雷公藤红素诱导多发性骨髓瘤H929细胞凋亡

目的:研究雷公藤红素对人多发性骨髓瘤H929细胞凋亡的诱导作用及分子机制。方法:体外培养H929细胞,加入不同浓度(0.5、1、5和10 mg/L)的雷公藤红素处理细胞,CCK8法分析药物对细胞活力的抑制率;annexin V-PE/7-AAD双染法检测雷公藤红素对H929细胞凋亡的影响;流式细胞术分析雷公藤红素处理的H929细胞中线粒体膜电位水平;彗星电泳实验分析雷公藤红素对细胞DNA损伤的诱导作用;Western blot分析不同浓度的雷公藤红素对H929细胞中凋亡相关分子P53、XIAP、cleaved PARP-1和cleaved caspase-3的蛋白水平以及线粒体细胞色素C释放的影响。结果:不同浓度雷公藤红素处理H929细胞后明显抑制细胞的活力,并呈浓度依赖和时间依赖性。雷公藤红素呈浓度依赖地诱导H929细胞凋亡,并且降低线粒体膜电位水平(P<0.05)。彗星电泳实验结果显示雷公藤红素可以诱导H929细胞的DNA损伤。Western blot实验结果显示雷公藤红素处理的H929细胞中,促凋亡蛋白P53、cleaved PARP-1和cleaved caspase-3的蛋白水平明显升高,而抗凋亡蛋白XIAP的表达水平明显降低(P<0.05)。雷公藤红素可以促进线粒体中细胞色素C的释放,并依赖于caspase-9而激活caspase-3。结论:雷公藤红素对多发性骨髓瘤H929细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与诱导DNA损伤、激活线粒体凋亡途径有关。     

DJ-1基因在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的 探讨DJ-1基因在非急性早幼粒细胞白血病(APL)的急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中的表达、临床特征和其对预后的影响.方法 收集135例患者骨髓标本,采用实时荧光定量PCR检测DJ-1表达水平,分析其与临床特征及预后的相关性.结果 在mRNA水平上,初治组与复发难治组的DJ-1表达水平明显高于正常对照组及缓解组(P<0.01);初治组与复发难治组的DJ-1表达水平无明显差异(P>0.05);缓解组DJ-1表达水平与对照组差异不明显(P>0.05);初治组中DJ-1的水平与白细胞计数高低有关(P<0.01),而与患者的年龄、性别、贫血程度、血小板计数高低、幼稚细胞高低、FAB分型、WHO分型无统计学差异(P>0.05).结论 DJ-1基因在初治及复发难治非APL的AML患者中存在高表达,缓解组表达下降,且初诊患者中DJ-1的表达与患者白细胞高低有相关性.     

人细胞外基质磷酸糖蛋白MEPE的表达纯化及抗体制备

目的 原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体.方法 设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性.结果 原核表达了人Mepe全长基因,纯化了MEPE蛋白,并获得了抗MEPE的多克隆抗体,抗体效价达到1∶25 600,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的MEPE蛋白.结论 MEPE蛋白能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础.     

Peroxiredoxin-6与急性髓系白血病多药耐药发生的相关性

目的：探讨Peroxiredoxin-6与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)多药耐药发生的相关性。方法：获取16例AML病人骨髓标本,根据化疗不同疗效分为多药耐药组(7例)和化疗敏感组(9例),采用双向电泳和质谱分析检测两组之间差异表达的蛋白质,之后采用RT-PCR进一步验证差异蛋白表达结果。结果：蛋白质组学实验结果显示,两组之间差异显著的蛋白点共29个,其中第17号蛋白点经鉴定为抗氧化酶Peroxiredoxin-6。RT-PCR结果证实,与化疗敏感组相比,多药耐药组中Peroxiredoxin-6表达水平明显增高(P<0.001)。结论：Peroxiredoxin-6在AML多药耐药病人骨髓细胞中高表达,提示Peroxiredoxin-6可能与AML多药耐药发生相关。     

FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物对鼻咽癌的体内靶向治疗研究

目的探讨叶酸(folic acid,FA)分子靶向载顺铂(cisplatin,CDDP)羧甲基-β-环糊精(carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM-β-CD)纳米药物(FA-CM-β-CD-CDDP)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的体内靶向治疗效应。方法荷叶酸受体(folate receptor,FR)表达阳性的HNE-1瘤和FR表达阴性的CNE-2瘤的同一裸鼠经尾静脉给予FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物(按CDDP 10mg·kg-1给药)1.5h后,采用原子吸收光谱法检测2种瘤块组织内的CDDP浓度,分析FA-CM-β-CD-CDDP的体内靶向能力。将20只荷HNE-1瘤裸鼠按随机数字表法分为4组(每组5只),均经尾静脉注射给药0.2mL:对照组注射生理盐水,载体组注射FA-CM-β-CD溶液,CDDP组注射浓度为3mg·kg-1的CDDP溶液,纳米药物组注射FA-CM-β-CD-CDDP溶液(含CDDP浓度3mg·kg-1),给药后21d测量各组HNE-1瘤块体积和质量,并采用免疫组化检测瘤块增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达,分析FA-CM-β-CD-CDDP的体内肿瘤抑制效应。结果 HNE-1肿瘤组织内CDDP含量明显高于CNE-2肿瘤组织(P<0.05)。纳米药物组的HNE-1瘤块体积和质量抑瘤率分别为43.36%、41.67%,较载体组(7.91%、5.56%)和CDDP组(24.51%、22.22%)均明显增加;且HNE-1瘤块PCNA阳性细胞指数为47.75%,表达较对照组(90.83%)、载体组(89.62%)和CDDP组(68.43%)均明显降低。结论构建的FA-CM-β-CD-CDDP纳米药物能够靶向抑制FR阳性的NPC瘤块生长。     

维生素D3对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的肠道保护作用研究

目的 建立坏死性小肠结肠炎（NEC）新生大鼠模型并研究维生素D3干预对肠道保护作用。方法 采用人工代乳品、缺氧和冷应激的方法诱导新生大鼠NEC，干预组提前给予维生素D3干预。HE病理和TUNEL染色检测肠管组织病理变化和细胞凋亡，ELISA实验和免疫组化染色分别检测肠道组织中炎症因子和凋亡蛋白的表达水平。结果 病理结果显示维生素D3干预可明显减少NEC新生大鼠肠道凋亡细胞数量，减轻组织损伤；ELISA和免疫组化染色结果显示维生素D3干预可降低肠道组织炎症因子TNF-α的表达水平，还降低Cleaved-Caspase3、iNOS和COX2表达水平。结论 维生素D3干预可降低NEC大鼠肠道组织炎症因子的表达，抑制细胞凋亡，发挥肠道保护作用。