TRAIL和endostatin双基因-放射治疗对人血管内皮细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的：观察重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES携带的双基因TRAIL和endostatin联合X射线照射后,对血管内皮细胞ECV304增殖、周期和凋亡的影响。方法：实验分为对照组、空载体pshuttle转染组、TRAIL单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL转染组、endostatin单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shES转染组和TRAIL、endostatin双基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES转染组。细胞转染采用脂质体介导的方法进行,对照组不转染。细胞转染后给予X射线照射（照射剂量分别为0、0.1、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy）,采用ELISA法检测转染细胞中TRAIL和endostatin蛋白的表达,并分别采用MTT及PI单染或/和Annexin Ⅴ双染流式细胞术（FCM）检测TRAIL、endostatin单/双基因治疗联合放射治疗对ECV304细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果：2.0 Gy X射线照射后与0 h比较,各时间点转染pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES的ECV304细胞上清中TRAIL和endostatin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,分别于12和24 h达峰值;不同剂量X射线照射可诱导TRAIL和endostatin蛋白表达,且蛋白表达水平随照射剂量的增加而明显升高（P<0.05或P<0.01）。MTT结果显示,X射线照射后, pshuttle-Egr1-shTRAIL、pshuttle-Egr1-shES和pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组ECV304细胞A490值均明显低于对照组和pshuttle组,并显示一定的时间-效应和剂量-效应关系,并伴有细胞凋亡率明显增加、G₂+M期细胞百分数明显上升和G₀/G₁期细胞百分数明显下降。上述细胞效应,尤以pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组变化最为明显,与pshuttle-Egr1-shTRAIL和pshuttle-Egr1-shES组比较差异有统计学意义（P<0.05 或 P<0.01）。结论： TRAIL和endostatin双基因联合放射治疗可抑制ECV304细胞生长,影响细胞周期进程,促进细胞凋亡,且其治疗效果优于单纯放射治疗或TRAIL/endostatin单基因-放射治疗。     

低剂量辐射诱导小鼠生精细胞凋亡及p53基因表达的适应性反应

目的研究低剂量X射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡及p53基因表达的适应性反应。方法通过不连续泛影葡胺密度梯度离心法分离睾丸组织不同种类生精细胞，采用碘化丙啶荧光探针标记细胞，流式细胞术检测各类生精细胞凋亡，免疫组化法观察生精细胞p53蛋白表达。结果当1．0、2．0或3．0Gy（攻击剂量，D2）照射前6h给予75mGy（诱导剂量，D1）预照射时明显减轻D2对精原细胞和精母细胞的凋亡损伤作用，而对精子细胞和精子影响不明显。当D2照射前6h给予D1预照射时明最减少精原细胞和精母细胞p53基因表达阳性率，而对精子细胞和精子影响不明显。结论低剂量X射线照射可选择性诱导小鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。同时，可诱导精原细胞和精母细胞p53基因表达的适应性反应，推测其在低剂量辐射诱导生精细胞凋亡适应性反应分子机制中起重要的调控作用。     

Enhanced effects of TRAIL-endostatin-based double-gene-radiotherapy on suppressing growth, promoting apoptosis and inducing cell cycle arrest in vascular endothelial cells

This study examined the effects of TRAIL-endostatin-based gene-radiotherapy on cellu-lar growth, apoptosis and cell cycle progression in human vascular endothelial cells ECV304 in vitro. The expression of TRAIL and endostatin protein in ECV304 cells was detected by ELISA after the transfection of recombinant plasmid pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES and X-ray irradiation. Then MTT assay was used for determining the cellular proliferation, and flow cytometry (FCM) plus Annexin V and propidium iodide (PI) double-staining or PI single-staining were employed for the detection of apoptosis and cell cycle progression. The results showed that expression of TRAIL and endostatin protein exhibited a time- and dose-dependent change in ECV304 cells after pshut-tle-Egr1-shTRAIL-shES transfection in conjunction with irradiation. In the TRAIL-endostatin-based single- or double-gene-radiotherapy, the cell viability declined in a time- and dose-dependent manner, the percentage of cells at G2/M phase and apoptotic rate was increased, and the percentage of cells at G0/G1 phase was lowered as compared with those receiving radiotherapy alone. Moreover, TRAIL-endostatin-based double-gene-radiotherapy demonstrated better effects on growth inhibition, promotion of apoptosis and induction of cell cycle arrest in ECV304 cells than sin-gle-gene-radiotherapy.     

人类重组酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过对人类重组型和野生型酸性成纤 维细胞生长因子（raFGF，waFGF）的比较研究，探讨raFGF与促分裂性有关的生物学作用。 方法：应用NIH3T3细胞株，用MTT法通过细胞增殖实验检测waFGF和raFGF 的促分裂性，通过流式细胞术检测细胞凋亡、细胞膜通透性和线粒体膜电位。同时检测肝素 （HS）对aFGF生物学作用的影响。结果：raFGF对细胞增殖 作用明显低于waFGF。raFGF对细胞凋亡的抑制作用及其对细胞膜通透性的增强作用也明显低 于waFGF，对线粒体膜电位的增强作用明显低于waFGF。HS对aFGF的生物学作用具有促进作用 。结论：raFGF的促分裂作用低于waFGF，而对细胞凋亡的影响不明显。     

依布硒的药理作用及反应机制的研究进展

依布硒是一种小分子抗氧化剂 ,易于参加各种氧化还原反应 ,能清除机体内过多的过氧化物 ,阻断产生自由基的链式反应 ,因此可治疗多种疾病 ,维持机体的正常生理功能。长期以来 ,人们普遍认为依布硒在体内主要通过模拟谷胱甘肽过氧化物酶的反应机制发挥作用。然而 ,近来的研究表明依布硒在体内更趋向于通过硫氧还蛋白还原酶和硫氧还蛋白反应系统来发挥作用。本文简要介绍依布硒的药理作用及其反应机制的研究进展     

人类重组型酸性成纤维细胞生长因子促分裂效应及其信号转导途径的推测

[目的]通过比较野生型及重组型酸性成纤维细胞生长因子(waFGF,raFGF)对NIH3T3细胞促分裂活性的差别,推测其信号途径的异同,从而评价促分裂性;同时,通过检测肝素(HS)对这两种生长因子生物学活性的影响,评价其在模仿机体内环境中的作用.[方法]应用MTT法检测细胞的促分裂活性.应用Western blot和RT-PCR分别检测FGF1受体磷酸化和Fos基因表达.[结果]raFGF对细胞增殖的作用明显低于waFGF,在5～80mg/mL范围内最为明显(P＜0.001);HS均可促进两种因子对细胞的增殖作用,但raFGF+HS组明显低于waFGF+HS组(P＜0.05).waFGF通过核转位和MAPK两种途径发挥促分裂活性,而raFGF则只通过MAPK发挥促分裂性.[结论] raFGF的促分裂作用低于waFGF;肝素对这两种因子的促分裂性具有促进作用;waFGF通过核转位和MAPK两种途径发挥促分裂活性,而raFGF则只通过MAPK发挥促分裂性.     

中波紫外线对成纤维细胞的损伤作用

目的：探讨中波紫外线(UVB)对成纤维细胞的损伤作用，建立细胞损伤模型。 方法：采用UVB灯照射小鼠成纤维细胞株NIH3T3，MTT法测细胞存活率，流式细胞术检测细胞周期、凋亡和H₂O₂的生成。 结果：0.2～3.0 kJ •m^-2 UVB照射后24 h细胞存活率明显降低（P<0.05或0.01）；1.5 kJ•m^-2 UVB照射后4、8、18和24 h细胞G₁期细胞百分数升高，凋亡小体增多；1.5 kJ •m^-2 UVB照射后8 h H₂O₂生成增多，与0、4、18和24 h组比较差异有显著性（P<0.05）。 结论：UVB照射可诱导成纤维细胞出现G₁期阻滞、细胞凋亡及H₂O₂生成增多。     

肿瘤基因治疗及其方法的研究现状

随着现代分子生物学及其技术的发展,人们对疾病的认识和治疗手段已进入分子水平.越来越多的研究资料表明,多种疾病与基因的结构或功能改变有关,因而萌生了从基因水平治疗疾病的想法.DNA重组、基因转移、基因克隆和表达等技术的建立和完善,为基因治疗(gene therapy)奠定了基础.     

低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸细胞内质网应激及PERK-CHOP信号通路的激活

目的:探讨低剂量电离辐射与小鼠睾丸细胞内质网应激的发生以及PERK-CHOP通路激活的相关性。方法:健康雄性昆明小鼠随机分成时程-效应(75 mGy照射后0、3、6、12和24 h)和剂量-效应(0、50、75、100和200 mGy照射后12 h)组,每组动物10只。采用H2O2和MDA试剂盒比色法检测其含量;利用实时定量逆转录PCR(quantitative RT-PCR)检测GRP78、PERK和CHOP mRNA;Western印迹和图像分析技术检测GRP78、PERK、磷酸化PERK(phosphorylated PERK,pho-PERK)和CHOP蛋白表达。结果:小鼠经75 mGy全身照射后,睾丸组织中H2O2含量随时间延长而增加,MDA含量在3和6 h稍有降低,而后随时间延长而增加,二者在12和24 h较0 h时显著增加(P<0.05,P<0.01);除了GRP78 mRNA(3和24 h)和蛋白表达(6 h)分别在照射后有降低趋势外,GRP78(12 h)、PERK(3、6、12和24 h)和CHOP(12和24 h)的mRNA表达较0 h显著增加(P<0.05,P<0.01),GRP78(12和24 h)、pho-PERK(3、12和24 h)和CHOP(3、6、12和24 h)的蛋白表达也都较0 h显著增加(P<0.05,P<0.01),PERK蛋白表达则无明显变化规律。小鼠经50～200 mGy全身照射后12 h,睾丸组织中H2O2含量在50～100 mGy照射后随剂量增加而增加,200 mGy照射后则稍有降低,MDA含量随剂量增加而增加,而且H2O2含量(75和100 mGy)和MDA含量(75、100和200 mGy)显著高于0 mGy组(P<0.05,P<0.01);除了GRP78mRNA表达在50和200 mGy照射后有降低趋势外,GRP78(75和100 mGy)、PERK(75、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的mRNA表达都显著高于0 mGy组(P<0.05,P<0.01),GRP78(100和200 mGy)、pho-PERK(50、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的蛋白表达也都显著高于0 mGy组(P<0.05,P<0.01),而PERK蛋白表达则无明显变化规律。结论:低剂量电离辐射能够诱导小鼠睾丸细胞发生内质网应激,并且激活PERK-CHOP信号通路。