ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响

目的　探究N⁶-甲基腺苷（m⁶A）去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞（LEC）氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法　运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障（ARC）患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的表达。通过紫外线B（UVB）构建晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞氧化损伤模型和靶向ALKBH5设计小干扰RNA（siRNA）转染构建敲降模型,运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测氧化损伤模型和敲降模型中ALKBH5的mRNA和蛋白表达。运用CCK-8法检测Control组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中SRA01/04细胞活力变化。免疫荧光染色检测UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中15A3的荧光强度变化。运用qRT-PCR检测转染对照siNC组和转染siALKBH5#3组中11个DNA氧化损伤修复基因（ODRGs）的mRNA表达变化。结果　在ARC患者的晶状体前囊膜上皮细胞中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。在UVB以时间梯度诱导SRA01/04的细胞氧化损伤模型中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均呈上升后下降趋势,其中UVB照射10 min后ALKBH5 mRNA和蛋白表达升高最为显著。ALKBH5敲降效率结果显示,与转染对照siNC组相比,转染靶向ALKBH5的siRNA后,ALKBH5的mRNA和蛋白表达均显著下降。CCK-8法检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞活力明显降低。免疫荧光染色检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞内DNA氧化损伤指标15A3染色显著增加。同时,与转染对照siNC组相比,转染ALKBH5#3组SRA01/04细胞的ODRGs中,TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6 mRNA的表达均显著上升,DCLRE1A mRNA的表达显著下降,MGMT和MRE11A mRNA的表达则未见明显差异。结论　m⁶A去甲基化酶ALKBH5在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中诱导性表达上升,敲降ALKBH5可促进LEC内大部分ODRGs表达升高,参与调控LEC内损伤DNA的修复,阻止ARC的发生。     

POLH对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的　探究DNA聚合酶η（POLH）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的防御机制。方法　以年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织和H₂O₂处理的晶状体上皮细胞系SRA01/04为研究对象,分别通过RT-PCR和免疫印迹实验验证POLH的表达并筛选H₂O₂最佳作用浓度用于后续实验,将培养的SRA01/04细胞分为H₂O₂组、H₂O₂+HA组和H₂O₂+OV-POLH组,采用RT-PCR和免疫印迹实验检测POLH mRNA和蛋白表达情况,免疫荧光法检测DNA氧化损伤标志物以及TUNEL实验检测细胞凋亡变化,免疫印迹实验检测细胞中BAX、BCL-2、Nrf2和Keap1蛋白表达。结果　RT-PCR结果显示,与透明晶状体前囊膜（1.00±0.22）相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织中POLH mRNA相对表达量明显下降（0.38±0.62）（P<0.000 1）。RT-PCR和免疫印迹实验均显示,200 μmol·L^-1 H₂O₂处理的SRA01/04细胞中POLH表达量最低;TUNEL实验检测结果显示, 200 μmol·L^-1 H₂O₂处理后细胞的凋亡明显增加。RT-PCR和免疫印迹实验结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组SRA01/04细胞中POLH表达量显著升高（P<0.000 1）。免疫荧光染色结果显示,与H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞的γH2A染色明显下降。免疫印迹实验检测结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞促凋亡蛋白BAX表达量明显下降,而抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显升高（均为P<0.01）;与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞Keap1蛋白水平明显下降,而转录调控蛋白Nrf2表达明显升高（均为P<0.01）。结论　过表达POLH可通过增强DNA损伤修复功能抑制H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞凋亡,其抑制氧化应激机制可能与Nrf2-Keap1-ARE通路有关。     

线粒体融合和裂变在眼科疾病中的研究进展

线粒体是多细胞生命不可缺少的组成部分,通过裂变和融合进行形态上的变化和空间上的重新排列以适应细胞的需求,维持能量平衡。线粒体的这种控制其自身数量、大小、形状和在细胞内的分布特征被称为线粒体动力学。正常情况下,线粒体融合-裂变是平衡的,当细胞早期受到应激时,受损的线粒体首先通过裂变和融合来维持其功能的正常运行。线粒体功能异常可能与细胞的衰老和凋亡密切相关,因此,本文就线粒体动力学包括线粒体裂变和融合在常见眼科疾病中的研究进展进行综述。     

RNA甲基化N6-甲基腺苷修饰在眼部疾病中作用的研究进展

N6-甲基腺苷(m6A)是指在腺嘌呤的第6个N位点上发生的甲基化修饰,修饰过程主要由甲基转移酶、去甲基化酶和识别酶共同协调完成。RNA甲基化m6A修饰不仅能够调节mRNA代谢,包括mRNA选择性剪接、核输出、翻译和稳定性,而且参与多种细胞生物学过程,比如胚胎发育、免疫调节、脂肪代谢、生物节律等,进而影响疾病的发生发展。本文就RNA甲基化m6A修饰在眼部疾病,包括眼表疾病、青光眼、白内障、视网膜疾病、葡萄膜疾病、Graves眼病和眼部肿瘤的最新进展作一综述。     

SYVN1泛素化降解XRCC5对晶状体上皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的 探索E3泛素连接酶SYVN1在人晶状体上皮细胞系SRA01/04中对DNA氧化损伤的影响。方法 以中波紫外线(UVB)处理的SRA01/04细胞为研究对象。将培养的SRA01/04细胞分为对照组、OV-SYVN1组、UVB组、UVB+HA组和UVB+OV-SYVN1组，应用Western blot实验检测SYVN1和XRCC5蛋白的相对表达量，应用Western blot实验检测DNA损伤标志物γH2A蛋白的相对表达量，应用免疫荧光染色检测DNA损伤标志物γH2A的荧光强度变化。应用免疫沉淀实验验证XRCC5的泛素化修饰及其与SYVN1的相互作用。结果 Western blot实验结果表明，与对照组比较，OV-SYVN1组中SYVN1蛋白相对表达量明显上调(P<0.01);与对照组比较，UVB组中γH2A蛋白相对表达量明显升高(P<0.000 1);与UVB+HA组比较，UVB+OV-SYVN1组中γH2A蛋白相对表达量明显升高(P<0.01)。免疫荧光染色结果表明，与UVB+HA组比较，UVB+OV-SYVN1组中γH2A染色明显加强。UbiBrowser软件...     

自噬流调控在白内障眼病中的研究进展

自噬流(autophagic flux)是指自噬双层膜形成、自噬体形成、自噬溶酶体形成、自噬溶酶体降解的一系列动态过程。白内障的病因较为复杂，包括基因突变引起的晶状体先天发育异常、衰老引起的氧化损伤、糖尿病引起的糖代谢异常以及术后炎症因子刺激导致晶状体上皮细胞(LECs)增生等因素，都与白内障的形成有关。近年来，越来越多的研究发现自噬流调控可通过改变LECs的状态，参与白内障的病理生理过程。因此，为了系统地了解自噬流调控对白内障眼病的影响，本文对其展开综述。     

褪黑素对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡及自噬的影响

目的 探讨褪黑素对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)氧化损伤的作用机制。方法 将培养好的人晶状体上皮细胞株(SRA01/04)随机分为对照组(不做任何处理)、H₂O₂组(400μmol·L^-1 H₂O₂处理)、DMSO+H₂O₂组(400μmol·L^-1 H₂O₂和0.2μmol·L^-1 DSMO处理)、褪黑素+H₂O₂组(400μmol·L^-1 H₂O₂和50μmol·L^-1褪黑素处理)。细胞分组处理后继续培养24 h,进行各项实验室检测比较。CCK8实验检测各组细胞活力；免疫印迹实验检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)以及自噬相关蛋白(P62、Becli...