D-半乳糖和氢化可的松诱导老年阳虚证大鼠模型的建立

目的探讨如何利用青年大鼠建立合适的老年阳虚证模型。方法选用3月龄SD健康大鼠30只,雌雄各半,随机分为青年对照组,亚急性衰老模型组与老年阳虚证模型组,每组10只。亚急性衰老模型组给予颈背部皮下注射D-半乳糖125mg/kg,连续40d,之后于后肢肌肉注射25mg/kg生理盐水7d;老年阳虚证模型组给予颈背部皮下注射D-半乳糖125mg/kg,连续40d,后再行后肢肌肉注射氢化可的松25mg/kg,连续7d;青年对照组在颈背部皮下及后肢肌肉注射等量生理盐水47d。检测大鼠血清中IL-6、IL-2、cAMP、cGMP和CD4+CD8+T淋巴细胞的含量。结果与青年对照组相比,亚急性衰老组大鼠cGMP水平升高(P0.05),cAMP水平及cAMP/cGMP比值无明显变化(P0.05);而老年阳虚组大鼠cGMP明显升高(P0.01),cAMP水平及cAMP/cGMP比值明显降低(P0.01)。亚急性衰老组和老年阳虚组大鼠血清中IL-6含量均明显上升,IL-2含量均明显下降(P0.05或P0.01);CD4+T淋巴细胞比率降低,CD8+T淋巴细胞比率升高,CD4+/CD8+比值下降(P0.01或P0.05)。与亚急性衰老组相比,老年阳虚组大鼠cAMP明显下降,cGMP明显上升,cAMP/cGMP比值下降(P0.01);血清中IL-6、IL-2含量以及CD4+、CD8+T淋巴细胞比率以和CD4+/CD8+比值较亚急性衰老组又均有明显差异(P0.05)。结论以D-半乳糖和氢化可的松诱导制作的老年阳虚证模型大鼠符合衰老及阳虚的表现,提示以此种方法制作老年阳虚证模型具有可行性。     

针灸调节肥胖机体下丘脑不同核团及内分泌因子的研究进展

肥胖是目前众多学科研究的热点,针灸治疗肥胖疗效肯定。针灸可有效减轻体质量和改善葡萄糖和脂肪代谢紊乱,其中中枢调节在针灸减肥中具有重要作用。针灸治疗肥胖的中枢机制不仅包括对传统的“摄食中枢”和“饱食中枢”的调控,还与下丘脑中的多个核团、多种神经细胞、神经递质的异常及中枢炎症有关。     

川芎嗪对人脐静脉内皮细胞缺氧相关因子表达的影响

目的 观察川芎嗪(TMP)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧相关因子表达的影响.方法 体外培养HUVECs,取2～5代细胞进行实验.将HUVECs分为对照组、氯化钴(CoCl2)缺氧组及50、100、200 μmol/L TMP药物处理组.对照组不作任何处理.CoCl2缺氧组利用150 μmol/L的CoCl2干预HUVECs 4 h;50、100、200 μmol/L TMP药物处理组在CoCl2干预HUVECs 4 h后,再加入不同浓度TMP继续培养8h.分别提取各组细胞RNA和总蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脯氨酰羟化酶2(PHD2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达.结果 实时RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,CoCl2缺氧组PHD2mRNA表达下降(t=3.734),HIF-1α和VEGF mRNA表达升高(t=4.589、3.926),差异均有统计学意义(P＜0.05).50、100、200 μmol/L TMP药物处理组分别与CoCl2缺氧组比较,PHD2 mRNA表达均升高(t=3.286、3.617、3.886),差异有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α mRNA表达均无明显变化(t=1.025、0.726、-1.386),差异无统计学意义(P＞0.05);VEGF mRNA表达均有所下降,但50 μmol/L TMP药物处理组与之差异无统计学意义(t=1.696,P＞0.05),100、200 μmol/L TMP药物处理组与之差异有统计学意义(t=2.974、3.492,P＜0.05).Western blot检测结果显示,与对照组比较,CoCl2缺氧组PHD2蛋白表达下降,差异有统计学意义(t=3.122,P＜0.05);HIF-1α及VEGF蛋白表达均有不同程度升高,差异有统计学意义(t=3.778、3.257,P＜0.05).50、100、200 μmol/L TMP药物处理组分别与CoCl2缺氧组比较,PHD2蛋白表达均升高(t=2.813、3.026、3.078),差异有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α、VEGF蛋白表达均有所下降,但50 μmol/L TMP药物处理组与之差异无统计学意义(t=2.056、1.986,P＞0.05),100 μmol/L TMP药物处理组(t=3.058、2.976)及200 μmol/L TMP药物处理组(t=3.828、3.136)与之差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TMP能上调缺氧HUVECs中PHD2 mRNA和蛋白的表达,下调HIF-1α蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达.     

一种精确评估氧诱导小鼠视网膜新生血管和无灌注区的联合方法

目的 探讨异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)联合异凝集素(isolectin B4)在评估氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)小鼠视网膜新生血管和无灌注区中的作用.方法 10只生后第17天的OIR小鼠分别眶后注射FITC-Dextran,取出视网膜行isolectin B4染色,应用Image Pro-Plus 5.1软件测量视网膜新生血管、无灌注区及整个视网膜面积,计算视网膜新生血管和无灌注区占整个视网膜面积的百分比并比较.结果 FITC-Dextran评估的视网膜新生血管占整个视网膜面积的百分比为(0.100 9±0.001 0)％,均小于FITC-Dextran联合isolectin B4的(0.1046±0.001 0)％或isolectin B4的(0.104 9±0.0020)％(均为P＜0.01).FITC-Dextran评估的视网膜无灌注区占整个视网膜面积的百分比为(0.285 0±0.001 0)％,均大于FITC-Dextran联合isolectin B4的(0.266 8±0.001 0)％或isolectinB4的(0.267 6±0.002 0)％(均为P＜0.01).FITC-Dextran联合isolectin B4比isolectin B4更易于鉴别视网膜铺片上残留的玻璃体血管,比FITC-Dextran更易于发现未充盈的视网膜小血管.结论 FITC-Dextran联合isoleetin B4视网膜血管染色比FITC-Dextran或isolectin B4更能精确评估视网膜新生血管和无灌注区面积.     

“双固一通”电针法对胰岛素抵抗模型大鼠下丘脑葡萄糖转运因子-4基因表达的影响

目的观察"双固一通"电针法对胰岛素抵抗(IR)模型大鼠下丘脑中葡萄糖转运因子-4(Glut-4)基因表达的影响。方法 Wistar大鼠40只,正常组10只,另30只用高脂饮食诱导造模;8周造模成功后随机分为模型组、治疗组、阻滞剂组,每组10只;阻滞剂组行电针治疗同时脑室灌注磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)阻滞剂。实验开始后16周,检测各组大鼠空腹血糖(FPG)、血浆胰岛素(Fins)及胰岛素抵抗指数(IAI);RT-PCR法检测大鼠Glut-4 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组的FPG、Fins指数上升,有明显统计学意义(P0.01),且IAI、Glut-4 mRNA表达下降,有明显统计学意义(P0.01);与模型组比较,治疗组的FPG、Fins指数下降,有明显统计学意义(P0.01),且IAI、Glut-4 mRNA表达上升,有明显统计学意义(P0.01);与阻滞剂组比较,治疗组的FPG、Fins指数下降,具有明显统计学意义(P0.01,P0.05),且IAI、Glut-4 mRNA表达上升,有明显统计学意义(P0.01)。结论 IR的发生与下丘脑PI3K/PKB信号通路异常及Glut-4的表达下降有关;"双固一通"电针法可通过调节下丘脑Glut-4的表达,从而改善IR大鼠的空腹血糖、血浆胰岛素水平及胰岛素敏感性。     

电针内关预处理对心肌缺血再灌注大鼠模型血管内皮因子及线粒体功能影响

目的:观察电针"内关"预处理对心肌缺血再灌注大鼠氧化应激及线粒体功能的影响。并从p38MAPK信号通路的角度分析其作用机制。方法:将50只大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、电针预处理组、抑制剂预处理组和电针+抑制剂预处理组。进行相应组电针内关穴,治疗结束后,测定大鼠心肌ROS、ICAM-1、VCAM-1、ATP和RCR的含量。结果:与S组比较,M组、EA组、SB组及EA+SB组大鼠心肌细胞ICAM-1、VCAM-1蛋白表达含量明显下降,RCR及ATP含量明显下降(P 0. 05),SB组、EA组及EA+SB组ATP含量及ICAM-1、VCAM-1与M组比较,均有显著性差异(P 0. 05),其中EA组各项指标优于EA+SB组及SB组(P 0. 05)。结论:I/R中炎症反应增强,电针内关预处理可以抑制大鼠I/R模型中心肌细胞黏附分子ICAM-1I/R和VCAM-1的蛋白表达,能激活内源性的抗炎因子,发挥保护受损心肌细胞的效应,并有效缓解钙超载,减轻胞内Ca~(2+)负荷。     

高糖诱导人视网膜血管内皮细胞脯氨酸羟化酶2表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响

目的 观察高糖诱导人视网膜血管内皮细胞（HRECs）脯氨酸羟化酶2(PHD2)的表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响。方法 将培养至融合的HRECs分为三组,分别为正常对照组、甘露醇对照组与高糖组。正常对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖,甘露醇对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇,高糖组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖。培养24、48 h后收集细胞蛋白、上清液及RNA。蛋白免疫印迹法检测细胞PHD2、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及紧密连接蛋白occludin的蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）的含量;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因的转录水平;相对分子质量7×104的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖检测细胞旁通透性。结果 与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs中PHD2蛋白表达水平均先降低后升高,HIF-1α表达升高,occludin表达降低;高糖组细胞上清液中VEGF含量增加,差异均有统计学意义（PHD2：F=7.618、8.627,P＜0.05;HIF-1α：χ²=7.692、7.652,P＜0.05;occludin：F=23.23、7.317,P＜0.05;VEGF：F=10.768、4.562,P＜0.05）。与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs的PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因转录水平升高,差异均有统计学意义（PHD2：F=5.69、14.27,P＜0.05;HIF-1α：F=6.07、10.47,P＜0.05;VEGF：F=12.31、9.14,P＜0.05;occludin：F=8.77、8.00,P＜0.05）。与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组细胞旁通透性增加,差异有统计学意义（χ²=20.57、F=56.09,P＜0.05）。结论 高糖诱导HRECs PHD2表达发生变化。PHD2可能在内皮细胞屏障破坏中发挥一定的调控作用,其机制与HIF-1α、VEGF有关。     

第二掌骨全息理论在小儿推拿中的临床应用探讨

第二掌骨全息的穴区分布与小儿生理病理及临床应用有一定联系。文章从中医经脉理论、董氏奇穴和小儿食指络脉以及现代解剖理论等方面分析第二掌骨全息疗法应用于小儿推拿中的理论依据及可干预方法,以期为小儿推拿的临床应用提供依据。     

川芎嗪对氧诱导视网膜病变中视网膜神经细胞凋亡的抑制作用

Objective To observe the inhibitory effect of tetramethylpyrazine(TMP)on apoptosis of retinal neurons in oxygen-induced retinopathy(OIR).Methods 48 C57BL/6 mice were randomly divided into normal control group(n=18),OIR control group(n=18)and OIR TMP group(n=12).The mice of normal control group were raised in room air.From the postnatal day 7(P7),mice of the other two groups mice of OIR TMP group received intraperitoneal injection of TMP(200 mg/kg)once a day from P12 to P16.meanwhile the mice of normal control group and OIR control group were iniected with the same volume of normal saline containing of 0.1% DMSO.At P12,P14 and P17,the morphologic changes in retinal avascular zone and the number of retinal apoptotic cell were observed by HE staining and TUNEL assay.Results At P1 2.there were a few of chromatin condensation and pycnic nuclei in the inner nuclear layer (INL)of OIR control group.At P14,a great quantity(OIR control group)or some(OID TMP treated group)chromatin condensation and pycnic nuclei in the central INL were observed.At P17,the thickness of INL,inner plexiform layer(IPL)and outer plexiform layer(OPL)in the OIR control group were reduced;the thickness of INL,IPL and OPL in the OIR TMP group weas thinner than those in the normal control group and thicker than those in the OIR control group.At P12,the TUNEL-positive cells in the OIR control group was 6 times of the normal eontrol group(F=587.217,P＜0.001).At P14,the difference of TUNEL-positive cells in three groups was significant(F=587.217,P＜0.001);the TUNEL-positive cells in the OIR control group was 28 times of the normal control group(t=49.813,P＜0.001);the TUNEL-positive cells in the OIR TMP group has reduced 50% compared with the OIR controI group(t=42.434,P＜0.00 1).At P17,there was no significant difference in TUNEL-positive cells among the three groups (F=587.217,P>0.05).Conclusions TMP can inhibit apoptosis of retinal cells in OIR significantly.     

富硒马齿苋保健饮料的研制

依据马齿苋所含的保健功能因子成分，以湖北省恩施洲（世界硒都）马齿苋为原料，开发研制具有保健作用的马齿苋保健饮料，探索马齿苋保健饮料的加工工艺。