高糖诱导人视网膜血管内皮细胞脯氨酸羟化酶2表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响

目的 观察高糖诱导人视网膜血管内皮细胞（HRECs）脯氨酸羟化酶2(PHD2)的表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响。方法 将培养至融合的HRECs分为三组，分别为正常对照组、甘露醇对照组与高糖组。正常对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖，甘露醇对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇，高糖组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖。培养24、48 h后收集细胞蛋白、上清液及RNA。蛋白免疫印迹法检测细胞PHD2、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及紧密连接蛋白occludin的蛋白表达水平；酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）的含量；实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因的转录水平；相对分子质量7×104的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖检测细胞旁通透性。结果 与正常对照组相比，甘露醇对照组与高糖组HRECs中PHD2蛋白表达水平均先降低后升高，HIF-1α表达升高，occludin表达降低；高糖组细胞上清液中VEGF含量增加，差异均有统计学意义（PHD2：F=7.618、8.627，P＜0.05；HIF-1α：χ²=7.692、7.652，P＜0.05；occludin：F=23.23、7.317，P＜0.05；VEGF：F=10.768、4.562，P＜0.05）。与正常对照组相比，甘露醇对照组与高糖组HRECs的PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因转录水平升高，差异均有统计学意义（PHD2：F=5.69、14.27，P＜0.05；HIF-1α：F=6.07、10.47，P＜0.05；VEGF：F=12.31、9.14，P＜0.05；occludin：F=8.77、8.00，P＜0.05）。与正常对照组相比，甘露醇对照组与高糖组细胞旁通透性增加，差异有统计学意义（χ²=20.57、F=56.09，P＜0.05）。结论 高糖诱导HRECs PHD2表达发生变化。PHD2可能在内皮细胞屏障破坏中发挥一定的调控作用，其机制与HIF-1α、VEGF有关。

Influence of prolyl hydroxylase 2 expression on endothelial barrier dysfunction induced by high glucose in human retinal vascular endothelial cells