利用新生大鼠建立人/大鼠造血嵌合体模型

本实验旨在通过输注脐血Lin^-细胞，利用新生大鼠建立人／大鼠造血嵌合体模型。将脐血来源的Lin^-细胞移植到正常一级新生SD大鼠的肝脏内，移植后的新生大鼠与同窝未接种的正常新生大鼠共同饲养和观察，于输注Lin^-细胞后2，4和8周时取嵌合鼠的外周血、脾脏等组织，检测人源细胞的比例及人特异性β2-微球蛋白基因片段。结果发现，通过流式细胞术检测到嵌合鼠外周血中存在有一定比例的人源细胞，PCR证明了嵌合鼠脾脏基因组DNA中存在人特异性β2-微球蛋白基因片段。结论：利用新生大鼠可以建立人造血嵌合体，它为今后利用此实验模型进行人造血干细胞体内生物学特性的检测及其它实验奠定了基础，具有潜在应用价值。     

造血干/祖细胞体外定向诱导分化为粒细胞的研究

为探讨利用人造血干/祖细胞体外定向诱导分化的人粒细胞应用于临床大剂量放，化疗后预防感染的可行性，利用源自人胎盘脐带血的CD34^ 细胞及SCF，IL-3，IL-6和G-CSF的细胞因子组合的培养条件。体外进行向粒细胞的诱导分化。结果表明，在该体系条件下可诱导分化出约1000倍数量的细胞，流式细胞仪检测诱导效率可达60%以上。且诱导分化的细胞染色体未出现异常。裸鼠致瘤实验表明该细胞不具致瘤性。细胞体外生长14-21天为高峰，33天后细胞不再增殖，且诱导分化出的细胞具有吞噬细菌的功能。结论：利用细胞工程的方法体外“生产”出的粒细胞具有应用安全性，且具备生理状态下产生的此种细胞应具备的基本功能。为其临床应用提供了基础。     

人脐静脉内皮细胞支持体外造血和造血干／祖细胞扩增

目的 :研究人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell ,HUVEC)对体外造血和造血干 /祖细胞扩增的支持作用 ,为造血干 /祖细胞体外扩增提供新的实验资料。方法 :用甲基纤维素集落形成实验检测集落形成情况 ,采用HUVEC与脐血单个核细胞和CD34+细胞直接接触共培养的方法观察HUVEC对体外造血和造血干 /祖细胞扩增的支持作用。结果 :HUVEC上清具有集落刺激活性。将HUVEC与脐血单个核细胞直接接触共培养 ,结果表明HUVEC能维持脐血单个核细胞体外存活至少 4周。将脐血CD34+细胞与HUVEC直接接触共培养 ,动态地观察有核细胞扩增倍数、CD34+细胞扩增倍数、CD4 1a+细胞百分比和CFU GM扩增倍数的变化。结果发现 ,有核细胞扩增倍数、CD34+细胞扩增倍数和CD4 1a+细胞百分率均在第 3周达最高 ,分别为 (6 8.1± 14.8)倍、(6 .6± 1.4 )倍和 15.6 % ,而CFU GM扩增倍数则于第 2周达最高 ,为 (5.7± 2 .1)倍。结论 :HUVEC能支持体外造血和造血干 /祖细胞扩增并具有促进巨核系细胞分化的能力     

内皮祖细胞研究进展

内皮祖细胞自发现以来深得关注，本文就内皮祖细胞存在的证据，生物学特征，动员及研究存在的问题和可能的应用前景进行综述。     

干细胞专利技术现状研究

目的了解国内、外干细胞相关专利的情况，为更好地应用知识产权对我国干细胞技术领域的研究成果进行保护提供合理化建议。方法根据干细胞研究专业术语确定相关主题词，以德文特（Derwent）数据库为背景，对多个专利数据库进行检索、筛查和分类，建立干细胞专利数据库。从专利的角度人手，对数据库中的2571篇国际及228篇国内干细胞专利文献进行分类分析。结果干细胞研究领域的专利申请情况总体呈上升趋势；早期专利申请主要涉及遗传工程中的DNA或RNA、载体、宿主等方面，随着研究的发展，涉及人或动物细胞或组织的专利申请逐渐增多，1998年后涉及人类细胞或组织的专利申请数量有了大幅增加，但目前仍以动物源性的细胞或组织为主（15．9％）；国内2001年以后申请的专利集中在人或动物来源的细胞或组织方面，以涉及人源细胞或组织的占首位（28．1％）。结论国内外干细胞相关专利现状的分析表明，国内在干细胞研究方面存在一定优势，应从多角度应用知识产权对研究成果进行保护。     

内皮祖细胞研究进展

内皮祖细胞自发现以来深得关注。本文就内皮祖细胞存在的证据、生物学特征、动员及研究存在的问题和可能的应用前景进行综述。     

人脐血造血干/祖细胞体外定向诱导分化过程中端粒酶的表达

探讨脐血造血干/祖细胞体外诱导分化过程中端粒酶的表达,为造血干细胞产品的临床应用提供一个监测细胞增殖潜能和安全性的指标。用源自人脐血的CD34~+细胞及不同细胞因子组合(SCF+IL-3+IL-6+G-CSF,SCF+IL-3+IL-6+EPO)在体外进行诱导分化;用TRAP聚丙烯酰胺凝胶电泳法、TRAP-ELISA法检测CD34~+细胞及诱导分化细胞的端粒酶活性;用Western印迹法在蛋白水平检测端粒酶催化亚基hTERT的表达,用RT-PCR在细胞转录水平检测端粒酶催化亚基hTERT mRNA的表达。结果显示,在体外诱导分化14-21天为细胞生长峰值,细胞总数可增加(1006.4±103.2)倍,随着培养时间的延长,细胞数量不再增加。CD34~+细胞低度表达端粒酶活性和hTERT基因,在细胞诱导分化过程中端粒酶活性及hTERT表达逐渐升高,细胞诱导14天后端粒酶活性及hTERT表达下降,28天端粒酶活性及hTERT基因检测不出。结论:利用CD34~+细胞在体外定向诱导分化出的大量细胞,不具有无限增殖的特性,可安全地应用于临床,且利用端粒酶的检测可为临床应用诱导分化细胞的时机提供依据。     

9L/Wistar大鼠脑胶质肉瘤模型的建立

目的建立稳定的9L／Wistar大鼠脑胶质肉瘤模型。方法构建稳定表达萤火虫荧光素酶PGL的9L细胞株9L^lvc，采用立体定向手术，在Wistar大鼠右侧尾状核接种DAPI荧光标记的9L^lvc细胞，分别于接种后第7，14，21天通过Xenogen活体动物体内成像系统检测肿瘤的生长情况，并断头取材，观察肿瘤的形态学变化，采用免疫组化的方法检测肿瘤细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（Vemintin）的表达。结果大鼠接种9L^lvc细胞后成瘤率100％。活体成像显示细胞接种后第7天到第21天肿瘤呈逐渐增大趋势。组织切片结果显示肿瘤与周围脑组织边界较清楚，未见包膜；瘤内新生血管丰富，可见出血。肿瘤组织免疫组织化学GFAP及Vemintin蛋白染色阴性。结论该方法建立的大鼠脑胶质肉瘤模型稳定可靠，符合恶性胶质肉瘤的生物学特征．是理想的脑胶质肉瘤实验研究材料。     

一株能支持造血的人脐静脉内皮细胞系的建立

为了方便研究人脐静脉内皮细胞在造血调控和心血管系统中的作用，利用脂质体介导基因转染的方法，将SV40大T抗原导入原代人脐静脉内皮细胞，建立了至少可传代培养25代的人脐静脉内皮细胞系IEC。免疫细胞化学染色显示IECⅧ因子阳性。流式细胞术检测I型荆豆凝集素结合率为97%。染色体分析表明IEC细胞内染色体结构和数目发生了改变。体外实验表明，IEC具有支持造血的能力。     

胚胎干细胞专利相关信息分析

目的对1985年至2004年12月的胚胎干细胞相关专利信息进行详细阅渎和分析,了解国内、外胚胎干细胞相关专利的情况。方法以干细胞及胚胎干细胞为主题词,以德文特(Der- went)数据库为背景,对多个专利数据库进行检索、筛查和分类,建立胚胎干细胞专利数据库。从专利的角度入手,对数据库中的630篇国际及44篇国内胚胎干细胞专利文献进行分类分析。结果胚胎干细胞研究领域的专利申请情况总体呈上升趋势;申请范围主要涉及动物细胞或组织、修饰的细胞、脊椎动物新品种及未分化的人类/动物细胞等方面,国际(13.4%)和国内(20.9%)申请均以涉及动物细胞或组织的占据首位;国内申请中涉及未分化的人/动物细胞的专利较多(19.8%);转基因动物、细胞建系及核移植技术相关的专利申请是胚胎干细胞相关专利中的重要组成部分。结论国内外胚胎干细胞相关信息的分析表明,目前我国在胚胎干细胞研究申请专利方面相对比较宽松,我们应该在涉及胚胎干细胞的分离、建系、在基因工程及细胞组织工程学方面的用途和方法以及胚胎干细胞在药物筛选过程中的用途等方面集中投入力量,争取有新的突破。