肥胖型PCOS患者的生物学特征和临床特征

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是一种内分泌代谢紊乱综合征,临床表现高度异质性。肥胖是PCOS异质性临床表现之一,超过50%的PCOS患者超重或肥胖。肥胖型PCOS主要表现为高雄激素血症、中心型肥胖和糖脂代谢紊乱,非肥胖型PCOS主要表现为黄体生成激素（luteinizing hormone,LH）水平异常升高。尽管肥胖型和非肥胖型PCOS均存在内分泌代谢异常,然而肥胖可加重PCOS糖脂代谢紊乱;肥胖型PCOS还表现脂肪代谢的异常。综述肥胖型PCOS患者的临床特征、性激素水平、糖脂代谢特征,旨在为肥胖型和非肥胖型PCOS患者新的分型诊治提供参考。     

胚胎干细胞及诱导多能干细胞在胚胎毒性研究中的应用

药物对于生殖细胞或者早期胚胎的影响将会引起不孕或者种植前胚胎的发育异常,进而引起胚胎毒性或者是后代的畸形,因此药物的临床应用需要有可靠的实验数据证明其对胚胎的影响,而胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)由于其无限增殖及多向分化的潜能而作为研究药物胚胎毒性的细胞模型得到广泛应用,以ESC为基础的胚胎干细胞实验(embryonic stem cell test,EST)是获得国际认可的胚胎毒性评价的体外替代方法,但是该实验方法的快速性和准确性存在一定的局限性,目前该细胞模型的研究主要集中于快速性和准确性的优化。新兴的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSC),由于具有与ESC相似的增殖和分化特性,目前也被逐步应用于药物胚胎毒性的研究。     

黄芩透过人胎盘屏障体外模型药物成分研究

目的研究黄芩透过人胎盘屏障药物成分。方法用尤斯灌流室技术建立人胎盘屏障体外模型,预平衡30 min后,于母体池加入10 mg·mL-1黄芩溶液,分别于5~240 min内在胎儿池取样,用高效液相色谱技术分析样品中所含药物成分。色谱柱:Agilent Zorbax-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水(梯度洗脱),内标为葛根素,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为278 nm,柱温20℃,进样量为5μL。结果从5 min开始,黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素即可透过人胎盘屏障;黄芩素和千层纸素A从20 min开始才透过胎盘屏障;30 min后检测到的11种药物成分均可透过胎盘屏障,且在后续取样时间点未见新的物质生成。结论黄芩中的5种黄酮类成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A)均可透过人胎盘屏障体外模型。     

复发性流产患者生殖道菌群特征的初步研究

目的：分析和比较正常早孕女性和复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）患者的生殖道菌群特征。方法：选取2021年3—9月在我院拟行清宫术的37例RSA患者为RSA组,同期拟行人工流产术的25例正常早孕女性为正常早孕组。对其阴道分泌物及子宫蜕膜组织进行16S rRNA测序,比较2组阴道和宫腔菌群的特征及差异。结果：与正常早孕女性相比,RSA患者阴道菌群多样性显著增多（P<0.05）,个体间菌群结构相似度较低,但优势菌未改变,仍为乳杆菌属,而乳杆菌属丰度显著降低（P<0.05）,且加德纳菌属、普雷沃菌属、巨型球菌属、李斯特菌属和厌氧球菌属丰度显著增加（P<0.05）;RSA患者宫腔菌群多样性及个体间菌群结构相似度无显著变化（P>0.05）,但优势菌种发生改变,正常早孕女性宫腔优势菌种为卷曲乳杆菌,RSA患者宫腔优势菌种为惰性乳杆菌,RSA患者宫腔菌群中两歧双歧杆菌和不能培养的不动杆菌丰度显著减少（P<0.05）,而拟杆菌属、大肠埃希菌/志贺菌属和瘤胃菌属团显著增加（P<0.05）。结论：正常的阴道和宫腔存在微生物菌群,宫腔比阴道的菌群多样性更高,但宫腔优势菌丰度较低。阴道细菌的上行定植可能与宫腔菌群的形成存在一定的相关性。而宫腔特有菌群的存在,尤其是宫腔优势菌种的改变和致病菌的出现,可能与RSA的发生相关。     

多能干细胞在胚胎毒性研究中的应用进展

摘要：多能干细胞(Pluripotent Stem cell)在胚胎毒性实验中已有广泛的应用。以胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC）为基础的胚胎干细胞实验（embryonic stem cell test ,EST）是获得国际认可的胚胎毒性评价的体外替代方法。诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,IPSC）,由于具有与胚胎干细胞相似的特性,又具有其独特的优势,也被逐步应用于药物胚胎毒性的研究。本文综述了ESC及IPSC在药物胚胎毒性研究中的应用进展。     

人畸胎瘤细胞株PA-1胚胎干细胞生物学特性的鉴定

目的鉴定人畸胎瘤细胞株PA-1的胚胎干细胞生物学特性。方法用碱性磷酸酶染色法鉴定体外培养PA-1细胞的分化水平,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测PA-1细胞多能性基因Nanog、Oct4和Sox2的表达情况。通过悬滴培养法使PA-1细胞形成拟胚体,用RT-PCR法检测拟胚体分化的三胚层特异性基因的表达。通过SCID小鼠体内成瘤实验,用HE染色和免疫组化鉴定PA-1细胞体内接种后三胚层组织的分化。结果体外贴壁培养PA-1细胞碱性磷酸酶染色呈深紫色,PA-1细胞能表达多能性基因Nanog,Oct4和Sox2。悬滴培养PA-1细胞可形成拟胚体(EB),且能够表达三胚层特异性基因(内胚层:Sox17,AFP;中胚层:C-actin,Brachyury;外胚层:Sox1,Pax6)。PA-1细胞接种至SCID小鼠皮下可以形成畸胎瘤,HE染色可见神经外胚层组织,免疫组化可见三胚层细胞表面标志抗原:GFAP(外胚层)、Vimentin(中胚层)及Desmin(内胚层)均呈阳性表达。结论 PA-1细胞在贴壁培养过程中能够保持未分化/低分化状态,并表达多能性基因; PA-1细胞在体内及体外分化实验中均能分化出三胚层的细胞或组织;证明PA-1细胞具有一定的胚胎干细胞生物学特性。     

高内涵筛选技术联合多能性基因Oct4、Sox2和Nanog检测建立药物胚胎毒性快速筛查方法

目的 通过高内涵筛选技术评价测试药对PA-1细胞的增殖毒性，并联合分化毒性的评价指标——多能性基因（Oct4、Sox2和Nanog）表达检测，初步建立药物胚胎毒性快速筛查方法。方法 选择维生素C、青霉素G、维生素E作为无胚胎毒性的阴性测试药，甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺作为具有胚胎毒性的阳性测试药。以测试药临床治疗剂量下的最大血药浓度（C_max）为基础设置加药浓度，阴性测试药设置浓度梯度为：1/2C_max、C_max、2C_max、3C_max、4C_max；阳性测试药设置浓度梯度为：1/8C_max、1/4C_max、1/2C_max、C_max、2C_max。测试药物在维持培养液（培养液加入1×10⁶ U·L^-1的白血病抑制因子）中作用于PA-1细胞24 h后，基于高内涵筛选技术，应用DAPI、Calcein-AM、PI共染PA-1细胞，通过共聚焦成像检测荧光强度，计算细胞存活率；测试药物在分化培养液（不加入白血病抑制因子）中作用于PA-1细胞24 h后，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测多能性基因Oct4、Sox2和Nanog的表达变化。结果 DAPI、Calcein-AM、PI 3者共染可以很好地区分活细胞及死细胞；阴性测试药维生素C、维生素E、青霉素G对PA-1细胞的增殖能力均无影响；与对照组比较，阳性测试药5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤1/4C_max及以上浓度引起PA-1细胞存活率显著下降（P＜0.05）；环磷酰胺1/8C_max及以上浓度引起PA-1细胞存活率显著下降（P＜0.05）。阴性测试药维生素C、维生素E、青霉素G对PA-1细胞多能性基因Sox2、Oct4、Nanog的表达均无影响。与对照组比较，阳性测试药5-氟尿嘧啶1/8C_max及以上浓度使PA-1细胞多能性基因Sox2、Oct4、Nanog的表达显著下降（P＜0.05）；甲氨蝶呤1/8C_max及以上浓度使Oct4、Nanog的表达显著增加（P＜0.05），但当浓度达到2C_max时对Sox2的表达依然没有影响；环磷酰胺1/8C_max及以上浓度使Sox2、Oct4、Nanog的表达均显著增加（P＜0.05）。结论 高内涵筛选技术（DAPI、Calcein-AM、PI共染）联合多能性基因的检测可初步建立药物胚胎毒性快速筛查方法。     

妊娠期生理药代动力学模型的研究及应用现状

LU Di;SONG Dian-rong(Graduate School,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193, China;Department of Gynecology, The Second Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300150,China)     

HR-HPV感染及宫颈病变的中医证候规律研究

[目的] 研究高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染及宫颈病变患者的中医证候演变规律，为HPV感染及宫颈病变的中医治疗提供证据支持。[方法] 纳入2020年9月—2022年8月就诊于天津中医药大学第二附属医院妇科门诊，存在HR-HPV感染并行阴道镜检查的患者943例，收集中医四诊信息，根据阴道镜后病理结果分为HPV感染组、低级别鳞状上皮内病变组（LSIL组）、高级别鳞状上皮内病变组（HSIL组），分析比较各组中医证候特征。[结果] HR-HPV感染及宫颈病变的主要病位占比为胞宫（76.78%），其次为肝（75.19%）、肾（42.52%）、脾（25.45%）；主要病性因素为湿（72.85%），其次为气滞（69.46%）、阴虚（65.32%）、血瘀（59.60%）、阳虚（52.92%）等。聚类分析结果：HPV感染组中医证型为湿滞胞宫证、肝郁气滞证、阴虚火旺证、肾阳气虚证、心脾两虚证；LSIL组为胞宫湿热证、肝郁气滞证、肾阳气虚证；HSIL组为湿热下注证、肝郁气滞证、脾肾两虚证。[结论] HR-HPV感染及宫颈病变多系湿邪为患，可参照带下病论治。本病核心病位在胞宫，合并肝脾肾多脏腑为病，病性因素以湿邪为主，呈现虚实错杂，正虚邪实的病理特点，情志为病是本病的重要特征。