杭州市肠道病毒71型的分离与VP1区域序列分析

目的了解杭州市2008年和2011年肠道病毒71型(EV71)流行株VP1基因特征。方法手足口病患者咽拭子、粪便等样本先通过荧光RT-PCR方法初筛,然后选部分肠道病毒71型阳性样本进行病毒分离、培养;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定上述培养物,并扩增VP1区全长基因和序列测定,利用生物信息学软件对序列进行分析,构建基因进化树。结果从2008年和2011年手足口样本中分离到EV71阳性毒株各4株,VP1基因全序列测定结果显示其与C4亚型代表株核苷酸和氨基酸的相似性最高,分别为93.8%～95.2%、99.0%～99.7%。结论杭州市手足口病患者感染EV71病毒的流行株属C基因型的C4亚型。     

杭州市3所小学风疹暴发和应急接种效果调查

对１９９６年杭州市３所小学的风疹暴发，和应急接种冻干风疹减毒活疫苗的效果进行了调查。结果显示：病儿风疹ＩｇＭ抗体检出率与采血时间密切相关，以出疹后５～２８天检出率最高（９７７３％）；风疹血凝抑制（ＨＩ）抗体临界滴度，显性感染为１∶１６，隐性感染为１∶２５６；抗体阴性的未接种疫苗者，经过风疹暴发，显性和隐性感染率分别辊为１３７９％、４４８３％，显性与隐性感染之比为１∶３６２５；暴发前抗体阳性率４０％，暴发后升至８８２４％，提示人群风疹抗体阳性率＞９０％可阻断风疹传播。抗体阴性者接种风疹疫苗后抗体全阳转，几何平均滴度倒数（ＧＭＲＴ）为２１８６９。风疹罹患率接种组和未种组分别为５８３％、２７６１％，疫苗保护率为７８８８％。     

杭州市2007年流行性腮腺炎病毒分离株的基因型分析

目的：了解杭州地区腮腺炎病毒流行株基因型分布情况。方法：对杭州地区2007年腮腺炎病毒分离株SH基因测序后分型,测序结果与其他基因型参考株进行同源性比较,构建SH基因亲缘进化树。结果：杭州地区2007分离株病毒属于F基因型,与浙江株EF102876、EF102880相似性分别为99.3%、96.7%;与基因型代表株Z77158（兰州）、Z77160（上海）核苷酸相似性分别为98%、94.6%;与目前使用的疫苗株D90232（Jeryl Lynn）相似性为84.9%。结论：从本次分离株来看,杭州地区流行的为F基因型,未发现基因型间变异,但与上海株之间存在较大的型内差异。     

杭州市一株单纯疱疹2型病毒株的分离鉴定

目的 建立一种能够对样本中的单纯疱疹病毒(Hsv)进行准确鉴定分型的方法,并从生殖器疱疹(GH)患者皮损的水疱液中分离出1株HSV-2.方法 从1例GH患者病变部位采集样本,样本接种Vero-E6细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物,提取病毒感染物的基因组.根据特异性PCR对分离出的病毒进行分型鉴定.结果 分离的毒株引起Vero-E6典型细胞病变,病变细胞圆缩、融合.型特异性PCR反应及l%琼脂糖凝胶电泳鉴定结果表明,扩增出的片段大小约为183 bp,与预期的HSV-2型特异性片段长度相符,且与数据库的比对结果显示相似性为100%.结论 通过细胞分离培养和特异性PCR分型鉴定,能够实现对样本中的HSV的准确分型鉴定.     

国产风疹疫苗的近期和远期效果评价

目的 评价国产ＢＲＤⅡ株风疹减毒活疫苗的安全性和效果。方法 观察风疹疫苗接种后临床反应,抗体动态变化和发病情况。结果 该苗接种后低、中度发热发热率分为１８．７％和４．１２％,未发现其他严重反应。用不同代次（ＤⅡ－２８、ＤⅡ－２６）液体风疹疫苗不同年龄组的抗体阳转率为９６．６７％～１００％。ＧＭＲＴ为５９．８２～８４．６４,各年龄组或疫苗组的差异无显意义。用冻干风疹疫苗免疫８～１１月、 、２～３岁     

腮腺炎疫苗分别与甲肝、白破、风疹疫苗联合免疫的效果观察

目的;观察腮腺炎疫苗分别与甲肝、白破、风疹疫苗同时接种的临床反应和免疫效果。方法：设两种疫苗同时接种组和单苗接种组,比较其副反应和血清抗体水平。结果：各接种组临床反应都轻微,两苗同时接种组与相应的单苗接种组免前免后同种抗体阳性率或保护率和GMT,以及免后抗体阳转率,其差异均无显著意义（均P＞0．05）。结论：腮腺炎疫苗与甲肝、白破、风疹减毒活疫苗之一同时接种未发现加重反应和相互干扰免疫应答,可以同时接种。     

BRD Ⅱ 株风疹减毒活疫苗接种10～11年后的免疫持久性

对ＢＲＤⅡ株风疹减毒活疫苗接种后１０～１１年的风疹血凝抑制（ＨＩ）抗持久性和流行病学效果进行了研究。结果表明，风疹疫苗免疫后１０～１１年，ＨＩ抗体阳性率和几何平均滴度倒数（ＧＭＲＴ）分别为９５．９２％（４７／４９）和８２．３５±４。调查同一年级１１７名学生，在观察期（１０～１１年）内１０名接种过风疹疫苗的学生都未患过风疹，而１０７名未接种的学生却有３４名（３１．７８％）有风疹史。另调查４０名接种者也都无风疹史。风疹疫苗的保护率１００％。在观察期内１６名未接种风疹疫苗的易感者，风疹显性和隐性感染率分别为１８．７５％和３１．２５％；５０名风疹疫苗免疫成功者的隐性感染率为３６％。风疹隐性感染对保持和巩固疫苗接种人群的免疫水平起重要作用。     

2006年杭州市麻疹病毒分离株N和H序列分析

目的:分析杭州市2006年杭州麻疹病毒分离株N与H核酸序列变异情况。方法:用RT-PCR对6个临床急性期麻疹病人的咽拭子标本及其麻疹病毒分离株的(Vero-slam细胞培养)扩增核蛋白(N)和血凝素蛋白(H)基因片段,并对本次分离株的核酸序列与近期分离株和疫苗株进行对比。结果:从标本中直接检测N片段基因的结果与细胞培养病毒的结果完全相符。本次分离株N片段基因与分离株浙江CHN/9.05/7、浙江CHN/02/2相似性分别为98.96%、96.04%,与疫苗株Shanghai-191、Changchun-47相似性均为94.58%;分离代表株H基因片段与分离株浙江CHN/02/2、浙江CHN/9.05/7相似性分别为99.59%、99.07%,与疫苗株Shanghai-191、Changchun-47相似性分别为95.14%、95.04%。结论:RT-PCR直接从标本中检测相关基因片段可作为分子病毒学研究的方法,但经细胞培养增殖后效果更好。麻疹病毒尽管遗传稳定,但还是存在着变异。     

大肠埃希菌LEE毒力岛的临床流行病学调查

目的：了解携LEE毒力岛大肠埃希菌在杭州不同人群中的流行状况。方法：应用PCR技术检测不同临床来源的大肠埃希菌菌株的LEE毒力岛,并对检出的intinmin基因3’端部分以PCR法和限制性酶切分析法进一步分型,结果：在杭州市区2周岁以下的腹泻婴幼儿中,携LEE毒力岛的大肠埃希菌的检出率高达20．0％,而在2岁以上的腹泻人群中检出率仅为3．0％,检获的大肠埃希菌LEE毒力岛的intimin基因以β型为主（占45．0％）,并有20．0％不能按本PCR方法分型,限制酶切分析表明,β型可进一步分为2个亚型,本文分离菌株的γ型intimin基因与EHEC O157：H7 933株的γ型intimin基因酶切图谱差异较大,检获的携LEE毒力岛的大肠运往希菌菌株中,仅有1／5能用国内目前的致泻性大肠埃希菌诊断血清确定O抗原。结论：携LEE毒力岛大肠埃希菌为杭州市致婴幼儿腹泻的主要细菌性病原。LEE毒力岛的检测应成为EPEC的诊断和流行病学调查主要手段。     

志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株的毒力因子检测

目的 研究志贺毒素阴性的大肠埃希菌0157血清群菌株可能携带的毒力因子,以确定其致病群类型。方法 对8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌0157血清群菌株及分离自美国和我国江苏的EHEC0157菌株,应用PCR技术检测stx、hly、EPEC和EHEC共有eaeA、EHEC特异的eaeA,ELISA检测ETEC的耐热和不耐热解毒素,HEP－2细胞粘附试验测定细菌与上皮细胞的粘附能力,并进行菌株质粒图谱分析。结果 8株志贺毒素阴性的大肠埃希菌0157菌株均未检出stx、hly、EHEC特异的eaeA以及ETEC的耐热和不耐热肠毒素,仅其中2株菌株携有EPEC和EHEC共有eaeA,另3株菌株对HEP－2细胞有集聚粘附能力。结论 目前我国检获的大肠埃希菌0157菌株其致病类型表现为多样性,部分菌株尚不能明确其毒力因子。EHEC0157的鉴定必须重视毒力因子的检测。