ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响

目的　探究N⁶-甲基腺苷（m⁶A）去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞（LEC）氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法　运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障（ARC）患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的表达。通过紫外线B（UVB）构建晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞氧化损伤模型和靶向ALKBH5设计小干扰RNA（siRNA）转染构建敲降模型,运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测氧化损伤模型和敲降模型中ALKBH5的mRNA和蛋白表达。运用CCK-8法检测Control组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中SRA01/04细胞活力变化。免疫荧光染色检测UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中15A3的荧光强度变化。运用qRT-PCR检测转染对照siNC组和转染siALKBH5#3组中11个DNA氧化损伤修复基因（ODRGs）的mRNA表达变化。结果　在ARC患者的晶状体前囊膜上皮细胞中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。在UVB以时间梯度诱导SRA01/04的细胞氧化损伤模型中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均呈上升后下降趋势,其中UVB照射10 min后ALKBH5 mRNA和蛋白表达升高最为显著。ALKBH5敲降效率结果显示,与转染对照siNC组相比,转染靶向ALKBH5的siRNA后,ALKBH5的mRNA和蛋白表达均显著下降。CCK-8法检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞活力明显降低。免疫荧光染色检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞内DNA氧化损伤指标15A3染色显著增加。同时,与转染对照siNC组相比,转染ALKBH5#3组SRA01/04细胞的ODRGs中,TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6 mRNA的表达均显著上升,DCLRE1A mRNA的表达显著下降,MGMT和MRE11A mRNA的表达则未见明显差异。结论　m⁶A去甲基化酶ALKBH5在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中诱导性表达上升,敲降ALKBH5可促进LEC内大部分ODRGs表达升高,参与调控LEC内损伤DNA的修复,阻止ARC的发生。     

POLH对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的　探究DNA聚合酶η（POLH）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的防御机制。方法　以年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织和H₂O₂处理的晶状体上皮细胞系SRA01/04为研究对象,分别通过RT-PCR和免疫印迹实验验证POLH的表达并筛选H₂O₂最佳作用浓度用于后续实验,将培养的SRA01/04细胞分为H₂O₂组、H₂O₂+HA组和H₂O₂+OV-POLH组,采用RT-PCR和免疫印迹实验检测POLH mRNA和蛋白表达情况,免疫荧光法检测DNA氧化损伤标志物以及TUNEL实验检测细胞凋亡变化,免疫印迹实验检测细胞中BAX、BCL-2、Nrf2和Keap1蛋白表达。结果　RT-PCR结果显示,与透明晶状体前囊膜（1.00±0.22）相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织中POLH mRNA相对表达量明显下降（0.38±0.62）（P<0.000 1）。RT-PCR和免疫印迹实验均显示,200 μmol·L^-1 H₂O₂处理的SRA01/04细胞中POLH表达量最低;TUNEL实验检测结果显示, 200 μmol·L^-1 H₂O₂处理后细胞的凋亡明显增加。RT-PCR和免疫印迹实验结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组SRA01/04细胞中POLH表达量显著升高（P<0.000 1）。免疫荧光染色结果显示,与H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞的γH2A染色明显下降。免疫印迹实验检测结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞促凋亡蛋白BAX表达量明显下降,而抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显升高（均为P<0.01）;与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞Keap1蛋白水平明显下降,而转录调控蛋白Nrf2表达明显升高（均为P<0.01）。结论　过表达POLH可通过增强DNA损伤修复功能抑制H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞凋亡,其抑制氧化应激机制可能与Nrf2-Keap1-ARE通路有关。     

线粒体融合和裂变在眼科疾病中的研究进展

线粒体是多细胞生命不可缺少的组成部分,通过裂变和融合进行形态上的变化和空间上的重新排列以适应细胞的需求,维持能量平衡。线粒体的这种控制其自身数量、大小、形状和在细胞内的分布特征被称为线粒体动力学。正常情况下,线粒体融合-裂变是平衡的,当细胞早期受到应激时,受损的线粒体首先通过裂变和融合来维持其功能的正常运行。线粒体功能异常可能与细胞的衰老和凋亡密切相关,因此,本文就线粒体动力学包括线粒体裂变和融合在常见眼科疾病中的研究进展进行综述。     

HPLC法测定蒙成药三子散中没食子酸的含量

目的:建立蒙成药三子散中没食子酸的含量测定方法.方法:采用HPLC法,采用Phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液(5:95),流速1.0 mL(min-1,柱温35℃,进样量为10μL,检测波长为273nm.结果:没食子酸进样量范围在6.357～158.935μg时,进样量与峰面积线性关系良好(r=0.9999);平均回收率为97.70％,RSD为1.30％.结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于三子散中没食子酸的测定.     

护理干预对人工肝支持系统治疗重型肝炎患者康复的影响

重型肝炎,在短期内肝细胞大量坏死,出现严重的代谢紊乱和毒性物质聚积,毒性物质反过来影响肝细胞再生和功能恢复,形成恶性循环.重型肝炎的病情进展迅速,容易出现肝性昏迷、出血、感染、肝肾综合征等严重并发症,病死率达80%[1-2].人工肝支持系统(ALSS)是治疗重型肝炎、肝衰竭的一种极为重要的方法.以ALSS治疗重型肝炎,能有效地去除各种代谢产物、内毒素及各种有害细胞因子和炎症递质,补充蛋白质、调理素及凝血因子等多种生物活性物质,并改善机体内环境,为肝细胞再生和肝功能恢复创造有利条件[3].但由于很多患者及家属对人工肝治疗的误解,常认为人工肝就是肝移植,给患者和家属造成很大的心理压力,患者常表现为心情沉重、焦虑、恐惧,同时较高的治疗费用造成沉重的经济负担,因此,为避免患者在治疗中出现紧张、恐惧等不良情绪及减少术后并发症[4],对我院2009年1月-2009年8月60例重型肝病患者进行ALSS治疗,并进行护理干预,取得良好效果.现报道如下.     

住院药房口服单剂量调配的差错案例分析与措施改进

目的 降低该院口服单剂量调配差错,为提升医院住院药房口服单剂量调配工作质量提供借鉴。方法 统计西安交通大学第一附属医院2016年3—6月口服单剂量调配差错数据,应用差错类型分析法对各类型差错的典型案例进行分析,找出问题的关键并制定相应的防范措施,措施实施3个月后,统计分析2016年9—12月的差错数据以观察实施效果。结果 制定的防范措施主要包括优化工作流程、加强业务培训及复核确认、系统软件优化等;措施实施后差错发生率由0.231‰下降为0.062‰,其中人为因素导致的差错由152例下降为33例;机器自身因素导致的差错由105例下降为38例。结论 所采取的措施可有效降低口服单剂量调配的差错发生率,提高了工作质量,保证了病人口服用药的安全。     

抑癌因子SOX7在乳腺癌中的表达及其与AXIN2表达的相关性

目的 研究SOX7及AXIN2在乳腺癌中的表达及其相关性.方法 采用免疫组织化学SP法检测104例乳房切片中,SOX7、AXIN2及β-catenin的表达情况,其中74例肿瘤组织,30例正常组织作对照.结果 SOX7在乳腺癌中低表达,且与AXIN2的表达具有正相关性(P=0.001),与β-catenin的表达具有负相关性(P =0.006);SOX7的下调与乳腺癌的分期和分化程度具有相关性(P=0.072;P=0.085),与激素受体和生物标记物无相关性(P =0.059;P =0.438).结论 本研究证实了SOX7在乳腺癌的发生发展中表现为抑癌因子作用,同时也提出了SOX7与AXIN2在乳腺癌中协同表达的现象,并指出SOX7可以作为一种独立预测乳腺癌预后的生物标记物.     

大孔吸附树脂分离杭白菊中总黄酮的工艺优选

目的:优选分离杭白菊中总黄酮的最佳树脂型号及工艺条件.方法:以总黄酮为指标;紫外分光光度法测定总黄酮含量,考察HPD100,DM130,D101,AB-8等不同型号大孔树脂对杭白菊中总黄酮的吸附和解吸性能,筛选最佳大孔树脂型号,并优选其分离工艺条件.结果:AB-8型大孔树脂吸附容量和解吸率均最大,分别为44.9 mg·g-1,87.9％.当供试液总黄酮质量浓度在12.6 g·L-1时,于30℃下吸附1h,用95％乙醇进行解吸,可较好地对杭白菊中总黄酮进行吸附分离.结论:AB-8型大孔树脂适用于杭白菊中总黄酮的吸附分离.     

RNA甲基化N6-甲基腺苷修饰在眼部疾病中作用的研究进展

N6-甲基腺苷(m6A)是指在腺嘌呤的第6个N位点上发生的甲基化修饰,修饰过程主要由甲基转移酶、去甲基化酶和识别酶共同协调完成。RNA甲基化m6A修饰不仅能够调节mRNA代谢,包括mRNA选择性剪接、核输出、翻译和稳定性,而且参与多种细胞生物学过程,比如胚胎发育、免疫调节、脂肪代谢、生物节律等,进而影响疾病的发生发展。本文就RNA甲基化m6A修饰在眼部疾病,包括眼表疾病、青光眼、白内障、视网膜疾病、葡萄膜疾病、Graves眼病和眼部肿瘤的最新进展作一综述。