基于DNA条形码及HPLC对市售黄芩的种质资源鉴定和质量评价北大核心CSCD

黄芩Scutellaria baicalensis是我国常用的大宗药材,该研究根据以前的叶绿体基因组测序结果,选取trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA序列对市售黄芩样品进行种质资源鉴定,并通过HPLC测定市售样品的黄芩苷含量,以期确定检测黄芩市场样品的最佳DNA条形码,市场样品的种质资源和质量。该研究从我国24个省收集104份样品并提取DNA进行PCR扩增,trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA 3段序列的扩增效率分别为100%、59.62%、25.96%;序列分析结果表明利用trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA分别能够鉴定5、4、2个基因型,但是与野生型基因型序列不相同,3段序列联合分析仅形成6个基因型;系统进化树和遗传距离分析结果表明,trnH-psbA片段可用于鉴别黄芩真伪样品,因此trnH-psbA片段为鉴定市场样品种质资源最佳片段,对其所鉴定的市场样品基因型(THap1~THap5)进行分析,发现THap2为市场样品主要流通基因型,占总样品量的86.55%,说明市场黄芩样品种质资源比较少。HPLC检测市售黄芩样品中的黄芩苷含量结果表明,所有采集的市售黄芩样品黄芩苷含量均超过药典规定标准,样品之间黄芩苷含量差异显著,最大相差12.21%,说明市售黄芩样品质量参差不齐,而且不同采集省份和各个基因型之间的黄芩苷含量没有显著性差异。该研究为建立黄芩鉴定标准化体系提供依据,有利于指导黄芩市场样品的流通及临床科学合理用药。     

基于叶绿体基因matK及UPLC对市售大黄的种质资源鉴定和质量分析

大黄是多基原大宗常用药材,不同基原大黄其药理活性存在一定差异。本研究基于叶绿体基因matK序列对市售大黄饮片的种质资源进行鉴定,通过UPLC对其总蒽醌和游离蒽醌含量进行测定,以期确定市售大黄的主要种质及质量。本研究从27省40市收集89份市售大黄样品并提取DNA,通过PCR扩增matK基因,扩增的matK基因序列的分析结果表明,收集的市售大黄样品都是同一基原,即掌叶大黄,共鉴定了其8个基因型:Rp1、Rp2、Rp3、Rp4、Rp5、Rp6、Rp10和Rp12,其中来自甘肃、四川和云南省的Rp4和Rp6是主要流通基因型,分别占总样品量40.45%和37.08%。系统发育树结果表明, 8个基因型主要分成2大支,其中主要基因型Rp4和Rp6聚在同一大支,遗传距离分析结果表明8个基因型遗传距离在0.001～0.010之间。利用UPLC检测市场样品中的总蒽醌和游离蒽醌含量结果表明, 93.26%样品符合药典标准。样品之间总蒽醌含量和游离蒽醌的含量差异显著,其中游离蒽醌相差1.01%;总蒽醌含量相差3.79%,说明市售大黄样品质量存在参差不齐的现象,但是不同采集省份之间市售大黄总蒽醌和游离蒽醌含量...     

非黏附骨髓间充质干细胞移植改善脑缺血小鼠的学习记忆功能

背景：非黏附骨髓间充质干细胞在体外培养中具有自我更新能力,可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,表现出多分化潜能,在移植到缺血损伤脑内可存活并且部分可分化为神经细胞或神经胶质细胞。 目的：观察小鼠非黏附骨髓间充质干细胞移植到缺血小鼠脑内对神经功能的修复作用。 方法：全骨髓法分离β-Gal转基因小鼠总骨髓细胞,采用反复转移非黏附骨髓细胞的培养法收集纯化的第3代非黏附骨髓间充质干细胞。20只C57BL/6J小鼠建立大脑中动脉阻塞模型,随机区组法分为2组,造模后7 d,细胞移植组将第3代非黏附骨髓间充质干细胞悬液3 μL定向移植到小鼠脑损伤处,对照组注射等量生理盐水。移植28 d后进行Morris水迷宫实验,连续8 d。 结果与结论：在定位航行实验中细胞移植组小鼠的逃避潜伏期及游泳总路程均较对照组明显缩短(P < 0.05),空间探索实验中细胞移植组小鼠穿越原平台次数较对照组明显增多(P < 0.05)。提示非黏附骨髓干细胞移植能够提高脑缺血模型小鼠的学习记忆能力,改善神经功能。     

不同栽培方式产地蒙古黄芪中黄芪甲苷和总黄酮含量差异分析

目的:比较不同栽培方式、产地蒙古黄芪中黄芪甲苷、总黄酮含量差异。方法:采用HPLC、紫外分光光度法分别测定黄芪甲苷、总黄酮含量并对其结果进行方差分析。结果:育苗移栽和种子直播蒙古黄芪中黄芪甲苷平均质量分数分别为0.151%、0.245%,总黄酮平均质量分数分别为0.508%、0.541%。不同产地移栽蒙古黄芪中黄芪甲苷质量分数为0.061%～0.323%,总黄酮质量分数为0.376%～0.903%;不同产地种子直播蒙古黄芪中黄芪甲苷质量分数为0.161%～0.343%,总黄酮质量分数为0.399%～0.825%。结论:不同栽培方式的蒙古黄芪中黄芪甲苷含量差异有统计学意义(P0.05),且种子直播黄芪大于育苗移栽黄芪,总黄酮含量差异无统计学意义;不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷和总黄酮含量差异有统计学意义。其中,育苗移栽蒙古黄芪中山西朔州市产区的黄芪甲苷含量最高,宁夏河川乡产区所含总黄酮含量最高。种子直播蒙古黄芪中,陕西子洲县西庄乡产区的黄芪甲苷含量最高,陕西府谷县产区的黄芪总黄酮含量最高。     

尿激酶及利福霉素联合异烟肼腔内注射治疗结核性脓胸的疗效观察

目的观察尿激酶及利福霉素联合异烟肼腔内注射治疗结核性脓胸临床疗效。方法将60例结核性脓胸患者随机分为对照组和治疗组,每组各30例,两组均以常规抗结核治疗,对照组予异烟肼腔内注射,治疗组予尿激酶及利福霉素联合异烟肼腔内注射,观察两组疗效。结果治疗组总有效率96.67%,症状缓解及脓腔消失时间均明显缩短,与对照组比较均有统计学意义。结论尿激酶及利福霉素联合异烟肼腔内注射治疗结核性脓胸疗效可靠,有一定临床运用价值。     

三七PnMYB1R1基因的克隆、亚细胞定位与不同胁迫下的表达分析

MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,在植物信号转导、生长发育和植物防御反应中起到重要作用。本研究以三七(Panax notoginseng)为材料,设计特异引物,克隆了三七中1R-MYB转录因子PnMYB1R1基因,并进行氨基酸序列分析、原核表达和纯化、亚细胞定位、转录活性分析、组织特异性分析及非生物胁迫下的诱导表达分析。PnMYB1R1基因开放阅读框(ORF)长738 bp,编码245个氨基酸,蛋白分子质量27.0 kD。序列分析及系统进化树结果表明PnMYB1R1包含1个保守的R3结构域,属于1R-MYB型转录因子中的TRF-like类蛋白。构建原核表达载体pET28a-PnMYB1R1并在大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中成功表达PnMYB1R1重组蛋白,纯化得到可溶性重组蛋白。亚细胞定位实验结果表明PnMYB1R1定位于植物细胞的细胞核中。转录活性分析显示PnMYB1R1转录因子具有转录激活活性。实时荧光定量PCR结果表明PnMYB1R1基因在三七主根中表达量最高,茎、叶次之,须根中表达量最低。盐、低温及干旱胁迫均能够影响主根、须根、茎、叶中PnMYB1R1基因的表达...     

雾化吸入复方异丙托溴铵治疗慢性阻塞性肺病急性发作期的疗效观察

目的观察雾化吸入复方异丙托溴铵气雾剂治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作期的疗效。方法选择80例住院的COPD急性加重期患者,随机分为治疗组和对照组各40例。观察2组患者治疗前后呼吸困难评分、咳痰评分、肺功能和临床疗效的变化。结果治疗1周后两组患者的呼吸困难评分、咳痰评分、肺功能指标、临床疗效均较治疗前明显下降(P<0.05或P<0.01),且治疗组下降幅度较对照组更明显(P<0.05)。结论雾化吸入复方异丙托溴铵治疗COPD急性发作期患者疗效显著,值得临床推广应用。     

非黏附骨髓间充质干细胞移植改善脑缺血小鼠的学习记忆功能

背景：非黏附骨髓间充质干细胞在体外培养中具有自我更新能力,可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,表现出多分化潜能,在移植到缺血损伤脑内可存活并且部分可分化为神经细胞或神经胶质细胞。目的：观察小鼠非黏附骨髓间充质干细胞移植到缺血小鼠脑内对神经功能的修复作用。方法：全骨髓法分离β-Gal转基因小鼠总骨髓细胞,采用反复转移非黏附骨髓细胞的培养法收集纯化的第3代非黏附骨髓间充质干细胞。20只C57BL／6J小鼠建立大脑中动脉阻塞模型,随机区组法分为2组,造模后7d,细胞移植组将第3代非黏附骨髓问充质干细胞悬液3μL定向移植到小鼠脑损伤处,对照组注射等量生理盐水。移植28d后进行Morris水迷宫实验,连续8d。结果与结论：在定位航行实验中细胞移植组小鼠的逃避潜伏期及游泳总路程均较对照组明显缩短（P〈O．05）,空问探索实验中细胞移植组小鼠穿越原平台次数较对照组明显增多（P〈0．05）。提示非黏附骨髓干细胞移植能够提高脑缺血模型小鼠的学习记忆能力,改善神经功能。