休克国际指南》推荐将平均动脉压控制在65 mmHg以上和乳酸正常化作为复苏目标，但并不能完全反映休克状态下的组织灌注情况，临床医生可通过结合其他大循环和微循环复苏指标来优化脓毒症患者的液体治疗策略，从而更充分地反映组织灌注情况。本文将总结可用于指导脓毒症患者早期液体复苏的大循环血流动力学参数和微循环灌注指标。     

中西医结合治疗老年慢性功能性便秘30例疗效观察

目的观察中西医结合治疗老年慢性功能性便秘的临床疗效。方法对2012-02—2013-02在济南军区青岛第一疗养院中医科治疗的老年慢性功能性便秘中符合研究条件的60例患者,按随机方法分成对照组和治疗组各30例,对照组患者应用莫沙比利片,5 mg/次,3次/d,餐前30 min口服,乳果糖口服,10 m L/次,3次/d;治疗组在对照组的基础上,给予自拟中药方治疗,1剂/d,分3次温服。两组均15 d为1个疗程,4个疗程后比较两组的临床疗效。结果治疗组总有效率为96.67%,对照组总有效率为76.67%,治疗组总有效率显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论中西医结合治疗老年慢性功能性便秘疗效显著,无不良反应。     

从骨免疫学到骨微生物学：肠道微生物如何调节骨骼

肠道微生物群被称为人体的第二个基因库,在维持人体平衡中起主要作用。不良饮食习惯、抗生素滥用、病理状态和生活环境改变会对肠道菌群产生负面影响,以引起多种疾病。最新研究发现肠道微生物群与骨质疏松症之间有着密切的联系,同时引入了一个新术语"骨微生物学",该研究领域旨在弥合骨骼生理学、胃肠病学、免疫学和微生物学之间的差距。本文简要介绍了肠道菌群通过免疫系统、新陈代谢和内分泌环境以及其他因素影响骨代谢的潜在机制,通过研究肠道菌群与骨骼健康之间的关系,不仅对于维持骨骼健康和最大程度地减少骨质疏松症很重要,而且对于肠道微生物群是否可作为骨质疏松症新型治疗靶标以及是否可用作骨折预测的生物标志物方面具有重要意义。