哮喘患者外周血单个核细胞中热休克蛋白90和糖皮质激素受体mRNA的表达

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)和糖皮质激素受体(GR)mRNA在糖皮质激素敏感型(SS)、依赖型(SD)和抵抗型(SR)哮喘中的表达及其在SR哮喘发病中的作用.方法采用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)的方法分别测定正常组(10名)、SS哮喘组(10例)、SD哮喘组(5例)和SR哮喘组(6例)患者的外周血单个核细胞(PBMC)中GR和HSP90mRNA的表达,并在体外用白细胞介素2(IL-2)、IL-4分别和联合刺激上述细胞观察其受刺激后GR和HSP90mRNA表达的改变情况.结果SR哮喘组患者的GR和HSP90mRNA表达水平最高,分别为0.730±0.171、1.122±0.165,SS哮喘组次之,分别为0.359±0.350、0.885±0.250,SD哮喘组最低,分别为0.017±0.008、0.078±0.039.正常组有一定表达,分别为0.052±0.013、0.362±0.101.GR和HSP90mRNA的表达在各组间作相互比较,差异有显著性(P均<0.05).正常组、SS、SD和SR哮喘组HSP90/GR的比值分别为7.15±1.84、8.39±7.95、5.51±3.30、1.57±0.18,SR哮喘组HSP90/GR比值与前三组比较,差异有显著性(P<0.05).IL-2和IL-4联合刺激可使SS、SD和SR哮喘组GRmRNA表达增强和SS、SD哮喘组HSP90mRNA表达增强,却不能使SR哮喘组HSP90mRNA表达增强.结论SR哮喘组中HSP90mRNA表达相对不足造成HSP90/GR比值降低可能是SR哮喘组形成的原因之一,IL-2和IL-4联合应用对GR和HSP90mRNA表达的不同调节作用可能是形成SR哮喘组HSP90/GR比值降低的原因之一.     

利多卡因手控定量雾化吸入治疗激素抵抗型哮喘的研究

目的　观察定量手控雾化吸入利多卡因治疗激素抵抗型 (SR)哮喘的疗效 ,以及减停口服激素的功效 ,探讨其对外周血和痰液中嗜酸性粒细胞 (EOS)、肺功能、外周血单个核细胞(PBMC)糖皮质激素受体 (GR)的影响。方法　采用单盲、自身前后对照方法 ,15例激素抵抗型哮喘患者吸入利多卡因 3个月 ,观察临床疗效和口服激素减停剂量。动态检测外周血和痰液中EOS计数、FEV1% ,并于治疗前治疗后 3 0天和 43天分别测定PBMC的GR数目。结果　 15例患者经定量手控雾化吸入利多卡因治疗 3个月后 ,咳嗽、喘息症状改善 (P <0 .0 1) ,肺部哮鸣音明显减少 (P <0 .0 0 1) ,外周血、痰中EOS数目减少 (P <0 .0 2 ) ,FEV1%明显提高 (P <0 .0 1) ,口服泼尼松平均减少约 8.83mg ,无 1例出现严重的毒副作用。结论　利多卡因吸入治疗激素抵抗型哮喘安全有效 ,可以提高FEV1的水平 ,并能成功地减撤口服激素。     

Ⅰ型AIH患者GRα、β mRNA的表达与糖皮质激素疗效的相关性

目的探讨Ⅰ型自身免疫性肝炎（AIH）患者外周血单个核细胞（PBMC）内糖皮质激素受体（GR）两种亚型GRα、GRβmRNA的表达与糖皮质激素（GC）治疗效应之间的关系。方法应用逆转录—聚合酶链反应法检测不同激素效应（激素敏感、激素亚敏感、激素抵抗）的Ⅰ型AIH患者及正常对照者的GRα、GRβmRNA的表达水平。结果Ⅰ型AIH患者及正常对照者均可检测到GRαmRNA,与正常对照相比,激素敏感、激素亚敏感、激素抵抗者的GRαmRNA的表达无统计学差异（P〉0.05）;GRβmRNA在激素抵抗组中高于其他各组（P〈0.01）。结论Ⅰ型AIH患者GRβmRNA的表达增多可能与GC治疗抵抗有关。     

糖皮质激素受体基因R477H多态性与激素抵抗型哮喘的相关性

目的检测糖皮质激素受体（GR）基因R477H的多态性,探讨其与激素抵抗型哮喘的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR—SSP）的方法对217例激素敏感型哮喘、64例激素抵抗型哮喘患者及221例健康对照者的GR基因R477H进行多态性分析,判断其与激素抵抗、血清皮质醇浓度及GR解离常数（Kd）的相关性。结果GG、GA及AA基因型频率在抵抗组与敏感组和对照组比较具有显著差异;抵抗组GA＋AA基因型及A等位基因频率明显高于其他两组;抵抗组Kd值显著高于敏感组和对照组,但各组内各基因型Kd值无显著差异;血清皮质醇浓度在各基因型无明显差异。结论GR基因R477H多态性与哮喘激素抵抗的产生有关,等位基因A可能是激素抵抗产生的易感基因。     

糖皮质激素敏感型与抵抗型患者GRα、GRβ及SRp30c mRNA表达水平

糖皮质激素（以下简称激素）是临床上治疗许多慢性炎症性疾病的首选药，它通过与激素受体（GR）结合而发挥药理作用，但有部分激素抵抗型患者对激素治疗不敏感，其发病机制目前尚不清楚。人的细胞中存在两种GR亚型——GRα和GRβ。国内外许多研究表明，激素抵抗的发生与GRβ表达异常增多有关。近来又有研究提示，富含丝氨酸／精氨酸蛋白家族（SR蛋白家族）成员SRp30c在促进正常人中性粒细胞GR pre-mRNA发生选择性剪接形成编码GRβmRNA的过程中发挥重要作用。     

p38 MAPK抑制剂对激素抵抗型哮喘患者肺泡巨噬细胞炎性因子的作用

目的探讨p38 MAPK抑制剂SB239063对激素抵抗型哮喘患者肺泡巨噬细胞炎性因子的作用。方法选取急性发作的哮喘患者,分为激素抵抗型哮喘组(简称SR组)与激素敏感性哮喘组(简称SS组)。采用ELISA及RT-qPCR方法检测肺泡灌洗液中巨噬细胞的CCL11,IL-8及IL-13蛋白和mRNA水平。分析比较单独地塞米松刺激或联合SB239063及地塞米松刺激,对不同组肺泡灌洗液中巨噬细胞的CCL11、IL-8及IL-13水平的影响。结果经脂多糖诱导后,与SS组相比,SR组患者肺泡灌洗液中巨噬细胞CCL11、IL-8及IL-13水平增高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。采用地塞米松处理后,SS组肺泡灌洗液中巨噬细胞的CCL11、IL-8及IL-13水平下调,差异具有统计学意义(P 0. 05),而SR组肺泡灌洗液中巨噬细胞CCL11、IL-8及IL-13水平与处理前相比无明显变化,其差异无统计学意义(P 0. 05)。联合SB239063及地塞米松处理后,SR组CCL11、IL-8、IL-13水平下调,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 p38 MAPK抑制剂可降低SR哮喘患者的肺泡巨噬细胞炎性因子的表达,提高激素治疗的敏感性,为SR哮喘治疗提出新思路。     

糖皮质激素抵抗型哮喘的临床、糖皮质激素受体及细胞因子特征

目的探讨糖皮质激素抵抗（ＳＲ）型哮喘的临床特征及发生机制。方法选择ＳＲ型哮喘患者１５例及糖皮质激素敏感（ＳＳ）型哮喘患者１５例，比较两型患者的一般临床资料和基础肺功能。采用放射配基结合位点分析法检测外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的糖皮质激素受体（ＧＣＲ）水平，观察氟美松（１０－７ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＢＭＣ产生白细胞介素（ＩＬ）－４的抑制作用。结果除了对泼尼松治疗的临床反应明显不同外，ＳＲ型与ＳＳ型哮喘在一般临床特征及基础肺功能方面差异均无显著性。ＳＲ型哮喘患者ＰＢＭＣ的ＧＣＲ水平显著低于ＳＳ型哮喘患者（Ｐ＜０．０５）。氟美松对ＰＢＭＣ产生ＩＬ－４的抑制作用在ＳＲ型哮喘显著低于ＳＳ型哮喘（Ｐ＜０．００１）。结论对糖皮质激素治疗的反应性差是ＳＲ型哮喘的惟一临床特征。Ｔ细胞对糖皮质激素的抑制作用相对不敏感是ＳＲ型哮喘的细胞学基础，ＧＣＲ异常可能是其原因之一     

糖皮质激素受体αβ和剪接因子SRp30c在系统性红斑狼疮的表达及意义

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）糖皮质激素（GC）抵抗患者外周血单个核细胞（PBMC中糖皮质激素受体（GR）α、GRβ及剪接因子SRp30c的表达及其与临床指标的相关性，以探讨GC抵抗发生的可能机制。方法根据患者对GC反应的敏感程度分为GC抵抗组和GC敏感组，分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测两组患者与健康人外周血PBMC中GRα、GRβ及剪接因子SRp30c的mRNA表达量；免疫细胞化学（ICC）方法测定外周血PBMC的GRα、GRβ蛋白水平的表达，并分析GR及SRp30c变化的意义及与各临床指标之间的关系。结果①SLE患者与正常对照者PBMC均有GRα、GRβ的mRNA及蛋白的表达，以GRα占大部分；②GC抵抗组GRβ和SRp30c的mRNA表达量均明显高于GC敏感组及正常对照组（P〈0．05），GC抵抗组GRβ阳性细胞数也明显高于GC敏感组及正常对照组（P〈0．05），但三组GRctmRNA表达量及阳性细胞数比较差异无统计学意义；③两组的临床指标中肾脏受累时间、尿蛋白定量（24h）、血浆白蛋白水平及SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分差异有统计学意义（P〈0．05），但采用多因素Logistic回归分析后，显示只有GRα和SRp30c的mRNA表达量是GC抵抗发生的独立危险因素。结论GRβ及剪接因子SRp30c在GC抵抗的发生中可能发挥重要作用，检测患者外周血PBMC中GRβ及SRp30c的表达有可能预测患者对激素治疗的反应，给临床治疗提供进一步的依据。     

激素抵抗性哮喘药物治疗近况

支气管哮喘 (哮喘 )常用药物包括糖皮质类固醇激素、β-受体兴奋剂、M受体阻断剂 (溴化异丙托品 )、茶碱及抗过敏药物等 ,合理应用可使大多数患者症状得到有效控制。但临床仍有极少部分哮喘患者经大剂量激素治疗后其肺功能和症状都没有改善 ,这部分对激素治疗效果不明显的哮喘称为激素抵抗性哮喘 (steroid resistantasthma简称 SRA)。SRA分为两型 : 型即部分激素抵抗型 (又称激素依赖型哮喘 ) , 型即完全的激素抵抗型 ,对激素治疗完全没有反应。但因 SRA的治疗棘手及预后较差 ,近年国内外进行了许多药物治疗的探索 ,本文就近几年的药物…     

健脾清肠方对脾虚湿热型激素依赖溃疡性结肠炎患者GRα表达的影响

[目的]探讨健脾清肠方治疗脾虚湿热型激素依赖溃疡性结肠炎的作用机制.[方法]选取脾虚湿热型激素依赖溃疡性结肠炎患者60例,随机数字表法分为试验组和对照组各30例.2组均给予强的松基础治疗,试验组加服健脾清肠方,对照组给予补脾益肠丸.疗程为12周.患者采用标准激素减量方法撤减激素.2组于治疗前后分别进行中医证候疗效及激素撤退情况分析.使用免疫细胞化学染色方法检测患者外周血单个核细胞（PBMC）中GRα的表达,比较治疗前后变化情况.[结果]试验组中医证候疗效总有效率为96.7％,对照组为80％,试验组中医证候改善明显优于对照组（P＜0.01）;2组治疗后累积光密度值均明显升高（P＜0.01）,试验组上调GRα表达水平优于对照组（P＜0.01）.[结论]与对照组比较,健脾清肠方可有效改善脾虚湿热型激素依赖溃疡性结肠炎的临床中医证候,上调GRα的表达水平,改善激素依赖状况,具有良好的临床疗效.     

糖皮质激素抵抗型哮喘的免疫学研究

目的探讨糖皮质激素抵抗型（ＳＲ）哮喘的发生机制及治疗对策。方法检测ＳＲ哮喘及糖皮质激素敏感性（ＳＳ），哮喘患者经强的松（２０ｍｇ／ｄ）治疗前后血清可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平的变化，用体外淋巴细胞增殖试验观察地塞米松、氧化苦参碱和胸腺免疫抑制物对外周血Ｔ细胞增殖的抑制作用。结果强的松治疗后，ＳＳ哮喘患者的血清ｓＩＬ－２Ｒ水平显著降低（Ｐ＜０．００１），但ＳＲ哮喘患者的ｓＩＬ－２Ｒ水平无明显变化（Ｐ＞０．５）。地塞米松（１０－７ｍｏｌ／Ｌ）对ＳＲ哮喘患者Ｔ细胞增殖的抑制作用显著低于ＳＳ哮喘患者（Ｐ＜０．００２），但氧化苦参碱和胸腺免疫抑制物对Ｔ细胞增殖的抑制作用在两组患者之间差异无显著性。结论Ｔ细胞对糖皮质激素的反应性降低以及由此引起的Ｔ细胞持续活化是ＳＲ哮喘的免疫学特征。糖皮质激素以外的免疫抑制剂在ＳＲ哮喘治疗中的意义值得进一步探讨。     

Steroid-unresponsive asthma

Although most patients with chronic asthma respond to corticosteroid therapy, a small subset of asthmatics are unresponsive to corticosteroids and demonstrate persistent airway obstruction and inflammation despite treatment with high doses of systemic glucocorticoids. There are at least two types of steroid-resistant asthma. Type I steroid-resistant (SR) asthma is cytokine induced and is associated with increased expression of glucocorticoid receptor beta, a less active glucocorticoid receptor isoform. Type II SR asthma is due to low numbers of glucocorticoid receptors. An important distinction between these two types of SR asthma is that the glucocorticoid receptor defect in Type I, but not Type II, SR asthma is reversible in culture and is sustained by incubation with combination interleukin (IL)-2 and IL-4. The treatment of these patients requires a systematic approach to rule out underlying conditions that lead to steroid resistance or treatment failure as well as the use of alternative strategies to inhibit airway inflammation.     

Decreased glucocorticoid binding affinity to glucocorticoid receptor is important in the poor response to steroid therapy of older-aged patients with severe bronchial asthma.

The aim of this study was to determine whether alterations in glucocorticoid (GC) to GC receptor (GC/GCR) binding affinity and the state of airway remodeling contribute to the poor response to GC therapy of severe bronchial asthma patients in old age. Peripheral blood mononuclear cells were obtained from two groups with severe asthma, 10 patients with steroid resistant (SR), 7 patients with steroid sensitive (SS), and 6 normal controls. GC/GCR binding affinity for dexamethasone was determined by using a radioligand binding assay with Scatchard analysis, and bronchial wall thickness in high-resolution computed tomography was used to determine the degree of airway remodeling. SR patients had decreased GC/GCR binding affinity (Kd = 24.3 +/- 9.55; p < 0.05) compared with the SS patients (Kd = 13.5 +/- 1.48; p < 0.05) and the normal controls (Kd = 4.24 +/- 1.09). The inner diameter of bronchi and the thickness of the bronchial wall of segmental and subsegmental bronchi were increased significantly in patients compared with normal controls. However, no significant differences were found between the SR and SS patients. Our results suggest that decreased GC/GCR binding affinity may be an important factor of clinical GC resistance in the acute exacerbation of chronic severe asthma in older-aged bronchial asthma patients.     

氟美松对激素抵抗型哮喘患者外周血单个核细胞的影响

为探讨激素抵抗（ＳＲ）型哮喘的发病机制，应用植物血凝素（ＰＨＡ）对淋巴细胞的增殖试验，观察不同浓度的氟美松对淋巴细胞增殖的抑制作用，并采用放射免疫法（ＲＩＡ）测定血浆皮质醇浓度。结果显示：氟美松对ＳＲ型哮喘患者淋巴细胞增殖的抑制作用明显低于激素敏感（ＳＳ）型哮喘患者（Ｐ＜０．０５）；ＳＲ型、ＳＳ型哮喘患者的血浆皮质醇浓度明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０１），ＳＲ型又明显低于ＳＳ型（Ｐ＜０．０５）。提示：（１）ＳＲ型哮喘患者的淋巴细胞对糖皮质激素的抑制作用弱，反应性降低；（２）ＳＲ型哮喘患者的血浆皮质醇浓度明显降低与长期大量应用糖皮质激素有关。     

哮喘患者外周血单个核细胞白细胞介素—4和介素—5的基因表达

为进一步了解激素抵抗型哮喘的发病与细胞免疫功能紊乱的关系，应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针、抗地高辛抗体－碱性磷酸酶检测系统行细胞涂片原位杂交，测定了１５例激素抵抗（ＳＲ）型和１５例激素敏感（ＳＳ）型哮喘患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中白细胞介素（ＩＬ）－４和ＩＬ－５基因的ｍＲＮＡ表达。结果显示：（１）单独培养的ＳＲ型和ＳＳ型哮喘患者的外周血单个核细胞中ＩＬ－４ｍＲＮＡ和ＩＬ－５ｍＲＮＡ阳性细胞率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。（２）与氟美松（１０－７ｍｏｌ／Ｌ）共同培养４８小时后，ＳＳ型哮喘患者的外周血单个核细胞中ＩＬ－４ｍＲＮＡ和ＩＬ－５ｍＲＮＡ阳性细胞率较单独培养时明显减少（Ｐ＜０．０１）；而在ＳＲ型患者中则无明显改变（Ｐ＞０．０５）。提示氟美松不能有效地抑制ＳＲ型哮喘患者的外周血单个核细胞中ＩＬ－４和ＩＬ－５基因的ｍＲＮＡ表达，这可能是发生激素抵抗的机制之一。     

Inhaled and systemic corticosteroid therapies: Do they contribute to inspiratory muscle weakness in asthma?

BACKGROUND: Patients with asthma incur the risk of steroid-induced myopathy, which is a well-known side effect of treatment with corticosteroids. However, the adverse effect of long-term steroid treatment on respiratory muscle function remains controversial. OBJECTIVE: We aimed to evaluate the effects of long-term moderate dose of systemic corticosteroids and high-dose inhaled beclomethasone on maximal inspiratory and expiratory pressures (PImax and PEmax, respectively) in two groups of asthmatic patients exhibiting comparable levels of hyperinflation. METHODS: Twelve steroid-dependent asthmatic patients requiring 10-20 mg/day of prednisone-equivalent corticosteroids for an average of 9.83 +/- (SD) 9.86 years; 14 subjects with moderate to severe asthma who have used inhaled beclomethasone for at least 1 year at a daily dose higher than 1,000 microg and 15 healthy controls were included to the study. RESULTS: No significant difference in pulmonary function tests and arterial blood gases appeared between two asthmatic groups with different treatment modalities. PImax as an absolute value was significantly lower in steroid-dependent asthmatics than in patients treated with inhaled beclomethasone and controls (p < 0.01). %PImax was also lower in steroid-dependent asthmatics than in control groups (p < 0.01). A significant correlation was found between %PImax and hyperinflation assessed by %RV, %FRC, %FRC/TLC (p < 0.05) in all asthmatic patients. CONCLUSIONS: We believe that hyperinflation plays a major role in inspiratory muscle dysfunction in asthma, but the finding of significantly decreased PImax values in steroid-dependent asthmatics when compared with patients on high-dose inhaled beclomethasone with a comparable level of hyperinflation points to a deleterious effect of long-term, moderate-dose systemic corticosteroid but not high-dose beclomethasone on inspiratory muscle function in asthmatics.