鞘内注射AG-490对骨癌痛小鼠脊髓水平星形胶质细胞活化和热痛觉的影响

目的：探讨脊髓水平IL-6-酪氨酸激酶-2( Janus kinase 2,JAK2)信号通路调控星形胶质细胞活化的机制及其 对骨癌痛的影响。方法：将NCTC 2472纤维肉瘤细胞注入C3H/HeNCrlVr雄性小鼠股骨骨髓腔制作骨癌痛模型,以 不含纤维肉瘤细胞的等体积α-MEM培养基行骨髓腔内注射制作假手术模型。采用热缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)评估疼痛水平。取腰段脊髓组织(L3~L5水平),分别应用Real-time RT-PCR和Western印迹检测脊髓水平 星形胶质细胞中纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和JAK2 mRNA与蛋白表达变化。鞘内注射给予JAK2 拮抗剂AG-490,观察小鼠痛行为学及脊髓水平GFAP mRNA和蛋白表达的变化。结果：骨癌痛模型组小鼠术后10, 14,21 d的PWL均较假手术组显著缩短(P<0.05);骨癌痛模型组的脊髓组织GFAP和JAK2 mRNA和蛋白表达显著增加 (P<0.05);鞘内注射30或90 nmol AG-490可以显著缩短骨癌痛模型组小鼠PWL,同时可以抑制脊髓组织GFAP mRNA和 蛋白的表达(P<0.05)。结论：脊髓水平IL-6-JAK2信号通路可能在骨癌痛的维持中发挥重要作用;IL-6-JAK2信号转导通 路可能通过抑制星形胶质细胞的活化来发挥镇痛作用。     

氯胺酮对未成年大鼠学习能力和细胞外信号调节激酶的影响

目的研究氯胺酮对未成年大鼠学习记忆能力的影响,并观察其对海马神经元细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法48只21日龄SD大鼠随机均分为六组,分别为空白对照组(C组)、训练组(T组)、氯胺酮注射后6、12、24和72h组(K6、K12、K24、K72组)。氯胺酮组大鼠予以50mg/kg氯胺酮腹腔注射,在各时间点用Y型迷宫测试各组大鼠的空间搜索和学习能力。训练组只接受Y迷宫测试。所有动物训练后即刻取大鼠海马行免疫组化染色,观察ERK1、ERK2和p-ERK1/2的表达。结果K6、K12、K24组大鼠的学习次数和总反应时间与T组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示C组大鼠海马仅有极少量p-ERK1/2表达,而ERK1和ERK2有少许表达;所有接受迷宫测试大鼠的ERK1、ERK2和p-ERK1/2表达比C组均有显著增多(P<0.01)。K6、K12组大鼠海马ERK1、ERK2和p-ERK1/2的表达与T组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论单次注射50mg/kg氯胺酮可在短时间内损害21日龄SD大鼠的空间学习能力,而这个损害与海马ERK信号转导通路受到抑制有关。     

身痛逐瘀汤对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓星形胶质细胞活化的影响

目的 探讨身痛逐瘀汤的镇痛作用及对脊髓水平胶质细胞纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。     

鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN93对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在骨癌痛发病机制中的作用.方法 雄性C3H/HeN小鼠40只分为5组:假手对照Sham组(S组n=8),癌痛模型对照Control组(C组n=8)和KN93 Treat组(T1组n=8、T2组n=8、T3组n=8).C组和T组(T1、T2、T3)小鼠左侧股骨远端骨髓腔接种溶于α-MEM的NCTC 2472纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的α-MEM.在术后的第14天S组和C组鞘内注射20%DMSO 5μl,T1、T2、T3组分别鞘内注射溶于20%DMSO的KN93 15 nmol/5μl、30nmol/5μl、60nmol/5μl.各组于给药前及给药后的0.5 h、2h、4h、8 h检测小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).结果 鞘内给予KN9315 nmol对骨癌痛小鼠痛行为无影响,鞘内给予KN93 30nmol、60nmol能剂量依赖性减轻小鼠痛行为反应,给药后0.5 h 2组小鼠自发抬足次数[(7.25±1.49)次、(4.12±1.36)次]比C组[(11.62±1.92)次]降低,PWMT[(1.28±0.14)g、(1.75+0.46)g]、PWTL[(14.64±2.12)s、(16.85±1.61)s]比C组[(0.47±0.16)g、(11.32±1.68)s]升高,差异有显著性(P＜0.05).作用2h达到高峰,维持到4h左右,8 h后基本消失.结论 CaMKⅡ在骨癌痛的发病中起重要作用,鞘内注射KN93能够剂量依赖性改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

氯胺酮对未成年大鼠记忆维持及海马p-CREB、c-fos表达的影响

目的 探讨氯胺酮(Ket)对未成年大鼠记忆维持能力及海马磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(p-CREB)、c-fos表达的影响及其相关性.方法 筛选合格21日龄SD大鼠72只分为正常对照组、生理盐水组、假训练组、氯胺酮组(根据时间与剂量不同分为四个亚组:Ket1a、Ket1b:分别给与氯胺酮50 mg/kg、100 mg/kg腹腔注射后3 d进行训练).生理盐水组腹腔注射等体积的生理盐水.采用Y型迷宫进行学习记忆能力测试,应用免疫组化法检测海马p-CREB、c-fos的表达.结果 与生理盐水组相比,Ket1a、Ket1b组大鼠记忆维持能力下降(P＜0.05),同时海马神经元p-CREB、c-fos的表达减少(P＜0.05);而Ket3a组、Ket3b组差异无统计学意义(P＞0.05).与正常对照组相比,其余各组海马神经元p-CREB、c-fos表达均增多(P＜0.05).而Ket1a和Ket1b或Ket3a和Ket3b组之间的行为学指标与免疫组化指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 氯胺酮可能通过抑制未成年大鼠海马p-CREB、c-fos的表达短期影响其记忆维持能力.     

反复注射不同剂量氯胺酮对幼年小鼠认知功能的影响

目的 探讨反复注射不同剂量氯胺酮对幼年小鼠认知功能的影响.方法 21 d龄小鼠50只,体重10～15 g,随机分为5组(n=10),正常对照组(c组);生理盐水组(N组)腹腔注射生理盐水0.1 ml,1次/d,连续7 d;不同剂量氯胺酮组(K1组、K2组、K3组)分别腹腔注射氯胺酮25、50、100 mg/kg,1次/d,连续7 d.于给药结束后1 d时测定学习功能,于给药结束后2 d时测定记忆功能.记忆功能测定结束后每组处死4只小鼠,采用免疫组化法测定海马脑源性神经营养因子(BDNF)表达;处死6只小鼠,采用免疫印记法测定海马BDNF蛋白表达.结果 与C组比较,N组和K1组学习记忆功能减退,BDNF蛋白表达下调(P＜0.05或0.01),K2组和K3组差异无统计学意义(P＞0.05);N组和K1组学习记忆功能和BDNF蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 50、100 mg/kg(连续7 d反复给药)氯胺酮对幼年小鼠认知功能无影响,25 mg/kg(连续7 d反复给药)氯胺酮可降低认知功能.     

氯胺酮对幼年大鼠学习能力和海马细胞外信号调节激酶表达的影响

目的:研究不同剂量氯胺酮对幼年大鼠学习记忆能力影响,并观察其对海马神经元细胞外信号调节激酶表达的影响。方法:48只21日龄SD大鼠随机分为6组,C组(正常对照组),T组(训练组),K0组(0.9%Nacl组),K1组(25mg/kg氯胺酮组),K2组(50mg/kg氯胺酮组),K3组(100mg/kg氯胺酮组),每组8只。K1,K2,K3组大鼠分别予以25mg/kg,50mg/kg,100mg/kg氯胺酮腹腔注射(ip),N组予等量生理盐水腹腔注射,在注射后24h用Y型迷宫测试各组大鼠的空间搜索和学习能力,训练组只接受Y迷宫测试。所有动物训练后即刻取大鼠海马行免疫组化染色,观察ERK1,ERK2和p-ERK1/2表达情况。结果:K2、K3组大鼠的训练次数和总反应时间与T组和K0组比较有显著性差异(P<0.05);免疫组化显示K3组大鼠海马ERK1,ERK2和p-ERK1/2的表达与T组和K0组相比有显著性差异(P<0.05)。结论:麻醉剂量和大剂量氯胺酮可损害幼年大鼠的空间学习能力,而这个损害与海马ERK信号转导通路受到抑制有关。     

鞘内注射丹参酮ⅡA对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓水平炎症因子的影响

目的探讨鞘内注射丹参酮ⅡA对骨癌痛小鼠热痛觉过敏及脊髓水平白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-理（TNF-仅）表达的影响。方法C3H／HeNCrlVr雄性小鼠84只,应用随机数字表法分为：（1）丹参酮IIA10μg组;（2）丹参酮IIA20μg组;（3）丹参酮IIA40μg组;（4）正常组;（5）DMSO＋Sham组;（6）丹参酮IIA＋Sham组;（7）DMSO＋Tumor组。用热辐射刺激仪测定缩足潜伏期（PWTL）。应用Real．timePCR技术检测mRNA表达。结果各组小鼠基础PⅥ吼差异无统计学意义（P〉0．05）。术后14d,与正常组相比,假手术组PwTL差异无统计学意义（P〉0．05）,而骨癌痛组PWTL明显降低（P〈0．05）。术后21d,和正常组相比,丹参酮IIA＋Sham组、DMSO＋Sham组PwTL和脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达差异均无统计学意义（P〉0．05）;DMSO＋Tumor组PWTL[（6．19±1．26）s]明显低于正常组[（16．01±1．59）s]（P〈0．05）,脊髓IL—1β、IL-6、TNF—α表达则高于正常组;丹参酮IIA20μg组[（9．83±1．26）s]、丹参酮IIA40μg组[（10．29±2．95）s]PWTL高于DMSO＋Tumor组,脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达则低于DMSO＋Tumor组（P〈0．05）;丹参酮IIA10μg组PwTL[（6．67±0．96）S]、脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平与DMSO＋Tumor组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论鞘内注射丹参酮ⅡA具有剂量依赖性抗癌痛作用,抑制脊髓水平表达释放炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α可能是其机制之一。     

老年大鼠空间记忆与海马N-甲基-D天冬氨酸受体2B亚基mRNA的表达

目的 观察老年大鼠在Y迷宫训练建立空间记忆后N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)2B亚基mRNA在海马区的表达变化.方法 用Y迷宫对老年(12月龄)大鼠进行短期强化训练,建立空间记忆后,于即刻,3h,6h,12h,24h,3d每组处死8只老年大鼠,取双侧海马,应用RT-PCR方法 检测大鼠海马NM-DA受体2B亚基(NR2B)mRNA的表达变化.结果 训练组动物(包括即刻,3h,6h,12h,24h组)海马NR2B mRNA的表达量[分别为(683.83±78.13),(806.00±81.43),(848.83±80.84),(915.17±84.25),(568.53±77.14)]明显高于对照组和假训练组[(398.17±74.76),(418.33±70.17),P<0.05],且12h时表达最多.3d组的表达量(430.33±74.41)与对照组和假训练组相比差异无统计学意义.结论 NR2B可能参与了学习记忆信号的转导过程,且在记忆训练后12h时表达最多,3d时恢复到基础水平.