利用寡核苷酸芯片检测乙型肝炎病毒基因突变

目的　利用寡核苷酸芯片平行分析乙肝病毒表面抗原区S、前核心抗原pre C区、X区、聚合酶P区 12个已知的突变位点。方法　针对S、pre C、X、P区的 12个突变位点 ,设计位于乙肝病毒反义链的 2 4条寡核苷酸探针和两对PCR引物 ,探针长度为 14～ 18bp ,其 5′端连有氨基己烷和T15间隔子 ,合成后经点样仪点到醛基化玻片上。两对PCR引物分别用于扩增S与P区内的 5个突变位点和X、前C区内的 7个突变位点 ,其中上游引物含有荧光标记。不对称PCR扩增所得到的荧光标记的单链DNA与寡核苷酸阵列杂交、清洗后经扫描分析实验结果。结果　在对 12个乙肝阳性样品前核心抗原C和X区的突变检测中 ,存在 176 2A→T ,176 4G→A联合突变的有 2例、1896G→A突变的 3例、同时存在 176 2A→T、176 4G→A联合突变和 1896G→A突变的 1例、未存在任何突变的样品 6例。在 12个乙肝阳性样品的表面抗原S的突变检测中 ,未发现有突变出现。部分样品的随机测序结果与寡核苷酸阵列杂交结果一致。结论　寡核苷酸芯片适于快速、平行、大量检测突变     

利用寡核苷酸芯片检测SARS病毒

目的：利用寡核苷酸芯片检测SARS病毒。方法：根据序列Blast比对分析结果，设计逆转录不对称PCR扩增引物和寡核苷酸检测探针。采用Trizol试剂从人静脉血中提取总RNA，经过逆转录和不对称PCR扩增得到的PCR产物与排列有寡核苷酸探针的芯片杂交，杂交后的芯片经激光共聚焦扫描分析。结果：SARS阳性样品与寡核苷酸芯片杂交后出现阳性杂交信号，具有不同二级结构的寡核苷酸探针杂交信号强度不一。结论：寡核苷酸芯片适于快速准确、平行大量地检测SARS病毒。     

肠道微生物与骨病的研究进展

人体肠道微生物菌群基因数量超过人体基因数量的100倍,被称为"人体第二基因库",这些基因赋予各种细菌不同的功能,产生极其复杂多样的代谢产物,对于调节人体消化、免疫、内分泌、乃至神经系统等功能具有重要作用。而处于稳态的肠道微生物不但能依附于肠黏膜表面形成保护屏障,阻止致病菌的生长、繁殖和入侵,还能通过黏膜系统促进免疫系统成熟,有助于机体有效抵抗病原微生物的感染。如果肠道菌群平衡被打破,那么宿主患各种疾病的风险就会随之升高。宿主健康与否会导致肠道微生物发生变化,进而通过间接刺激或抑制成骨细胞和激活破骨细胞而打破骨矿化平衡,影响骨健康。除此之外,它们还可以通过维持免疫系统稳态参与调控骨代谢,通过影响生长因子调节、营养物质吸收和宿主代谢通路等参与骨质疏松症、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎等相关骨病的发生。目前关于肠道微生物菌群与骨病的研究较少,且多集中于菌群差异性对骨病的影响,而肠道菌群影响骨病的分子机制亟待进一步研究。本文就近年来国内外对肠道微生物与骨病关系的研究进展进行综述。     

抗乙型肝炎病毒HDV核酶的研究新进展

乙型肝炎病毒(HBV)是严重威胁人类健康的一种病毒，特别是在我国约有1．2亿人为HBV携带者，占世界的1／3。对已感染HBV者，常用的化学及免疫疗法通常无效。今年来，研究者试图利用反义技术，通过在基因表达水平上抑制HBV的复制，来达到治疗HBV感染的目的。核酶是具有RNA裂解活性的RNA分子，能特异地结合并切割靶RNA分子。HDV核酶是唯一在人体细胞天然具有裂解活性的核酶类型，研究将HDV核酶作为HBV的反义抑制剂可能有着其独特的优势。本文就HDV核酶靶位点的筛选、病毒载体导入系统、靶向性分子的构建等热点问题的研究新进展予以综述。     

泛癌中FGFR3表达的预后意义及其免疫调节作用

目的通过生物信息学方法研究FGFR3基因在人肿瘤组织内基因及蛋白表达,探究其对肿瘤临床预后评估价值。方法利用TIMER2和GEPIA2数据库分析FGFR3基因在肿瘤组织中的表达情况和预后情况;利用cBioPortal数据库和R包分析FGFR3基因变异数据;利用TIME2分析FGFR3表达与肿瘤细胞免疫浸润之间的关系;使用STRING,GEPIA2,Veen网站和R包进行FGFR3相关基因富集分析。结果FGFR3在绝大多数肿瘤中高表达,与膀胱尿路上皮癌、肺腺癌等肿瘤的临床分期呈正相关。FGFR3最主要的变异类型是错义突变,在膀胱尿路上皮癌中的突变频率最高,FGFR3突变与膀胱尿路上皮癌患者预后差有关,FGFR3扩增与肾上腺皮质癌、子宫癌肉瘤患者预后差有关。在结肠癌、睾丸癌等肿瘤中FGFR3表达与癌相关成纤维细胞的浸润呈负相关。FGFR3可能通过“MAPK信号通路”和“PI3K-Akt信号通路”参与肿瘤的发生发展。结论FGFR3表达与临床预后、基因突变、肿瘤细胞免疫浸润间存在相关性。FGFR3可能成为肺腺癌、子宫癌肉瘤、结肠癌、肝癌等肿瘤的新的预后标志物及诊疗的潜在靶点,并在一定程度上调节多种肿瘤的免疫反应。     

槲皮素对肝细胞氧化应激损伤的保护作用

摘要： 目的 探讨槲皮素对氧化应激 Chang liver 细胞损伤的保护作用及其作用的分子机制。方法 培养 Chang liver 细胞, 将细胞随机分为正常对照组、 H2O2组及槲皮素低、 中、 高剂量组。MTT 法检测肝细胞的存活率; 流式 细胞术检测细胞凋亡率。2′,7′-二氯荧光素乙二酯(DCFH-DA)细胞内活性氧 （ROS） 荧光染色后, 荧光显微镜观察照 相及流式细胞仪检测细胞内活性氧水平。试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、 过氧化氢酶（CAT）、 谷胱甘肽 过氧化物酶 （GSH-Px） 活性及细胞中丙二醛 （MDA） 的含量。采用 Western blot 法检测 Nrf2 蛋白的表达。结果 H2O2 组较正常对照组细胞存活率、 SOD、 GSH-Px、 CAT 活性降低 (P < 0.05), 凋亡率、 平均荧光强度（MFI）及 MDA 升高 (P < 0.05)。不同剂量槲皮素组细胞存活率及细胞内 SOD、 GSH-Px、 CAT 活性高于 H2O2组(P < 0.05), MDA、 凋亡率、 MFI 水平低于 H2O2组(P < 0.05)。槲皮素低、 中及高剂量组 Nrf2 蛋白均高于 H2O2组(P < 0.05)。结论 槲皮素对氧化 应激肝细胞损伤具有保护作用, 其机制可能与激活 Nrf2-ARE 通路, 进而增强下游抗氧化基因的表达有关。     

HIV-1Vpr体外诱导肿瘤细胞凋亡与细胞周期阻滞的研究

目的 研究HIV-1 Vpr诱导Hela、Lovo、HepG2细胞凋亡和G2期阻滞效果.方法 构建含有HIV-1 Vpr基因的pcDNA4-Vpr重组载体,体外转染Hela、Lovo、HepG2细胞,同时设pcDNA4-EGFP质粒转染对照组、FUGENE组和空白对照组.转染后24、48、72 h,通过甲臜化合物法检测...     

诊断性传播疾病寡核苷酸芯片的研制

目的:探索寡核苷酸芯片的制备方法,并利用芯片技术进行性传播疾病的快速、平行诊断。方法:借助生物信息学方法,设计引物及特异性探针,制备芯片,与收集的性病阳性标本进行杂交,经显色,分析结果。结果:经过对收集到的19例性病的阳性标本进行杂交分析,都能显出特异性的斑点。结论:本研究用生物信息学方法设计的引物、探针是合理的,芯片用于性传播疾病的诊断是可行的。     

肝炎病毒体外细胞培养体系的研究进展

病毒性肝炎是由肝炎病毒引起的,以损害肝脏为主的感染性疾病.可以分为甲型、乙型、丙型、丁型、戊型病毒性肝炎.在这五种病毒性肝炎中,甲型肝炎和戊型肝炎是通过肠胃道传播的,其他三种肝炎则可以通过血液和体液传播.其中丁型肝炎病毒是缺陷病毒,它自身不会引起疾病,必需有乙型肝炎病毒的辅助才能感染宿主.本文就乙型、丙型和丁型肝炎的病原体即乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,:HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV)和丁型肝炎病毒(hepatitis Delta Virus,HDV)体外细胞培养体系系统的研究现状作一简要综述.     

布鲁克综合征研究进展

布鲁克综合征（BS）是一种常染色体隐性遗传性疾病,患者一般有先天性大关节挛缩和成骨不全的特征,在婴儿期和幼儿期即开始的骨折,产后身材矮小、四肢畸形、翼状胬肉和脊柱侧弯等。根据致病基因的不同,FKBP10和PLOD2基因突变引起的BS分为Ⅰ型（BSⅠ）和Ⅱ型（BSⅡ）。PubMed数据库迄今收录的BSⅠ型共23个家系39例患者,BSⅡ型共5个家系6例患者,加上早期被报道但未正确分型的20例患者,截至目前有文献报道的病例数为65例。本文从临床特征与基因突变等方面对BS进行综述。